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国家自然科学基金(31270194): 作品数：9 被引量：23H指数：3; 相关作者：刘光清陈宗艳李传峰缪秋红朱杰更多>>; 相关机构：中国农业科学院上海兽医研究所甘肃农业大学西北农林科技大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

新型兔出血症病毒(RHDV2)VP60蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：3: 2016年; 为了表达含有新型兔出血症病毒(RHDV2)衣壳蛋白VP60基因的重组蛋白,利用合成的含VP1基因的质粒pUC-VP60为模板,通过PCR扩增获得VP60基因,并将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,构建重组质粒pET-32a(+)-VP60。转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导表达VP60重组蛋白,纯化重组蛋白并免疫小鼠,制备抗VP60的多克隆抗体。Western-blot分析和间接免疫荧光试验检测结果显示,该抗体具有良好的免疫原性。本试验成功制备的VP60蛋白及多克隆抗体,为预防RHDV2及RHDV2 VP60的功能研究奠定了良好基础。; 谭永贵朱杰郭慧敏吴巧梅陈宗艳李传峰刘光清; 关键词：原核表达多克隆抗体

兔出血症病毒遗传与变异的分子基础被引量：3: 2013年; 兔病毒性出血症是由兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)引起的一种急性、高度致死性传染病,病死率高达100%。近年来,由于该病毒血凝性、抗原性的变异,病毒感染宿主增多,不仅对该病的防控造成了一定的威胁,更造成了严重的经济损失。国内外研究学者对该病毒的基因组结构、基因组编码的产物和功能,病毒的宿主和受体以及病毒变异等相关进行了大量深入的研究和分析,为该病毒的防控和治疗提供了技术基础。本文就RHDV遗传与变异的分子基础作一综述,希望能为深入了解该病毒,以及日后的防控提供一定的理论支持。; 缪秋红李传峰陈宗艳孟春春刘光清; 关键词：兔出血症病毒分子基础

兔出血症病毒NSP1的原核表达及亚细胞定位: 2014年; 为了研究兔出血症病毒非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NSP1)的生物学特性,构建了含有NSP1基因的原核重组表达质粒pGEX-NSP1和与增强型绿色荧光蛋白融合表达的真核重组表达质粒pEGFP-NSP1;原核诱导表达NSP1蛋白,并对其进行纯化;同时利用脂质体介导方法将真核重组表达质粒瞬时转染兔肾细胞系,4,6-二脒基-2-苯基吲哚染细胞核后激光共聚焦观察NSP1在细胞内的表达和亚细胞定位情况。结果显示,原核诱导表达了含有GST标签的GST-NSP1蛋白,形成包涵体,大小约42ku;并且NSP1与增强型绿色荧光蛋白融合的蛋白定位于细胞质内。试验结果为深入探讨NSP1的生物学功能奠定了基础。; 缪秋红朱杰李传峰梁瑞英陈宗艳孟春春刘光清; 关键词：兔出血症病毒原核表达亚细胞定位

一种新型鸭呼肠孤病毒SYBR GreenⅡ荧光定量PCR方法的建立被引量：6: 2016年; 该研究旨在建立一种快速、敏感和特异性检测新型鸭呼肠孤病毒（Novel duck reovirus,NDRV）的荧光定量PCR诊断方法。本实验以感染新型鸭呼肠孤病毒的鸭组织RNA提取物为模板,根据Gen Bank数据库中呼肠孤病毒S1基因全序列,设计合成了一对特异性引物,PCR扩增基因片段,将其克隆至p ET-30a载体,重组质粒测序并进行同源性分析;以阳性质粒为模板,建立SYBR Green II荧光定量PCR检测方法,并进行敏感性和特异性检测。经测序证实扩增片段与预期目的片段相符,所建立的SYBR Green II荧光定量PCR检测S1的反应在101～108 copies/u L之间具有良好的线性关系,反应的检出下限为10 copies/μL,而H5型禽流感病毒、H9型禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒、C型鸭肝炎病毒、新城疫病毒、鹅细小病毒、鸭瘟病毒等病毒的检测为阴性,表明该方法敏感、特异。本研究成功建立了SYBR Green II荧光定量PCR检测新型鸭呼肠孤病毒的方法,为新型鸭呼肠孤病毒致病机制和机体免疫保护机制的研究提供了技术平台。; 丁明洋戚伟强陈宗艳朱杰吴巧梅缪秋红李传峰吴润刘光清; 关键词：新型鸭呼肠孤病毒荧光定量PCR 熔解曲线

新型兔出血症病毒研究进展被引量：4: 2016年; 兔出血症病毒属于杯状病毒科,兔病毒属的成员之一,能够引起家兔的典型兔病毒性出血症。2010年,研究学者首次在法国发现一例非典型兔出血症疫情,该病原与经典兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)基因序列差异明显,被称为RHDV2。研究发现该病原能够与经典RHDV发生部分交叉免疫保护,该病原能够感染幼龄家兔而且是唯一一个能够跨物种感染的兔病毒属成员。该病的迅速传播,严重威胁了以兔为中心的生态平衡。目前,该病毒尚未在国内有报道,但是不排除潜在的隐性感染。因此,对该病原的分析研究对于控制该病原的传播具有非常重大的意义。; 谭永贵缪秋红吴巧梅朱杰郭慧敏刘光清

北京鸭Mx基因克隆及其在鸭呼肠孤病毒感染的鸭胚成纤维细胞中的表达分析被引量：1: 2016年; 本试验旨在研究北京鸭Mx基因的结构及功能。利用干扰素诱导剂Poly（I∶C）诱导鸭胚成纤维细胞（DEF）,提取细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增北京鸭Mx基因全长编码区序列,并观察其在感染了鸭呼肠孤病毒（DRV）的DEF中的动态表达情况。北京鸭Mx基因序列分析结果显示,该基因编码区全长2 166bp,编码721个氨基酸残基。通过与GenBank中已登录的脊椎动物Mx基因进行核苷酸系统进化树分析,结果显示北京鸭Mx基因与野鸭Mx基因关系最近。北京鸭Mx序列与其他动物基因序列的比对结果显示,核苷酸同源性为47.8%~99.8%,氨基酸同源性为47.9%~99.4%。DRV孵育DEF后,Mx呈波动性表达。结果表明,本试验成功克隆了北京鸭Mx基因,预测分析证实其编码的蛋白具有脊椎动物Mx蛋白共有的结构特征,北京鸭Mx蛋白全基因的获得为下一步研究禽类Mx蛋白的抗病毒活性、作用机制及干扰素的监测奠定了基础。; 丁明洋陈宗艳吴润刘光清; 关键词：MX基因北京鸭抗病毒活性

犬瘟热病毒H基因的序列分析被引量：2: 2017年; 【目的】探索犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)基因的遗传变异情况,为CDV的防控提供理论依据。【方法】收集2014-2015年流行于上海和安徽两地的CDV野毒株,用RT-PCR方法克隆其血球凝集素蛋白基因(H),从分子水平上讨论CDV H基因的流行规律、遗传进化特性和变异情况。【结果】分离的5株CDV之间H基因核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为97.5%~99.9%和97.5%~99.2%,其与CDV疫苗株CDV3和Onderstepoort H基因核苷酸的同源性为90.9%~99.9%,氨基酸的同源性为90.4%~99.6%。进化树分析结果表明,分离到的5株CDV野毒株均属于亚洲Ⅰ型,与大部分的亚洲Ⅰ型处于同一分支。CDV H基因有9处潜在的天冬氨酸糖基化位点;H基因整体的同义突变概率与非同义突变概率的比例,即ds/dn=5.887 0。【结论】选择压力并未作用于分离到的CDV毒株,而是在中性选择作用下进化的。; 李丹丹戚伟强李传峰刘柱陈宗艳张淼涛刘光清; 关键词：犬瘟热

稳定表达兔出血症病毒VPg蛋白RK-13细胞系的构建: 兔病毒性出血瘟病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)为单股正链RNA病毒,属于杯状病毒科(Caliciviridae)兔病毒属(Lagovirus).该病毒可使兔发生急性、败血...; 朱杰谭永贵郭慧敏缪秋红孟春春李传峰陈宗艳刘光清; 关键词：RHDV VPG

人工构建能够在兔源细胞中增殖的兔出血症病毒突变株: 通过定点突变RHDV衣壳蛋白表面高度变异区,构建了含突变位点RGD的RHDV基因组全长重组质粒pRHDV。然后,利用BSR细胞进行拯救。IFA、Western blot、RT-PCR和透射电子显微镜检测结果均证明成功拯救...; 朱杰郭慧敏谭永贵缪秋红孟春春李传峰陈宗艳刘光清; 关键词：RGD 体外培养; 文献传递

稳定表达兔岩藻糖基转移酶RK13细胞系的建立: 2015年; 为了构建稳定表达兔岩藻糖基转移酶(fucosyltransferase,FUT2)的RK13细胞系,本研究将FUT2基因编码序列插入到慢病毒载体p LOV-GFP-3Flag中,构建了p LOV-3Flag-FUT2重组质粒。将p LOV-3Flag-FUT2与包装质粒ps PAX2和外膜质粒p MD2.G共转染293T细胞,获得重组病毒样颗粒。用含病毒样颗粒的细胞培养上清液感染RK13细胞,并通过嘌呤霉素筛选、纯化,获得稳定表达FUT2的细胞系,命名为RK-FUT2细胞。连续培养10代后,利用PCR、RT-PCR和Western blot方法鉴定,结果表明,RK-FUT2细胞系能够稳定表达兔岩藻糖基转移酶。该细胞系为研究FUT2在兔病毒性出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)感染过程和致病机制中的作用提供了有力工具。; 朱杰缪秋红郭慧敏谭永贵李传峰孟春春陈宗艳刘光清; 关键词：兔病毒性出血症病毒

国家自然科学基金(31270194)

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