国家自然科学基金(30200329)
- 作品数：11 被引量：40H指数：4
- 相关作者：胡迎春霍艳英吴德昌李刚张开泰更多>>
- 相关机构：军事医学科学院重庆医科大学重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- Smad7对Smad2、Smad3、Smad4核转位的抑制作用被引量：11
- 2005年
- 研究人永生化支气管上皮BEP2D细胞中,作为Smad蛋白家族的抑制分子,Smad7对TGF-β信号通路中Smad2、Smad3、Smad4核转位的抑制作用。培养BEP2D细胞,瞬时转染Smad7真核表达载体pCISmad7.neo,TGF-β刺激,提取细胞核蛋白及总蛋白,用Westernblot方法比较瞬时转染Smad7基因前后细胞核中Smad2、Smad3、Smad4蛋白表达的差异。结果,Smad3在TGF-b作用下有明显的核转位;转染Smad7后Smad3、Smad4的核转位显著受到抑制。表明在BEP2D细胞中,Smad7对TGF-β/Smads信号通路的拮抗作用主要通过抑制Smad3的活化、Smad3/Smad4异源复合物的形成及核转位,从而拮抗TGF-β对细胞的生长抑制效应。
- 王莉霍艳英张开泰王莹项晓琼胡迎春余刚李刚米粲吴德昌
- 关键词：SMAD7SMAD2SMAD3SMAD4核转位支气管上皮细胞
- TGF-β1以受体和Smad7依赖的方式活化ERK
- 2006年
- 目的:探讨人永生化BEP2D细胞中TGF-β活化ERK/MAPK通路的机制。方法:用RNA干扰的方法设计siRNAs使人永生化BEP2D细胞中TβRⅡ、Smad7基因沉默,用Westernblot分析TGF-β1诱导的ERK激酶磷酸化的变化。结果:当Smad7表达沉默后,TGF-β1诱导的ERK激酶磷酸化水平显著降低;当TβRⅡ和Smad7表达同时发生沉默后,细胞内TGF-β1诱导的ERK激酶磷酸化水平进一步降低到基础水平以下。结论:TGF-β1以受体和Smad7依赖的方式活化ERK/MAPK通路。
- 何欣蓉霍艳英胡迎春李刚刘敏丽宋博强米璨吴德昌
- 关键词：TGF-Β1SMAD7ERKRNA干扰
- Smad7基因过表达的促增殖作用机制探讨被引量：8
- 2004年
- 目的 研究Smad7过表达使人支气管上皮细胞系增殖能力增强的机制。方法 用Smad7真核表达载体PCISmad7.neo同携带有报告基因碱性磷酸酶的c myc顺式增强子元件pMyc SEAP共转染 ,检测Smad7基因对增殖信号通路的影响。用RT PCR方法 ,检测稳定转染Smad7基因前后永生化及恶性化的人支气管上皮细胞系BEP2D和BERP35T2细胞内c myc、p15、p2 1表达水平的变化 ,调查Smad7基因对TGF β介导的抗增殖基因反应的调控。 结果 报告基因检测结果表明 ,Smad7基因可使参与增殖信号通路的c myc顺式增强子元件活性增强。RT PCR结果表明 ,在稳定转染Smad7基因的细胞中 ,c myc表达上调 ,p15表达降低 ,对TGF β刺激的应答丧失 ,p2 1表达降低。 结论Smad7基因可通过调控TGF β介导的抗增殖基因应答来影响细胞的生长。
- 霍艳英张开泰李邦印徐勤枝段瑞峰胡迎春项晓琼李刚吴德昌
- 关键词：SMAD7基因P21表达人支气管上皮细胞系稳定转染
- 辐射诱发细胞恶性转化时Smad7基因表达对细胞生长抑制效应的调节(英文)被引量：2
- 2004年
- 背景:细胞逃避转化生长因子-β(TGF-β)诱导的对细胞生长、增殖的抑制是许多肿瘤发生的一个重要机制。Smad7是TGF-β信号转导通路的抑制型Smads,它可阻断TGF-β信号在胞浆内的传导,其紊乱是TGF-β信号转导通路紊乱的机制之一。目的:研究在辐射诱发细胞发生恶性转化过程中,Smad7过表达是否可通过抑制TGF-β信号转导通路来拮抗TGF-β对细胞的生长抑制效应。设计:自身对照前瞻性研究。地点和对象:研究在军事医学科学院放射医学研究所完成。实验对象为永生化人支气管上皮细胞BEP2D及辐射诱发恶性转化的人支气管上皮细胞BERP35T2。干预:以外源性TGF-β1作为刺激因子,用Northernblot检测永生化BEP2D及辐射诱发恶性转化的BERP35T2细胞中Smad7基因的表达水平;用Smad7真核表达载体PCISmad7.neo稳定转染永生化及恶性化的人支气管上皮细胞系,筛选G418抗性克隆,用Westernblot加以验证。用MTT法检测Smad7基因转染前后TGF-β对永生化及恶性化细胞的生长抑制效应。主要观察指标:Smad7转染前后BEP2D及BERP35T2细胞Smad7表达水平及TGF-β1作用于Smad7转染前后细胞的增殖能力变化。结果:辐射诱发恶性转化的BERP35T2细胞中Smad7表达水平高于永生化BEP2D细胞,相同浓度的TGF-β1对BERP35T2细胞的生长抑制效应较BEP2D细胞弱;
- 霍艳英王莉张开泰胡迎春项晓琼吴德昌
- 关键词：细胞恶性转化SMAD7基因表达细胞生长肿瘤转化生长因子-Β
- RNA干扰对Smad7基因的抑制作用被引量：2
- 2005年
- 小分子干扰RNA(siRNAs)可以高效、特异地阻断体内同源基因的表达,促进同源mRNA降解,称为RNA干扰(RNAi)。本研究旨在探讨Smad7基因的siRNAs是否能抑制基因的表达。利用RNA干扰技术,设计并合成了针对Smad7基因的siRNAs,用脂质体转染法瞬时转染BEP2D和BERP35T2细胞,用Northernblot法检测RNAi效应;同时设计并合成了绿色荧光蛋白(GFP)的siRNAs,瞬时转染稳定表达绿色荧光蛋白的BERP35T2细胞,检测荧光强度有无改变。结果表明RNA干扰技术能明显抑制Smad7基因的表达,并能显著减弱绿色荧光的表达强度,为进一步研究Smad7基因功能及TGF-β信号转导通路奠定了基础。
- 王莹霍艳英张开泰王莉项晓琼胡迎春李刚米粲吴德昌
- 关键词：RNA干扰小分子干扰RNASMAD7基因基因表达转化生长因子-Β信号转导通路
- Smad7基因对胞外信号调节激酶磷酸化水平的调控被引量：6
- 2005年
- 研究在BEP2D细胞中,作为Smads蛋白家族的抑制分子,Smad7对胞外信号调节的蛋白激酶(ERK1/2或p44/42)磷酸化水平的调控。将Smad7真核表达载体或人工合成的Smad7-siRNA转染BEP2D细胞,TGF-β刺激,通过Western印迹检测Smad7对p44/42蛋白磷酸化的影响。结果在永生化BEP2D细胞中,TGF-β1刺激后5min开始,可以检测到磷酸化的p44/42;到60min达到高峰,之后逐渐降低。细胞转染Smad7,TGF-β作用60min后,p44/42磷酸化水平明显增高;而转染Smad7-SiRNA,TGF-β作用60min后,p44/42磷酸化水平显著降低。p44/42蛋白水平基本上不受TGF-β1刺激及Smad7表达水平的影响。以上结果说明,在BEP2D细胞中,Smad7可参与TGF-β对ERK/MAPK通路的活化作用。
- 霍艳英李刚王莹张开泰何欣蓉刘敏丽项晓琼胡迎春吴德昌
- 关键词：信号调节WESTERN印迹SMADS蛋白基因D细胞酸化水
- BEP2D细胞恶性转化过程中Smad7基因对MAPK信号通路的调控被引量：13
- 2005年
- 背景与目的:Smad7基因是转化生长因子(transforminggrouthfactor-茁,TGF-β)信号通路的抑制分子,有研究表明TGF-β通过活化SMAD通路和ras/MEK/ERK通路来诱导某些基因的表达。本研究旨在探讨在人永生化支气管上皮细胞BEP2D经辐射诱发恶性转化过程中,作为SMAD蛋白家族的抑制分子Smad7是否参与TGF-β对MAPK信号通路的调控。方法:将人工合成的Smad7siRNA及Smad7真核表达载体与pTet-Elk,pTet-Jun反式激活载体、报告基因荧光素酶共转染BEP2D细胞,TGF-β刺激,通过报告基因荧光素酶的表达丰度来检测Smad7对MAPK信号通路的调控。结果:永生化BEP2D细胞中,TGF-β刺激之后,Elk和Jun磷酸化活性升高(PElk=0.033,PJun=0.016);Elk或Jun同Smad7真核表达载体共转染之后,Elk磷酸化活性升高,Jun磷酸化活性降低(PElk=0.017,PJun=0.028);Elk或Jun同Smad7-siRNA共转染之后,Elk磷酸化活性降低,Jun磷酸化活性升高(PElk=0.018,PJun=0.005)。恶性化BERP35T2细胞中,TGF-β刺激之后,Elk磷酸化活性增强(P=0.006),Elk同Smad7siRNA共转染之后,Elk磷酸化活性降低(P=0.000);恶性化细胞中几乎检测不到Jun的活性。结论:在BEP2D细胞发生恶性转化过程中,Smad7基因干预MAPK信号通路,使ERK和JNK磷酸化活性的平衡失调,导致促增殖作用强于生长抑制作用,从而有助于细胞向恶性方向发展。
- 王莉霍艳英张开泰王莹项晓琼胡迎春余刚李刚米粲吴德昌
- 关键词：BEP2D细胞SMAD7
- Activation of extracellular signal-regulated kinase by TGF-β1 via TβRⅡ and Smad 7 dependent mechanisms in human bronchial epithelial BEP2D cells
- 2005年
- Yanying HuoYingchun HuGang LiXinrong HePingkun ZhouDechang Wu
- 关键词：TGF-Β1BEP2D支气管上皮细胞
- 非小细胞肺癌组织中Smad7表达谱的改变被引量：3
- 2005年
- 目的研究在非小细胞肺癌组织中转化生长因子(TGF)-β1信号抑制子Smad7表达水平的变化,探讨Smad7在肺癌发生中的作用。方法收集46例临床肺鳞癌、腺癌标本,用免疫组织化学方法检测肺癌及癌旁组织中Smad7的表达丰度,比较表达差异,并取肿瘤组织检测为阳性的12例鳞癌病例标本,分别提取其癌组织及癌旁组织总蛋白,用Westernblot进行验证。结果肺癌组织中Smad7表达总阳性率为44%(20/46),显著高于癌旁组织17%(8/46()χ2=7.91,P<0.01);其中,鳞癌和腺癌癌组织中Smad7的阳性率分别为60%(12/20)和31%(8/26),癌旁组织中Smad7的阳性率分别为25%(5/20)和12%(3/26)。肺鳞癌组织中Smad7的表达高于癌旁组织(χ2=5.01,P<0.05)。Westernblot验证结果表明,免疫组织化学检测阳性的12例标本癌组织Smad7Westermblot检测均为阳性,其中有7例癌组织Smad7表达高于癌旁组织,进一步验证了Smad7蛋白在肺鳞癌中表达增高。结论Smad7的过表达同肺鳞癌的发生相关。
- 霍艳英胡迎春张开泰李刚吴德昌许德凤王莉石毓君
- 关键词：免疫组织化学
- 在支气管上皮细胞恶性转化过程中Smad7表达变化对TGF-βR、SMADs及STRAP蛋白的影响被引量：1
- 2006年
- 目的研究永生化人支气管上皮细胞BEP2D恶性转化过程中,作为Sm ad蛋白家族的抑制分子,Sm ad7对TGF-βR、R Sm ads及STRAP蛋白的表达影响。方法培养BEP2D、BERP35T2细胞及稳定表达Sm ad7蛋白的细胞BS7(来源于BEP2D)、RS7(来源于BERP35T2),提取细胞蛋白,用W estern b lot方法比较稳定转染Sm ad7基因前后的BEP2D和BERP35T2细胞中TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Sm ad2/3、Sm ad4及STRAP蛋白表达差异。结果稳定转染Sm ad7基因后细胞中TGF-βRⅡ表达降低,Sm ad2和STRAP蛋白表达增高,Sm ad3、Sm ad4蛋白表达无变化。结论Sm ad7高表达导致TGF-β信号通路发生改变,其中TGF-βRⅡ表达降低,STRAP表达增高可能是诱使细胞发生恶性转化的机制之一。
- 王莉霍艳英张开泰王莹何欣蓉项晓琼胡迎春李刚米粲吴德昌
- 关键词：SMAD7SMADSSTRAP恶性转化
