兰州兽医研究所所长基金
- 作品数：18 被引量：36H指数：5
- 相关作者：刘湘涛谢庆阁吴润陈豪泰才学鹏更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃农业大学第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：农业部畜禽病毒学重点开放实验室基金国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 偶蹄动物朊蛋白基因变异性和其系统发生关系分析被引量：1
- 2006年
- 目的为明了偶蹄动物PrP基因的结构特征及其变异与结构、功能和朊粒病传染种间屏障的关系以及系统发生关系;方法利用DNAstar和Clustalx程序及treev32软件进行了22种偶蹄动物的43个完整PrP基因序列的同源性分析、多重排比和进化树构建;结果不同种属偶蹄动物的PrP基因完整ORF大小有所差异,范围为768～795bp,可编码255～264个氨基酸的朊蛋白。核苷酸和氨基酸序列的同源性,偶蹄动物间≥88.6%和≥93.3%,反刍动物间≥95.4%和≥96.5%。共发现40个点突变和2个突变区。在N-端柔韧无序“尾”区(25～135)以八肽重复缺失为主,球形结构域区(136～241)以点突变为主,点突变主要簇聚在S1β-折叠前的柔韧无规卷曲区的C-端部分和HCα-螺旋内。氨基酸104～135区和球形结构域区存在有8个高突变位点。已知PrP肽基元和功能位点如芳烃回文序列基元、2个N-连接糖基化位点、2个苏氨酸磷酸化位点、1个酪氨酸硫化位点、形成二硫键的2个半胱氨酸以及GPI锚锚着点丝氨酸为偶蹄动物所共有,各种间变异体的各结构模式非常一致。进化关系分析,可将偶蹄动物PrP基因区分为3大类,反刍动物PrP基因分为3小类。令人意外的是,2个双峰驼PrP基因的进化关系与牛属动物基因同源。结论偶蹄动物的PrP基因是一个保守基因,氨基酸104～135区和球形结构域区内的8个高突变位点可能是影响分子间相互作用、形成朊粒病传染种间屏障的主要位点,物种间各氨基酸变异并不影响PrP的主要结构和功能。
- 吴润陈怀涛谢庆阁
- 关键词：偶蹄动物朊蛋白基因结构特征分子进化
- 牛支原体脂蛋白LppB的多克隆抗体制备及对天然蛋白识别分析被引量：1
- 2023年
- 旨在克隆牛支原体脂蛋白LppB基因,并进行原核表达与纯化,制备其多克隆抗体,研究其对天然蛋白的识别能力。以牛支原体PG45、ZYJ5及GT01株基因组DNA作为模板,PCR扩增LppB基因,测序并比对分析;将合成的pET-30a-LppB质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达产物用Ni-NTA纯化,Western blot方法验证纯化重组蛋白,测定其反应原性;将纯化蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,并测定其ELISA效价,Western blot测定多克隆抗体对牛支原体LppB的识别。结果显示:PCR扩增的LppB基因全长约1860 bp,与预期大小相符;LppB主要为可溶性表达,大小约为74 kDa,经Ni柱纯化后获得纯化蛋白,LppB蛋白具有良好的反应原性;制备出小鼠抗LppB多克隆抗体,ELISA效价为1∶25600,能够识别天然LppB蛋白。本研究成功制备出牛支原体重组LppB蛋白及其多克隆抗体,为LppB功能研究奠定基础。
- 黄志成白宇彤陈胜利李章程兰仕梅李延召刘爽郝华芳刘冠慧储岳峰
- 关键词：牛支原体脂蛋白原核表达多克隆抗体
- 人成熟叠朊在大肠埃希菌中高效表达
- 2006年
- 以含有人叠朊编码基因Prnd的ORF的质粒HoPrnd-T为模板,PCR扩增出成熟叠朊编码基因片段homDpl,并将其插入原核表达载体pGEX-6P-1的EcoRⅠ和XhoⅠ位点之间,构建出重组表达质粒pGEX-homDpl。将pGEX-homDpl电转化到宿主菌株BL21(DE3)中,以1.0 mmol/LIPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示人成熟叠朊被大肠埃希菌高效表达。
- 路伟张杰刘永生卫广森
- 关键词：大肠埃希菌
- 羊朊蛋白基因的克隆和序列分析被引量：6
- 2005年
- 分别从6只羊(3只藏绵羊和3只山羊)全血中提取基因组总DNA,用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出细胞型朊蛋白(PrPC)基因,并克隆到pMD18-T载体。序列分析表明所克隆的羊PrP基因片段大小为771bp,包含了羊朊蛋白基因的完整编码区序列,为包含在单一外显子内的完整开放阅读框,其与国外报道的已知序列基本相同。所克隆的羊PrP基因含5个短而富含G-C的元件,可编码八肽Pro-His-Gly-Gly-Gly-Trp-Gly-Gln或九肽Pro-Gln/His-Gly-Gly-Gly-Gly-Trp-Gly-Gln。这些PrP基因序列相比较,其核苷酸序列和推导氨基酸序列同源性分别在99.0%~100.0%和98.1%~100.0%之间。共发现17个碱基替换,其中6个为同义码替换、11个为异义突变。异义突变中,除SY200301~SY200303的S240P和MY200301的M112T外,其余均位于PrP氨基酸125~228的C-端球形结构区,分别为MY200301的G129S突变、MY200302的T191R突变、MY200303的G127S突变及SY200302和SY200303的H143R和R211G。6个羊PrP基因均为密码子136、154和171的PrPARQ等位基因。
- 吴润谢庆阁刘湘涛陈豪泰
- 关键词：藏绵羊山羊朊蛋白基因DNA克隆
- 鱼精蛋白的研究现状及应用被引量：7
- 2007年
- 蒙学莲郑亚东才学鹏
- 关键词：鱼精蛋白碱性氨基酸氨基酸组成生物学领域精氨酸
- 双峰驼诱导排卵因子活性位序列测定与肽链结构研究被引量：2
- 2002年
- 应用高效液相色谱仪、蛋白顺序仪和傅里叶变换离子回旋共振质谱仪等仪器 ,纯化并测试了公驼诱导排卵因子(OIF)的部分活性序列和降解过程。结果表明 ,公驼OIF是单链多肽 ,分为活性序列和相对稳定固定序列两部分 ,N 端的活性位序仅为 6个残基 :赖氨酸 缬氨酸 丙氨酸 苯丙氨酸 丝氨酸 苏氨酸。该因子的氧化降解过程在冰冻条件下是由氨基酸侧链基团的氧化和肽链的断裂共同引发的。
- 潘光武谢庆阁才学鹏刘湘涛肖昭彭梁仲贾士琴
- 关键词：双峰驼诱导排卵因子降解
- 牛朊蛋白单氨基酸变异体的原核表达
- 2005年
- 应用pGEX原核表达载体构建了牛朊蛋白的1个正常重组蛋白和3个单氨基酸变异体的原核表达质粒,即pGEX-BoPrP(93～241)、pGEX-BoPrP(93～241)(S154N)、pGEX-BoPrP(93～241)(A129V)和pGEX-BoPrP(93～241)(Q234R).经转化E.coli BL21(DE3),均表达了预期大小约为42.4 ku的融合蛋白.在优化的诱导表达条件下,各重组菌可产生表达量占细菌总蛋白量30%～45%的融合蛋白.经免疫印迹检查,所有融合蛋白均可与抗牛单克隆抗体4C11反应.表明,单氨基酸突变并不影响单抗4C11的识别表位.
- 陈建华吴润刘湘涛陈豪泰
- 关键词：氨基酸变异体朊蛋白原核表达质粒表达载体构建蛋白量
- 牛支原体MBOVPG45_0212的原核表达及其免疫原性分析被引量：2
- 2022年
- 为探究牛支原体MBOVPG45_0212蛋白的免疫学功能,以牛支原体基因组DNA为模板,PCR扩增MBOVPG45_0212基因并测序分析;经基因密码子优化后构建重组质粒pET-30a-0212,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,用Ni-NTA纯化目的蛋白,Western-blot验证纯化的重组蛋白与牛支原体不同血清的反应情况;将纯化蛋白免疫小鼠后制备多克隆抗体,Western-blot测定多克隆抗体是否识别牛支原体天然蛋白。PCR结果显示,MBOVPG45_0212基因全长约1 014 bp;pET-30a-0212重组质粒在大肠杆菌中于16℃经0.02 mmol/L IPTG诱导12 h能成功表达大小约43 ku的目的蛋白;纯化蛋白与牛支原体感染血清、免疫血清均能产生特异性反应,免疫小鼠血清效价达到1∶51 200以上,显示重组MBOVPG45_0212蛋白具有良好的免疫原性和反应活性。获得纯化重组MBOVPG45_0212蛋白,并制备其高效价的多克隆抗体,为其后续生物学功能研究奠定了基础。
- 白宇彤黄志成李章程陈胜利兰仕梅李延召刘爽郝华芳储岳峰刘冠慧
- 关键词：牛支原体原核表达多克隆抗体免疫原性
- 藏绵羊朊蛋白基因的原核表达被引量：3
- 2006年
- 从藏绵羊全血中提取基因组总DNA，用所设计的引物以聚合酶链式反应扩增出细胞型朊蛋白（PrP^c）基因。测序分析表明，所克隆的羊PrP^c基因片段大小为771bp，包含了羊朊蛋白基因的完整编码区序列，其与国内外报道的序列基本相同。将目的基因与经EcoRⅠ和XhoⅠ酶切的载体pGEX-4T-1连接后转化宿主菌BL21（DE3），挑选重组阳性菌用IPTG诱导表达，收集不同培养时间的菌液进行SDS-PAGE和Western-blotting。结果表明，PrP基因在大肠杆菌中成功表达，并能被抗牛PrP^c单抗4C11识别。凝胶薄层扫描结果显示，表达蛋白约占菌体总蛋白的309／6～45％，目的蛋白以包涵体的形式存在，包涵体经变性裂解、纯化和复性后得到具有一定生物学活性的目的蛋白。
- 陈豪泰吴润刘湘涛谢庆阁
- 关键词：藏绵羊原核表达
- 双峰驼诱导排卵机理的研究.Ⅱ.双峰驼诱导排卵因子的靶器官及代谢动力学被引量：6
- 2003年
- 应用同位素示踪技术 ,将公驼精清内的诱导排卵活性蛋白 (OIP)经12 5I标记后输入母驼阴道。示踪结果证明 ,OIP经阴道前端主动吸收 ,很快进入血液循环 ,其代谢动力学属于一级吸收二室开放模型 ,吸收速度常数 (ka)为 0 .0 6 7·min-1,吸收半衰期 10 .2 4min ,于 2 3min达峰浓度 (Cmax) 5 .15 μg·ml-1,清除半衰期 (t1/2 k)较长为 72 .6h ;从DEAE DE52 柱上洗脱的活性蛋白吸收后 ,不经过脊髓和卵巢反馈通路 ,而是经血液循环直达脑髅内的靶器官垂体 ,从而引起母驼释放促黄体素 (LH) ,至峰值出现 。
- 潘光武谢庆阁才学鹏汪静邓敬兰刘湘涛潘元青陈北亨
- 关键词：代谢动力学双峰驼诱导排卵因子靶器官同位素示踪技术
