上海市教委科研基金(05BZ37)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
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- RNA干扰PNAS-2后对细胞周期相关基因和蛋白表达的影响
- 2009年
- 目的:研究RNA干扰抑制白血病细胞株U937中PNAS-2基因表达后,对细胞周期相关基因和蛋白质表达的影响。方法:将已构建的靶向抑制PNAS-2的干扰组质粒和对照组质粒分别转染U937细胞;FCM法检测2组间细胞周期的变化;采用基因芯片和蛋白质芯片检测比较2组细胞在基因水平和蛋白质表达水平上的差异。结果:FCM检测结果显示干扰组细胞出现G2/M期阻滞,与对照组比较差异有统计学意义;基因芯片筛选结果提示共有9条与细胞周期相关的基因发生变化,上调6条,下调3条;蛋白质芯片筛选发现有29条与细胞周期相关的蛋白表达发生变化,上调25条,下调4条。结论:RNA干扰抑制PNAS-2基因后,U937细胞周期出现G2/M期阻滞。基因芯片和蛋白质芯片检测结果均显示cyclinA表达上调;p53只有蛋白表达上调,而cyclinB则蛋白表达不变,提示这些变化可能与细胞周期的阻滞有关。
- 肖菲王海嵘陈芳源钟济华韩洁英欧阳仁荣
- 关键词：小分子干扰芯片分析技术
- 利用基因芯片分析RNA干扰PNAS-2后凋亡相关基因表达的变化被引量：2
- 2007年
- 目的:采用基因芯片技术,比较RNA干扰法封闭U937细胞中PNAS-2基因前后,与凋亡有关基因的变化情况,从而了解PNAS-2在凋亡通路中的可能定位。方法:将急性单核细胞白血病细胞株U937分别转染已构建的靶向封闭PNAS-2的干扰质粒组和对照质粒组,合并使用流式细胞仪(FCM)筛选出GFP阳性细胞,并运用半定量PCR及实时PCR方法验证RNAi效果。采用affymetrix u133A 2.0基因芯片技术比较2组细胞间基因表达的差异。进一步通过半定量RT-PCR对其中的2条上调基因(IER3、CCL2)和6条下调基因(CASP8、CD74、VEGF、DNASE2、PRTN3、TERT)的表达情况进行验证。结果:半定量及实时PCR检测结果表明,合并使用G418及FCM筛选后得到的转染细胞在90%以上,干扰质粒组对PNAS-2的抑制率达到70%以上;基因芯片筛选结果提示共有1651条出现上调,1404条出现下调。其中比值≥2倍的基因共有336条,上调114条,下调222条。根据功能分类初步筛选出与凋亡相关基因共22条,上调基因11条,下调基因11条。RT-PCR检测证实基因芯片结果可靠。结论:抑制PNAS-2表达后促进U937细胞凋亡的机制可能与c-Jun过表达、JNK通路的激活及VEGF基因下调有关。
- 肖菲王海嵘钟华韩洁英陈芳源欧阳仁荣
- 关键词：基因芯片RNA干扰PNAS-2细胞凋亡
