黑龙江省自然科学基金(ZJN-0602-01)
- 作品数：23 被引量：67H指数：6
- 相关作者：吴东来王群童铁钢刘光亮白宇更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北农业大学中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 鸡IFN-γDNA-壳聚糖纳米粒的制备及体外转染
- 构建了携带鸡干扰素(IFN- )重组真核表达质粒pCAGGS-ChIFN-,制备成承载pCAGGS-ChIFN-的壳聚糖纳米粒子。透射电镜观察制备的纳米粒子呈不规则球形,光子相关色谱(PCS)仪测定显示纳米粒子的平均粒径...
- 殷喆张文龙刘霓红杨涛步志高王君伟吴东来
- 关键词：壳聚糖体外转染
- 文献传递
- 检测马白细胞介素-18双抗体夹心ELISA方法的建立被引量：5
- 2009年
- 目的:建立检测马白细胞介素-18(equine interleu-kin-18,EIL-18)的双抗体夹心ELISA,为马传染病的免疫学研究提供新方法。方法:将识别不同表位的EIL-18的2株单克隆抗体(mAb)B1G1和S6A3纯化后,利用生物素标记试剂盒对B1G1株mAb进行标记,以重组马白细胞介素-18(rEIL-18)为捕获抗原进行ELISA检测来建立EIL-18双抗体夹心ELISA。结果:经过方阵滴定试验确定捕获抗体的最佳浓度为4mg/L,检测抗体的工作效价为1∶2000。建立的方法可检测马血清中的EIL-18,与猪、牛和羊血清中的IL-18不发生交叉性反应,此方法检测敏感度达到15ng/L,特异性良好。结论:成功建立了EIL-18的双抗体夹心ELISA,为马细胞免疫学研究提供了方法,也为下一步EIL-18ELISA试剂盒的商品化开发奠定了坚实基础。
- 童铁钢白宇张维军王群刘光亮徐树兰吴东来
- 关键词：单克隆抗体夹心ELISA
- 鸡β_2微球蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达与纯化被引量：4
- 2007年
- β2微球蛋白(β2m)是组成主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子复合体的轻链分子,对于MHCⅠ类分子在细胞表面稳定表达和有效递呈抗原肽必不可少。本试验从来航鸡全血细胞中克隆了鸡β2m(Chβ2m)全基因,利用软件预测了其信号肽序列,并构建了表达成熟Chβ2m的重组载体,在大肠杆菌表达系统中以包涵体形式高效表达。将所得包涵体溶于8 mol/L脲,并在变性条件下对包涵体中的重组Chβ2m进行纯化,获得了高纯度的Chβ2m,为制备MHCⅠ四聚体及探索禽类MHCⅠ类分子结构与功能的关系提供了条件。
- 刘光亮童铁钢孟庆文吴东来
- 关键词：Β2微球蛋白基因克隆纯化
- 马白细胞介素18成熟蛋白(mEIL-18)基因在大肠埃希氏菌中的高效表达与纯化被引量：5
- 2007年
- 用RT-PCR从经ConA刺激的马外周血单个核细胞(PBMC)中扩增出马白细胞介素18(Equine interleu-kin-18,EIL-18)前体蛋白(precursor EIL-18,pEIL-18)基因的cDNA,然后克隆至载体pCR2.1-TOPO中,鉴定并命名为pCR2.1-pEIL-18。自pCR2.1-pEIL-18中扩增马白细胞介素18成熟蛋白(mature EIL-18,mEIL-18)基因,并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)中。将筛选出的阳性克隆进行测序、诱导表达并纯化其表达产物。结果表明,mEIL-18基因全长474 bp,含1个开放阅读框,编码157个氨基酸的成熟蛋白;表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在,经SDS-PAGE和Western-blot分析,重组蛋白相对分子量约为20 ku,且具有免疫生物学活性。mEIL-18基因在大肠杆菌中高效表达并在非变性和变性条件下采用Ni+亲和层析纯化方法获得了高纯度的重组mEIL-18,为探究马白细胞介素18的生物学活性及其应用奠定了基础。
- 童铁钢刘光亮白宇肖一红王群李少英孟庆文吴东来
- 关键词：克隆纯化
- 猪MHC-Ⅰ α生物素化序列融合基因的构建、表达与纯化被引量：3
- 2008年
- 采用RT-PCR技术从猪外周血单核细胞(PBMC)中获得猪白细胞抗原基因座P1、P14等位基因的胞外区,并在其3′端拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列(BSP),构建了pET-P1-BSP和pET-P14-BSP高效表达载体并进行诱导表达和纯化,用SDS-PAGE和Western blotting法对表达产物进行鉴定。结果显示,成功构建了融合表达载体pET-P1-BSP和pET-P14-BSP,表达产物以包涵体的形式存在,获得高纯度的P1-BSP和P14-BSP蛋白,为进一步利用亲和素在体外构建SLA-I类分子肽四聚体奠定了基础。
- 肖一红刘光亮王群童铁钢白宇孟庆文吴东来
- 关键词：克隆纯化
- PRRSV GP5蛋白在重组牛痘病毒中的表达与鉴定被引量：1
- 2009年
- 为构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5重组牛痘病毒,本研究通过RT-PCR获得PRRSVCH-1a株GP5蛋白基因,将其克隆至pMD18-T载体。经测序鉴定正确后,将该片段作为目的基因亚克隆至转移质粒pSC11中,构建重组转移质粒(pSC11-GP5)。将pSC11-GP5转染WR株牛痘病毒感染的TK-143细胞,与牛痘病毒进行同源重组。在含有X-gal的琼脂培养基上进行蓝斑筛选,获得了含有PRRSV GP5基因的重组病毒(rWR-PRRSV-GP5)。IFA及动物试验表明,重组病毒表达了PRRSVGP5蛋白,并在免疫小鼠体内诱生了较强的PRRSV抗体。实验表明,该重组病毒所表达的PRRSV GP5蛋白保持了良好的抗原性,为进一步研究PRRSV GP5蛋白免疫原性提供了基础数据,也为PRRS重组活载体疫苗的研究奠定了基础。
- 田野张维军林燕王群杨涛步志高童光志张守发吴东来
- 关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白
- 重组马γ-干扰素抗病毒活性测定及单克隆抗体抑制活性鉴定被引量：2
- 2008年
- 为了测定大肠杆菌和杆状病毒表达的重组马γ-干扰素是否具有抗病毒活性,利用这两种干扰素处理马胎肾细胞(EFK-78),然后接种表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组水泡性口炎病毒(VSV*GFP),观察干扰素对病毒表达GFP的抑制,测出其抗病毒活性单位分别为1×103AU/mL、1×105AU/mL。评价了制备的九株抗重组马γ-干扰素单克隆抗体是否可抑制重组马γ-干扰素抗病毒活性,证实其中一株可中和重组马γ-干扰素的抗病毒活性。结果表明:杆状病毒表达的马γ-干扰素具有较高的抗病毒活性,其活性可被一株制备的抗重组马γ-干扰素单克隆抗体抑制;首次获得原核表达的具有抗病毒活性的马γ-干扰素。
- 白宇陈伟业童铁钢张维军徐树兰王群孙庆歌刘光亮步志高吴东来
- 关键词：单克隆抗体
- 串联表达Ubiquitin基因与PRRSVM基因DNA疫苗的构建及其对小鼠的免疫试验
- 利用SOE技术将PRRSV M基因与小鼠泛素(Ubiquitin,Ub)基因融合,并将融合后的基因克隆至真核表达载体pVAX1中,构建真核表达质粒pVAX1-U-M。利用真核表达质粒DNA免疫小鼠,通过检测体液免疫反应与...
- 张维军林燕王群孙庆歌杨涛童光志吴东来
- 关键词：PRRSVM基因泛素DNA疫苗
- 文献传递
- 含禽源启动子的禽流感病毒核蛋白表达载体的构建及其免疫原性的检测
- 为了研究禽流感病毒核蛋白在鸡体内所引起的免疫反应,将其NP基因从重组质粒pVAX-NP上酶切后亚克隆至含禽源启动子的真核表达载体pCAGGS中,经筛选鉴定后获得重组子pCAGGS-NP,将鉴定正确的阳性重组子体外转染真核...
- 王群刘光亮肖一红童铁钢白宇张维军徐树兰吴东来
- 关键词：禽流感核蛋白真核表达载体血清抗体
- 文献传递
- 猪β2-微球蛋白基因在大肠埃希氏菌中的表达与纯化
- 2008年
- 肖一红刘光亮童铁钢王群孟庆文吴东来
- 关键词：大肠埃希氏菌蛋白基因细胞特异性自身免疫性疾病微球SARS病毒
