国家自然科学基金(30200311)
- 作品数：14 被引量：51H指数：5
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- 基质金属蛋白酶在体外视网膜色素上皮细胞损伤模型中的表达被引量：1
- 2007年
- 目的:建立体外RPE细胞损伤模型,观察损伤诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞移行以及MMP-2和MMP-9的表达。方法:在近铺满期视网膜色素上皮(retinal pigment epitheli-um,RPE)细胞培养板上,采用角膜移植用的环钻和棉签法做圆形细胞刮伤区,SABC免疫组织化学方法检测RPE细胞受创后48hMMP-2和MMP-9的表达;并应用此损伤模型,计数进入缺损区的细胞数,观察地塞米松(Dex)对RPE细胞移行和对MMP-2及MMP-9表达的影响。结果:RPE细胞受创后损伤边缘的RPE细胞逐渐向缺损区移行;免疫组化结果显示,损伤后48h损伤边缘移行的RPE细胞呈MMP-2的阳性表达,MMP-9呈强阳性表达。Dex处理组中损伤诱导的RPE细胞移行明显减少,MMP-2和MMP-9的表达也明显减弱。结论:MMPs在RPE细胞移行修复中有重要意义,Dex可以通过抑制MMP-2和MMP-9的表达而减少RPE细胞移行。
- 郭长梅王雨生惠延年韩泉洪王静波马吉献
- 关键词：基质金属蛋白酶视网膜色素上皮细胞细胞移行免疫组化
- 培养人视网膜色素上皮细胞受附加磁场作用后单核细胞趋化蛋白-1和白细胞介素-8的表达
- 目的观察培养人视网膜色素上皮细胞(hRPE)机械牵拉受力模型中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和白细胞介素-8(IL- 8)的表达,以模拟和了解这两种炎性因子可能在原发性视网膜脱离形成早期的表达。方法将胶原包被的磁珠悬...
- 张晓光惠延年韩泉洪马吉献
- 文献传递
- 机械牵拉对培养人视网膜色素上皮细胞MCP-1和IL-8表达的影响被引量：3
- 2005年
- 目的模拟和了解培养的人视网膜色素上皮细胞(hRPE)单核细胞趋化蛋白1(MCP1)和白介素8(IL8)的表达,可能在原发性视网膜脱离形成早期的作用。方法将胶原包被的磁珠悬液加入培养的hRPE细胞,孵育并洗去未结合的磁珠。用逆转录聚合酶链反应和酶联免疫反应分别测定hRPE细胞在磁场垂直方向力作用下,以及在细胞松弛素D处理后,各时间点的MCP1和IL8的mRNA和培养液上清中的蛋白水平。结果不受磁场作用的hRPE表达极低的MCP1及IL8。在牵拉力作用下,MCP1及IL8的表达有2个峰值。其mRNA的第1个峰值出现在0.5h内,分别达到3.30ng/L±0.12ng/L和1.88ng/L±0.08ng/L。蛋白水平的第1个峰值出现在1h内,分别为552.05ng/L±7.64ng/L和236.67ng/L±14.30ng/L。第2个峰值出现在4h左右。细胞松弛素D预处理后两种因子的表达和分泌量均明显降低,分别为2.36ng/L±0.27ng/L和1.64ng/L±0.08ng/L,以及353.80ng/L±16.68ng/L和101.86ng/L±15.92ng/L。结论机械牵拉力可诱导hRPE细胞表达MCP1和IL8,这种作用在细胞松弛素D预处理后出现部分抑制,提示其影响有细胞骨架的参与,这两种炎性因子在视网膜脱离发生的起始阶段起到一定作用。
- 张晓光惠延年韩泉洪侯旭陈立军马吉献
- 关键词：色素上皮视网膜疾病MCP-1机械牵拉
- 培养人视网膜色素上皮细胞牵拉模型中细胞骨架的改变被引量：1
- 2006年
- 目的研究培养人视网膜色素上皮细胞(RPE)受机械牵拉力后细胞骨架的变化。方法将胶原包被的磁珠悬液加入培养的人RPE细胞后孵育,洗去未结合的磁珠。在磁场垂直方向力作用下0、4、8、12和24h,以及加入细胞松弛素D(0.05mmol/L,25min)预处理后,用免疫荧光双标染色法着染细胞中的肌动蛋白和波形蛋白,并用激光共聚焦显微镜观察。结果机械牵拉作用4h后,人RPE细胞的形态和微丝的极性发生改变。肌动蛋白微丝的排列与受力方向一致。细胞骨架微丝表达主要在细胞核周及磁珠聚集处周围。而加入细胞松弛素D预处理的细胞,在8h时发生以上变化。结论机械牵拉可引起人RPE细胞骨架分布的改变,使其表现出肌细胞的某些生物学特征,这对细胞的移行和增生可能有促进作用。
- 张晓光惠延年韩泉洪侯旭黄晓峰马吉献
- 关键词：肌动蛋白类波形蛋白磁力学
- 电场对人视网膜色素上皮细胞移行的影响被引量：6
- 2006年
- 目的观察外源性直流电场对人视网膜色素上皮(hRPE)细胞移行行为的影响,揭示电场在RPE细胞损伤修复中的生理作用及临床意义。方法培养的hRPE细胞依培养液成分不同分为改良Eagle培养液(DMEM)组、DMEM+10%新生小牛血清(FBS)组,两组中未暴露于电场的细胞设为对照。将细胞分别暴露于强度为0、4、6、8V/cm的电场中,显微摄像系统连续记录2h中每隔15min细胞移行的变化图像,测量细胞移行距离及细胞移行方向与场线间夹角。图像分析系统处理结果。结果DMEM组中细胞对电场的反应较弱,电压加至6V/cm时可观察到细胞向阴极方向的移动趋势(不同电场强度中2h里所有单个细胞总体的位移方向指标之间,即平均cosineФ相比,P<0.05)。DMEM+10%FBS组中电场对细胞的作用加强,4V/cm时细胞出现长轴垂直于场线的排列方式,并向电场阴极运动,该现象随电场强度的增加而更为明显(不同电场强度之间及不同培养液之间平均cosineФ相比,P<0.05)。当电极方向转换后,细胞的定向移行方向随阴极方向而改变。结论外加电场可诱导hRPE细胞的电场阴极方向的定向移行,此作用受血清影响并与电场强度成正相关。在视网膜损伤后的早期修复过程中,内源性的电场可能是诱导hRPE细胞移行的始动因素之一。
- 韩静闫小龙韩泉洪马吉献惠延年
- 关键词：视网膜色素上皮电磁场
- 单核细胞趋化蛋白-1和基质金属蛋白酶-2在增生性玻璃体视网膜病变增生膜中的表达被引量：6
- 2003年
- 目的 观察单核细胞趋化蛋白 1(monocytechemotacticprotein 1,MCP 1)和基质金属蛋白酶 2 (matrixmetalloproteinase 2 ,MMP 2 )在增生性玻璃体视网膜病变 (PVR)增生膜中的表达。方法 玻璃体手术取出的PVR增生膜 2 4例 ,其中C级膜 11例 ,D级膜13例 ,用免疫组织化学方法检测MCP 1和MMP 2的表达。结果 在全部 2 4例增生膜中 ,MCP 1和MMP 2均有表达 ,MCP 1阳性表达 8例 ,强阳性表达 16例 ;MMP 2阳性表达 7例 ,强阳性表达 17例。结论 MCP 1和MMP 2均存在于PVR增生膜中 ,提示 2者在PVR增生膜的形成和PVR发生发展过程中起重要作用。
- 贾洪真韩泉洪惠延年王琳杜红俊崔志利马吉献
- 关键词：增生性玻璃体视网膜病变单核细胞趋化蛋白-1基质金属蛋白酶-2
- 结缔组织生长因子在体外人视网膜色素上皮细胞损伤模型中的表达和促移行作用被引量：5
- 2005年
- 目的观察结缔组织生长因子(CTGF)在视网膜色素上皮(RPE)细胞损伤模型中的表达及其对RPE细胞移行的影响。方法利用体外培养的单层近融合期人RPE细胞,采用棉签和角膜移植用环钻做圆形细胞刮伤区,建立体外RPE细胞损伤模型。链霉亲和素-生物素复合物(SABC)免疫组织化学和原位杂交(ISH)方法检测RPE细胞受创后不同时间CTGF的表达及其转录水平mRNA的变化。并计数进入缺损区的RPE细胞数,定量观察CTGF对RPE细胞移行的影响以及地塞米松对CTGF这一作用的影响。结果免疫组织化学和原位杂交结果显示,创伤后6h,创伤边缘RPE细胞表达CTGF呈弱阳性反应;随着创伤后时间延长,阳性信号逐渐增强;伤后24、48h创伤边缘移行的RPE细胞呈CTGF强阳性表达。重组人CTGF因子(rhCTGF)呈剂量依赖性刺激RPE细胞移行,地塞米松对CTGF诱导的RPE细胞移行作用有显著抑制作用。结论CTGF参与了RPE细胞创伤修复过程,这在增生性玻璃体视网膜病变等眼内增生性疾病中可能有重要意义。
- 郭长梅韩泉洪赵俊宏惠延年王静波贾洪真马吉献
- 关键词：内皮生长因子
- 机械牵拉对培养人视网膜色素上皮细胞内钙离子的影响被引量：10
- 2005年
- 目的:观察培养人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cells,RPEs)在受机械牵拉力时细胞内Ca^2+的变化。方法:将胶原包被的磁珠悬液加入培养人RPE细胞后孵育,附着磁珠的细胞放置在恒定磁场中,使用钙荧光指示剂fluo-3/AM和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察在机械牵拉作用的前后细胞内钙离子的变化情况。结果:RPE细胞荧光着色很强,遍布整个细胞,其中细胞核比细胞质更强。机械牵拉后荧光强度显著增强,加入氯化锰后迅速降低。EGTA预处理的细胞在受力后荧光强度增加不显著,加入氯化钙后明显增强。细胞松弛素D预处理的细胞在受力后荧光强度比正常组增高2倍以上。结论:机械牵拉能显著增加钙离子内流,并且增加细胞内的钙库释放。钙离子内流可能是RPE细胞损伤前的信号。
- 侯旭惠延年韩泉洪张晓光王建州郭长梅
- 关键词：机械牵拉人视网膜色素上皮细胞胞内钙离子钙离子内流LSCM
- 培养的人视网膜色素上皮细胞机械牵拉模型的建立和观察被引量：3
- 2006年
- 侯旭惠延年韩泉洪张晓光王建洲郭长梅
- 人视网膜色素上皮细胞在电场中定向移行的实验研究被引量：5
- 2004年
- 目的:观察外源性电场对培养人视网膜色素上皮humanretinalpigmentepithelial,hRPE)细胞移行方向及细胞内肌动蛋白表达的影响。方法:培养于DMEM+100g/LFBS的hRPE细胞暴露于强度为6V/cm的电场中,未暴露于电场的细胞作为对照。观察并记录2h中每隔15min细胞移行的变化图像,测量细胞移行距离、细胞移行方向及其与场线间夹角。2h后采用间接免疫荧光法检测实验组与对照组细胞内肌动蛋白表达情况。SPSS10.0及Image-ProPlus5.0软件处理结果。结果:未暴露于电场中的hRPE细胞在观察期间呈无序移行,2h后细胞分布未见特殊变化,细胞内肌动蛋白有弱阳性表达。细胞暴露于电场30min后开始出现阴极方向的移行趋势,大部分细胞长轴趋向垂直于场线方向排列。细胞的移行表现为移行速度和移行方向的一致性均随时间延长而增加(P<0.05)。暴露于电场2h后,大部分细胞内肌动蛋白表达阳性,且多集中分布于细胞质内朝向电场阴极一侧。结论:外加电场可诱导hRPE细胞向电场阴极方向定向移行,同时伴有细胞内肌动蛋白阳性表达及定向分布。电场对细胞的作用与暴露时间成正相关。视网膜脱离后的内源性电场的存在可能参与并诱导了RPE细胞的定向移行。
- 韩静惠延年韩泉洪王雨生郭长梅
- 关键词：人视网膜色素上皮细胞电场
