甘肃省自然科学基金(ZS031-A25-70-E)
- 作品数：18 被引量：60H指数：5
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- 相关机构：兰州军区兰州总医院兰州大学军事医学科学院更多>>
- 发文基金：甘肃省自然科学基金中国博士后科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 毛细管电泳法检测癌基因C-myc胃癌中基因点突变被引量：4
- 2011年
- 癌基因C-myc激活和突变在胃癌形成过程中起着重要作用。通过毛细管电泳(CE)方法检测50例胃癌患者中C-myc基因突变,建立一种准确、快速诊断早期胃癌的方法。本实验采用PCR扩增胃癌及癌旁正常组织中C-myc基因第二外显子易发突变的部位基因序列,扩增样品分别经96℃变性和EcoRⅤ酶切处理,以PAGE-SSCP,CE-SSCP,CE-RFLP分别对其突变情况进行检测。优化的CE检测条件:筛分介质PEO浓度3.0%,pH 8.2,电压15 kV,温度15℃;荧光检测:λex=488 nm,λem=520 nm。检测结果:C-myc基因总突变率为20.0%(10/50)。测序分析结果显示C-myc基因第二外显子第53密码子存在点突变,碱基A变为碱基T(GAT→GTT),碱基的改变使氨基酸由亮氨酸替代为谷氨酰胺。本研究数据证实C-myc基因突变与胃癌的形成紧密相关,CE检测C-myc突变基因可作为胃癌早期诊断的简便可靠的方法。
- 谢希晖王荣贾正平谢华张爱梅徐娟王晓莉王先华
- 关键词：胃癌突变毛细管电泳单链构象多态性限制性片段长度多态性
- 高效毛细管电泳测定脑脊液中的胱氨酸被引量：3
- 2005年
- 目的:建立了高效毛细管电泳快速测定脑脊液中胱氨酸的方法,以满足临床诊断和治疗。方法:在碱性条件下,2,4-二硝基氟苯(DNFB)与胱氨酸反应生成 DNFB 氨基酸衍生物,在四硼酸钠缓冲液(pH 9.8)中电泳分离,电压28kV,检测波长340nm。结果:胱氨酸 DNFB 衍生物可在4min 内分离测定,在0.208-166.4μmol·L^(-1)范围内呈线性,r=0.9984,最低检测浓度0.1μmol·L^(-1),平均回收率98.25%,日内、日间精密度小于3.0%(n=5)。结论:该方法快速、简便、灵敏,适用于临床药物浓度测定及相关研究。
- 王荣贾正平朱公建谢华张强马骏费改顺熬燕
- 关键词：胱氨酸药物浓度测定二硝基氟苯
- 高效毛细管电泳法测定氟尿嘧啶注射液中5-氟尿嘧啶的含量被引量：4
- 2006年
- 目的：建立高效毛细管电泳（HPEC）测定氟尿嘧啶注射液中氟尿嘧啶（5-FU）含量的方法。方法：运用高效毛细管电泳方法，熔融石英毛细管（50cm×57cm，75μm），缓冲液：10mmol·L^-1磷酸二氢钠（pH5．5），检测波长：280nm，分离电压：15kV，用微孔滤膜过滤后进样，压力进样：6s。结果：方法最低检测浓度为0．1mg·L^-1，线性范围5～200mg·L^-1，r=0．9990，线性关系良好。日内RSD为2．3％，日间RSD为2．7％，回收率为99．7％。结论：本法简单、灵敏经济，可作为氟尿嘧啶注射液中氟尿嘧啶的含量的测定方法。
- 谢华谢景文贾正平王荣苏琦杨静辉马骏张强
- 关键词：高效毛细管电泳氟尿嘧啶注射液氟尿嘧啶
- 毛细管电泳与MFOLD软件研究单链脱氧核糖核酸分离二级结构被引量：7
- 2007年
- 从Gene Bank数据库中下载质粒基因序列,用DNAssist软件分析并最终建立了单点碱基突变模型,并以此为研究对象对单链DNA分离机理进行研究探讨。采用高效毛细管电泳-激光诱导荧光检测(CE-LIF)方法,以线性聚丙烯酸胺为筛分介质对模型进行分离分析,并与MFOLD软件所预测的单链二级结构进行对照分析。分离条件为:线性聚丙烯酸胺浓度为6%,负极进样,13kV分离,温度为19℃,λem=488nm、λex=520nm。结果发现毛细管电泳实际分析结果有4个单链峰,而MFOLD软件预测的只有3种二级结构,预测的准确度为75%,MFOLD软件虽然有局限性,但预测DNA二级结构仍有一定的参考价值。
- 贾海王荣贾正平陈巧云谢华马骏敖燕
- 关键词：毛细管电泳单链构象多态性
- 毛细管电泳法检测胃癌APC基因第十一外显子的杂合缺失
- 2011年
- 采用聚合酶链反应(PCR)扩增了胃癌及癌旁正常组织中APC基因易发生杂合缺失的第十一外显子的部分碱基序列,扩增样品分别经96℃变性和RsaⅠ酶切处理,以毛细管电泳(CE)-单链构象多态性(SS-CP)、CE-限制性片段长度多态性(RFLP)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)-SSCP对其杂合缺失情况进行检测。PAGE凝胶浓度为15%。CE检测条件:以3.0%聚环氧乙烷(PEO)为筛分介质,1×TBE(pH 8.2)为电泳缓冲液,分离电压15 kV,温度15℃,结合激光诱导荧光(λex=488 nm,λem=520 nm)检测。不同方法的检出率由高到低分别为:CE-SSCP(30%)>PAGE-SSCP(25%)>CE-RFLP(20%)。并证实了APC基因易发生杂合缺失在胃癌组织中的突变率高于10%,且CE-SSCP方法较PAGE-SSCP和CE-RFLP的检出率高。CE-SSCP检测方法具有快速、灵敏度高等优点,可为建立简便可靠的胃癌临床早期诊断方法奠定基础。
- 谢希晖王荣谢华贾正平张爱梅孟宪栋马骏
- 关键词：胃癌杂合缺失毛细管电泳单链构象多态性限制性片段长度多态性
- 限制性内切酶色谱指纹—高效毛细管电泳激光诱导荧光分离检测pBR322/BsuRI DNA片段方法学研究
- 1 引言近年来,分离大分子 DNA 倍受人们关注,毛细管电泳(Capillary Electrophoersis,CE)分离技术被广泛地应用[1-3],但在测定实际样品时,由于管壁表面对 DNA 有较强的吸附,为了提高分...
- 王荣贾正平谢华陈巧云贾海张强
- 荧光偏振免疫法测定吸脂术患者脂肪及脂液中利多卡因含量
- 2007年
- 目的:监测利多卡因在吸脂术脂肪渗出液和脂肪中的浓度,以保证吸脂麻醉术中利多卡因的用量达到安全、无毒副作用。方法:运用荧光偏振免疫法,对34例吸脂者脂肪渗出液和脂肪中的利多卡因浓度进行测定。结果:34例吸脂者利多卡因给药量为6～27mg·kg^(-1),脂肪和脂肪渗出液中的利多卡因含量分别为(5．41±2．78)和(4．60±1．71)μg·ml^(-1),术中未见明显的不良反应。结论:荧光偏振免疫法简单、灵敏,可用于吸脂术中利多卡因浓度的监测。
- 谢华谢景文贾正平王荣马骏张强费改顺
- 关键词：荧光偏振免疫法利多卡因
- 毛细管电泳单链构象多态性分析检测质粒中基因突变被引量：15
- 2006年
- 目的建立一种检测基因点突变的方法。基因的点突变在癌症的发生中起重要的作用,检测基冈点突变成为分析癌症发生的重要手段。方法采用以一对引物PCR法扩增出的pBR322和pUC19c氨苄抗性基因为点基因突变模型,建立了一种简便快速的毛细管电泳单链构象多态性分析方法,用于分离基因单点突变模型。结果以6％线性聚丙烯酰胺为分离介质,分离温度为19℃,分离电压为13 kV,可分离出模型中的4个单链DNA构象。结论建立的模型是可靠的,分析方法具有快速、灵敏度高的优点。
- 贾海贾正平付敏强王荣陈巧云谢华马骏
- 关键词：毛细管电泳单链构象多态性
- 高效毛细管电泳用于以聚环氧乙烷为筛分介质分离DNA的机理研究被引量：4
- 2010年
- 用毛细管电泳以聚环氧乙烷(PEO)为筛分介质对pUC19DNA/Msp Ⅰ(HpaⅡ)Marker中的12条DNA片段进行了分离,并尝试用Ogston模型、爬行模型以及线性模型对分离机理进行研究,最终发现26～147bp的小片段,在低电场强度时能很好地符合Ogston模型理论,而190～501bp中等长度的DNA片段电泳迁移率与其尺寸间存在很好的负相关的线性关系,为此,提出一种新的线性模型来进行解释.此外,还探讨了PEO的浓度和电场强度对分离的影响.其结论可更好地从理论上指导对中小片段DNA的分离,对肿瘤基因突变点的分析和PCR扩增产物的分离分析具有重要的意义.
- 王荣贾正平董亚蕾陈兴国谢华马骏辛晓婷李文斌王娟张强张军莉
- 关键词：高效毛细管电泳无胶筛分DNA分子聚环氧乙烷
- 脑脊液中神经递质测定的临床意义及测定方法的研究进展
- 2006年
- 王荣朱公建贾正平
- 关键词：脑脊液神经递质
