广东省自然科学基金(8451051501000580)
- 作品数：6 被引量：12H指数：3
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- RelB shRNA慢病毒感染小鼠骨髓树突状细胞的免疫学效应被引量：2
- 2011年
- 背景:沉默树突状细胞发育成熟的关键基因核因子кB/RelB可构建新型致耐受树突状细胞?目的:探讨RelB shRNA转染小鼠骨髓树突细胞的生物免疫学功能的影响。方法:利用重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组白细胞介素4联合诱导小鼠骨髓树突状细胞;慢病毒载体将RelBshRNA转染致小鼠骨髓树突细胞后,分为未成熟树突状细胞、脂多糖刺激成熟、RelB基因沉默及脂多糖刺激RelB沉默的4组树突状细胞进行观察。结果:体外培养第6天脂多糖刺激组细胞表面可见大量细长的类似树枝的突起,其他3组细胞形态特征相似,呈圆形、皱缩状态,这3组细胞表面MHC-II类分子、CD86和CD40分子表达水平相当,但低于脂多糖刺激组;3组混合淋巴细胞反应中刺激T细胞增殖能力差异无显著性意义(P>0.05),但均较脂多糖刺激组显著降低(P<0.01);RelB基因沉默的树突状细胞分泌Th1细胞因子γ-干扰素和白细胞介素2的能力较低,分泌Th2白细胞介素10和白细胞介素4的能力较高(P<0.01),Th1/Th2细胞因子的比例与未成熟树突状细胞类似。说明RelBshRNA经慢病毒转染骨髓源性树突状细胞后,在细胞形态、表面分子表达、免疫学功能等方面均具有与未成熟树突状细胞相似的特点,且不能被脂多糖刺激成熟。
- 谢金敏包杰董瑞强杨明温浩
- 关键词：树突状细胞未成熟
- RelB shRNA慢病毒感染小鼠骨髓树突细胞的免疫学效应观察被引量：3
- 2009年
- 目的探讨RelB shRNA慢病毒感染对小鼠骨髓树突细胞(DC)的生物免疫学功能的影响。方法构建小鼠RelB shR-NA慢病毒载体。取小鼠股骨和胫骨的骨髓,采用重组粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组白细胞介素4(rmIL-4)联合诱导小鼠骨髓DC。实验共分两组:对照组(小鼠骨髓未成熟DC组)和慢病毒感染组(RelBshRNA慢病毒感染的小鼠骨髓DC组)。两组DC均培养6d,经小鼠CD11c+免疫磁珠纯化,采用流式细胞仪检测DC表面MHC-Ⅱ、CD86和CD40的表达。取小鼠脾脏,收集T细胞。将两组DC与T细胞混合,按不同比例(1∶40、1∶20、1∶10和1∶5)设4个亚组,用MTT法检测T细胞增殖,细胞因子液相芯片联合试剂盒检测Th1类细胞因子(IL-2和IFN-γ)和Th2类细胞因子(IL-4和IL-10)的表达。结果RelB shRNA慢病毒感染DC的表面分子MHC-Ⅱ、CD86和CD40均呈低水平表达,其刺激异基因小鼠T细胞增殖的能力,以及Th1、Th2类细胞因子分泌水平与未成熟DC相当。结论RelB shRNA慢病毒感染的小鼠骨髓DC呈现出未成熟DC的表型和免疫功能。
- 包杰郑磊王前熊石龙裘宇容曾方银李娟
- 关键词：RNA干扰树突细胞
- 蛇毒纤溶酶及自体内皮祖细胞移植对急性心肌缺血/再灌注后心功能的影响被引量：3
- 2009年
- 目的观察成年白兔自体内皮祖细胞悬液及蛇毒纤溶酶对急性缺血/再灌注所引起心肌损伤的影响和心功能的变化。方法取28只成年新西兰白兔,随机分为4组:对照(A)组(仅注射培养液)、细胞移植(B)组(注射自体内皮祖细胞)、蛇毒纤溶酶(C)组(仅注射蛇毒纤溶酶)、蛇毒纤溶酶+细胞移植(D)组(注射蛇毒纤溶酶和自体内皮祖细胞)。密度梯度离心法分离兔外周血单个核细胞,以EGM-2培养基培养7d,获得兔外周血内皮祖细胞。结扎兔的左冠状动脉建立急性心肌梗死模型,1h后再灌注。分别经主动脉根部注射自体内皮祖细胞悬液及蛇毒纤溶酶。移植术4周后,通过心脏超声对各组实验兔心功能进行检查、记录并行统计学分析。对各组梗死心肌及周围组织、梗死的心室壁进行HE染色,光镜下观察组织学变化。结果所有实验动物缺血后,心电图表现为ST段抬高,再灌注后,ST段缓慢下降。心动超声指标比较,B、D组心功能明显好于C组,而C组心功能明显好于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。肉眼观察发现D组心室壁略增厚,其余各组变化不明显。HE染色发现,B、C、D组心肌恢复情况好于A组。结论通过主动脉根部注射内皮祖细胞和蛇毒纤溶酶可以提高兔缺血/再灌注损伤心肌的恢复并改善心功能。
- 姜朝新王前郑磊包杰熊石龙
- 关键词：心肌再灌注损伤纤溶酶
- ST段抬高性心肌梗死蛇毒纤溶酶治疗过程内皮祖细胞的变化被引量：4
- 2009年
- 目的研究ST段抬高性心肌梗死患者经蛇毒纤溶酶治疗过程中外周血中循环内皮祖细胞(EPCs)形态、数量的变化。方法选择ST段抬高性心肌梗死(STEMI)患者60例和对照组20例,分别在蛇毒纤溶酶给药前,给药3d用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被培养板,用加入血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的RPMI-1640培养基培养细胞。用激光共聚焦显微镜初步鉴定DiL标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素I双染色阳性细胞为EPCs;相差显微镜分析细胞形态数量变化和集落形成单位的数量。结果ST段抬高性心肌梗死患者给予蛇毒纤溶酶治疗3d后EPCs数目较治疗前明显增加,7d有所下降,但仍高于对照组,但给药前后细胞集落形成单位的数量并无变化。结论ST段抬高性心肌梗死患者给予蛇毒纤溶酶治疗后,可引起EPCs数量的增加。
- 姜朝新王前郑磊包杰
- 关键词：内皮祖细胞ST段抬高性心肌梗死纤溶酶集落形成单位
- 核转录因子RelB抑制途径对骨髓树突状细胞表面分子表达的影响研究被引量：3
- 2010年
- 目的探讨核转录因子RelB抑制途径对小鼠骨髓树突状细胞(bone marrow dendritic cells)的表面分子表达的影响,为致耐受树突状细胞的研究提供新方法。方法 rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导培养体系培养小鼠骨髓树突状细胞,免疫磁珠方法纯化;用慢病毒载体制备RelB shRNA慢病毒,与小鼠骨髓树突状细胞共培养,流式细胞术观察树突状细胞表面分子MHC-II、CD86和CD40的表达,设LPS-DC对照组、未处理组和LPSRNAi RelB DC组。结果核转录因子RelB抑制的树突状细胞表面分子MHC-II、CD86和CD40均低水平表达,显著低于成熟DC表面分子的表达(P<0.05),且经LPS刺激后(LPS RNAi RelB DC)DC表面上述三类分子的表达水平仍显著低于LPS-DC组(P<0.05),与未处理组(immature DC)表面分子表达水平相当。结论核转录因子RelB抑制的骨髓树突状细胞表面分子表达水平低,呈现出致耐受的树突状细胞的特点,是致耐受树突状细胞研究的一种新方法。
- 包杰王前郑磊熊石龙姜朝新裘宇容
- 关键词：RELB慢病毒树突状细胞免疫耐受
- 抑制小鼠骨髓树突状细胞RelB基因诱导免疫耐受的体外研究被引量：1
- 2010年
- 采用rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导培养小鼠骨髓树突状细胞(bone marrow dendritic cells),经免疫磁珠方法纯化;利用慢病毒载体制备RelB shRNA慢病毒,与小鼠骨髓树突状细胞共培养,经流式细胞术观察树突状细胞表面分子MHCⅡ、CD86和CD40的表达;采用CD3+免疫磁珠分离纯化小鼠T细胞;分别采用四唑蓝(MTT)比色法和液相芯片法检测异基因T细胞增殖的程度以及Th1/Th2细胞因子的分泌水平。此外,实验设LPS-DC组、未处理组和LPS RNAi RelB DC组。发现核因子RelB抑制的树突状细胞表面分子MHCⅡ、CD86和CD40均低水平表达,显著低于LPS-DC表面分子的表达(P<0.05),且该DC经LPS刺激后(LPS RNAi RelB DC)表面上述3类分子的表达水平仍显著低于LPS-DC组(P<0.05),与未处理组(immature DC)表面分子表达水平相当。其刺激异基因小鼠T细胞增殖的能力和Th1/Th2分子的分泌水平与未成熟DC组相当。表明抑制核因子RelB的骨髓树突状细胞在体外具有诱导T细胞免疫耐受的能力,是一种新型的致耐受树突状细胞研究方法。
- 包杰王前郑磊熊石龙裘宇容
- 关键词：RELB基因抑制树突状细胞免疫耐受
