山东省科技攻关计划(2004GG2202150)
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
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- 相关机构：山东省医药生物技术研究中心卫生部更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 中枢神经系统感染性疾病病原体检测芯片的研究
- 2008年
- 目的:构建一种用于检测巨细胞病毒(CMV)、风疹病毒(RV)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSVI)、结核分枝杆菌(TB)、EB病毒(EBV)五种病原体的寡核苷酸芯片,用于中枢神经系统疾病的常见病原体的病因学诊断,为临床治疗提供依据。方法:首先根据病原体的特异性蛋白的相关序列设计70 mer寡核苷酸长探针,选择特异性好的探针构建不同种属多种病原体的寡核苷酸芯片,用随机引物方法对靶基因进行生物素直接标记,标记产物与芯片杂交后再与avidin-cy3反应,对杂交阵列洗涤后扫描。采用该寡核苷酸芯片对临床样本进行检测并与和PCR检测方法进行检测比较。结果:通过标准菌株检测证明该检测芯片具有很高的特异性。对临床标本的检测结果表明,该芯片检测体系只需要一次就可以完成对5种常见病原体的检测。与PCR法的检测结果相比,两种检测方法没有显著性差异(>0.05),且一致性较好(Kappa值均大于0.75),其特异度均在95%左右,敏感度均在83%以上。结论:构建的寡核苷酸芯片检测体系具有快速、方便、准确的特点,可以高通量的检测临床样本而无须进行细菌培养,为中枢神经系统重要病原体检测提供了一种有效工具。
- 庞靖祥韩金祥高雪芹潘继红
- 关键词：中枢神经系统疾病寡核苷酸芯片单纯疱疹病毒风疹病毒结核杆菌
- 人巨细胞病毒pp150蛋白片段与MDBP蛋白片段的融合表达及初步应用被引量：3
- 2006年
- 人巨细胞病毒(HCMV)感染是临床上常见的一种病毒性传播疾病,正常人群常无明显的临床症状,而对器官移植患者、免疫力低下及孕妇等人可产生严重的危害。以HCMVAD169病毒株基因为模板,经PCR扩增了编码pp150蛋白片段的UL32基因和编码MDBP蛋白片段的UL57基因,目的基因转化入pMD18-T克隆载体后再经酶切与表达载体pET-11a连接构建出融合基因表达载体,然后转入大肠杆菌BL21,重组大肠杆菌经诱导表达融合蛋白pp150/MDBP。经SDS-PAGE分析,其相对分子量约为27kD,表达量约占菌体蛋白的17.45%,Westernblot鉴定为阳性,ELISA及蛋白芯片检测表明融合蛋白具有良好的抗原性,经过初步应用表明其对血清IgG及IgM的检出率与全抗原相比一致,具有进一步开发应用的价值。
- 郭大东高雪芹韩金祥刘毅张华宁
- 关键词：人巨细胞病毒WESTERNBLOT蛋白芯片
- 70mer长寡核苷酸探针芯片制备、标记方法及杂交条件的优化被引量：4
- 2008年
- 目的优化长片段寡核苷酸芯片制备、探针标记及杂交条件。方法通过直接标记方法优化芯片的点样浓度、点样后的固定方法。探索两种靶基因标记方法,并优化杂交液及各种杂交条件。结果采用70mer寡核苷酸探针,点样浓度在10μmol/L时就可获得满意的荧光强度。探针点样后37℃水合,然后在3600mJ条件下进行紫外交联固定效果最好。样品采用生物素间接标记较CY3直接标记信号强度强,成本相对低廉。优化出的杂交液成分:50%甲酰胺、5×SSC、0.5%SDS,杂交时间为8h,杂交温度为65℃。结论通过此试验优化了制备病原体长探针寡核苷酸芯片的制备方法,样品标记策略和杂交液及杂交温度,为下一步制备多种病原体的寡核苷酸芯片检测系统奠定了基础。
- 庞靖祥韩金祥高雪芹潘继红
- 关键词：寡核苷酸探针基因芯片
- 蛋白质微阵列的制备及其在病原体检测中的应用
- 2007年
- 蛋白质微阵列是近年发展起来的新技术,具有高通量、微型化及自动化等优点,能够高通量地测定蛋白质的存在及其生物活性,也可以测定蛋白质与生物大分子之间的相互作用。本文介绍了蛋白质微阵列的制备方法及其在病原体毒力、耐药性及免疫原性等方面的应用。
- 庞靖祥韩金祥高雪芹
- 关键词：蛋白质微阵列病原体毒力耐药性免疫原性
- 人巨细胞病毒融合蛋白pp150/MDBP二级结构及其抗原表位预测被引量：1
- 2007年
- 用Garnier-Robson和Chou-Fasman方案预测人巨细胞病毒融合蛋白pp150/MDBP的α-螺旋、β-折叠及转角的二级结构,用Kyte-Doolittle及Hopp-Woods亲水性方案预测其B细胞表位。研究结果表明,pp150/MDBP融合蛋白可能含有较少的α-螺旋,但可能含有较多的β-折叠及转角;B细胞识别的表位可能在7-56氨基酸残基或附近以及137-192残基或附近。
- 郭大东高雪芹韩金祥
- 关键词：人巨细胞病毒融合蛋白表位
- 基因重组人巨细胞病毒pp150蛋白片段的原核表达及鉴定
- 2006年
- 目的以人巨细胞病毒(HCM V)AD 169病毒株基因为模板,经PCR扩增了编码pp150蛋白片段的UL 32基因,转入pM D 18-T克隆载体后经酶切与表达载体pET-11a连接,转入大肠杆菌BL 21,重组大肠杆菌经诱导表达pp150蛋白片段。经SDS-PAGE分析,其相对分子量约为21.5 kD,表达量约占菌体蛋白的16.38%,W est-ern b lot鉴定为阳性。表明成功构建了pp150蛋白片段的表达载体,并成功诱导表达了pp150蛋白,为进一步纯化该蛋白奠定了基础。
- 郭大东高雪芹韩金祥刘毅张华宁
- 关键词：人巨细胞病毒原核表达
