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人IgE Cε2-4蛋白稳定表达细胞株的建立与鉴定: 2008年; 目的建立稳定高表达人IgE Cε2-4蛋白（E24）的工程细胞株，考察E24蛋白与膜受体（FcεRI）的结合。方法从SKO-007细胞中钓取E24基因，分别克隆入真核表达载体pcDNA3．1（＋）（需要在E24基因前加信号肽序列）和pCMV-L载体；瞬时转染293T细胞，利用双夹心ELISA法鉴定转染上清中的目的蛋白；选择表达量相对高的质粒转染CHO细胞，G418筛选获得稳定细胞株；RT-PCR法在转录水平上检测E24基因，ELISA法鉴定稳定株上清中的E24蛋白，流式细胞术检测E24蛋白与FcεRI的结合。结果成功构建了3种真核表达质粒SP-E24-P3．1、SPⅡ-E24-P3．1和E24-PL，瞬时转染293T细胞，上清中的目的蛋白表达量分别为19．1、19．4和8．7μg／ml。以质粒SPⅡ-E24-P3．1转染CHO细胞，经3轮亚克隆获得了2株稳定高表达E24蛋白的细胞株，表达量均超过25μg／ml。RT-PCR可扩增出细胞株中的E24基因；流式细胞术显示E24蛋白可以与FcεRI呈剂量依赖性的结合。结论经筛选获得了2株表达E24蛋白的工程细胞株，且E24可以特异性的结合FcεRI。; 乔春霞郭雷鸣吕明于鸣黎燕冯健男沈倍奋; 关键词：IGE I CHO细胞信号肽

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国家高技术研究发展计划(2007AA022306)