山东省自然科学基金(ZR2012HM002)
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 相关作者：孙念峰胡三元范鲁峰刘占鳌黄文柏更多>>
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- 功能性自组装纳米多肽水凝胶负载脂肪间充质干细胞的研究被引量：2
- 2015年
- 目的观察功能性自组装多肽的理化性质、自组装成水凝胶特性及对细胞进行三维培养。方法合成RADA、RGD、KLT3种多肽并制备RAD／KLT!RGD多肽混合溶液，盐溶液诱发多肽溶液自组装成水凝胶。原代培养脂肪间充质干细胞并对其进行鉴定，使用水凝胶对其三维培养来观察其在水凝胶中的生长，并设置RAD／KLT水凝胶组做对比。结果多肽溶液成功自组装成水凝胶，干细胞在三维培养中迁移、分化并有成管腔的趋势，RAD／KLT／RGD水凝胶[（87．75±4．79）个细胞／视野]较对比组[（65．50±6．25）个细胞／视野]黏附生长了更多的细胞（P〈0．05）。结论RAD／KLT／RGD功能性自组装纳米多肽水凝胶是一种更为优良的组织工程框架材料。
- 刘占鳌黄文柏周冠洲范鲁峰邵闻冲胡三元孙念峰
- 关键词：水凝胶
- 磁性金纳米基因载体的制备及结合DNA研究
- 2013年
- 目的制备1种高分子材料聚乙烯亚胺（PEI）修饰的磁性金纳米粒子作为新型基因载体，观察其表征及结合DNA的能力。方法应用原位合成法合成稳定的复合磁性金纳米微粒（Au-MP-PEI）,将适量FeCl3和FeS04制备纳米磁颗粒（MP-CA）分散液，加人适量PEI溶液及氯金酸（AU-C14 ·3H20）溶液沸腾制得Au-MP-PEI;通过透射电镜观察磁性金纳米粒形态，并检测该纳米粒的粒径及电位分析;采用原液及稀释1 倍的纳米载体进行磁性金纳米载体-DNA的结合实验。结果对PEI包敷的纳米磁颗粒（MP-PEI）做磷钨酸染色后电镜扫描可见每1个团聚体都有数个纳米颗粒构成,笼罩在薄薄一层灰黑色分子下，大小在90 nm左右，而在磁性金纳米颗粒电镜照片中磁颗粒表面可见较多黑色点状颗粒，此即为合成的胶体金。通过不同浓度的金磁纳米载体凝胶阻滞电泳证明磁性金纳米原液能将DNA完全结合。结论成功制备粒径均一的磁性金纳米粒子作为新型基因载体，并且凝胶电泳实验证明该基因载体对DNA具有完全结合的能力。
- 孙念峰徐伯栋胡三元田爱玲钟孝斌孟庆义王瑞华刘兆轩
- 关键词：DNA
- 传代扩增后的脂肪来源间充质干细胞向内皮细胞分化的研究被引量：1
- 2014年
- 目的 观察脂肪来源的间充质干细胞（ad-MSCs）在经过传代扩增后诱导内皮细胞方向的分化能力.方法 使用胶原酶消化法分离培养原代脂肪间充质干细胞,检测其生长特性并用流式细胞术对其进行了联合免疫表型鉴定,诱导其多向分化来确定其干细胞特性.扩增后的高代次（P5）脂肪间充质干细胞被用于进行3种条件下的诱导内皮细胞方向分化（基础培养基＋血管内皮生长因子（VEGF）、内皮细胞支持液＋VEGF、仅用内皮细胞支持液）,诱导时间为12 d,之后用流式细胞术检测CD31并用免疫细胞化学法检测Ⅷ因子表达来评估分化效果.结果 我们成功地进行了脂肪间充质干细胞的原代培养,原代培养的细胞表现出了成纤维细胞样形态,在免疫表型和多向分化能力都表现出了干细胞特性.经过仅12 d的诱导内皮细胞分化后,EGM2-MV＋ VEGF组开始表达CD31和Ⅷ因子,而另外两组未发现表达.结论 传代扩增后的高代次的脂肪间充质干细胞仍有较强的内皮细胞分化能力,EGM2-MV＋ VEGF能更高效地促进其向内皮细胞分化.
- 刘占鳌黄文柏周冠洲范鲁峰邵闻冲胡三元孙念峰
- 关键词：间充质干细胞内皮细胞分化
- 抗凋亡Bag-1基因RNA干扰载体构建及内源性筛靶研究
- 2012年
- 目的构建Bag-1短发卡RNA（shRNA）干扰载体并通过内源性筛靶实验检测Bag-1基因mRNA和蛋白的表达，筛选出最佳的干扰靶序列。方法应用干扰技术构建Bag-1shRNA干扰载体，在细胞转染预实验中将构建好的带有绿色荧光蛋白的质粒转染Lovo细胞，通过观察绿色荧光蛋白来判断转染的效率，分别应用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot法检测Bag-1在LoVo细胞中的表达。在shRNA干扰序列筛选实验中，通过定量PCR和Westernblot法来检测构建的干扰载体在LoVo细胞中的表达。结果重组质粒分别经双酶切分析，琼脂糖凝胶电泳鉴定可见清晰地切出与Bag-1及pGPHl／GFP／Neo载体大小相符的片段并与DNAMarker相符。用带绿色荧光基因的pGPHl／GFP／Neo-shNC质粒转染LoVo细胞，在转染后的第24、48及72小时分别观察到逐渐增强的绿色荧光蛋白的表达。分别应用RT—PCR和Westernblot法检测Bag-1在LoVo细胞中的表达，可见Bag-1在LoVo细胞中的mRNA和蛋白表达水平均较高。在Bag-1有效shRNA干扰序列筛选实验中，综合定量PCR及Westernblot内源筛靶结果，筛选出Bag-1-homo-825作为最佳干扰靶序列。结论成功构建针对小鼠Bag-1基因的特异性shRNA质粒，获得稳定转染的结肠癌Lovo细胞株，结果证明所构建的pGPHl／GFP／Neo—Bag-1-homo-825作为最佳干扰靶序列，显著抑制Lovo细胞Bag-1mRNA和蛋白的表达。
- 孙念峰田爱玲徐伯栋田玉玲胡三元
- 关键词：RNA干扰BAG-1基因基因治疗结肠癌
