国家自然科学基金(31272478) 作品数:5 被引量:13 H指数:2 相关作者: 刘凤华 李德银 许磊 宫平 梅晨 更多>> 相关机构: 北京农学院 中国农业大学 华南农业大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家科技支撑计划 公益性行业(农业)科研专项 更多>> 相关领域: 农业科学 更多>>
Heat stress induces GDF9, GDF15, Pdgfa, Vegfa, Alb, Egfr expression in rat small intestine and in rat IEC-6 [Aims]: The present study was to detect the expression of GRFs when suffering heat stress both in vivo and in ... C.Mei H.Zhao P.Cheng L.Xu Y.J.Bai X.L.Xu X.H.Yu X.L.Chong J.J.Chen F.H.Liu J.Q.Xu关键词:RAT 热应激诱导大鼠小肠昼夜节律基因差异表达的研究 被引量:1 2013年 采用石蜡切片H.E染色观察热应激大鼠小肠形态学变化,利用Realtime-PCR技术对小肠中昼夜节律相关基因的表达进行研究。结果:大鼠小肠上皮出现严重损伤,肠黏膜绒毛顶端上皮细胞脱落,固有层裸露;热应激导致Per2和DBP基因瞬时表达极大升高,节律性受到严重影响,Bmal1基因瞬时表达差异不明显,其mRNA表达量峰值后移。 赵宏 种新禄 陈佳佳 何莎莎 万长荣 刘凤华关键词:小肠 热应激 比较MTS与MTT用于大鼠热应激模型中肠上皮细胞活力检测 被引量:7 2016年 【目的】MTT法与MTS法线性关系比较与热应激模型筛选。【方法】以IEC-6及SF9细胞为研究对象,取对数生长期细胞,设置4个接种浓度,将两种细胞制成对应浓度细胞悬液接种于96孔板24h,分别加入两种试剂后在490nm处读取OD值。根据OD值确定两种细胞最佳接种浓度。并根据OD值比较两种检测细胞活力方法哪种更加适合于动物贴壁细胞IEC-6细胞活力测定。取最适浓度的IEC-6细胞加入MTS后孵育1.5、2.5、3.5h三个不同时间点检测OD值,根据OD值确定最佳孵育时间。将IEC-6细胞在最佳接种浓度下接种于96孔板24h,分别在43、41、39℃下采用不同热应激时间4、8、12、24h,测定OD值,根据OD值确定IEC-6细胞热应激模型。【结果】MTS法在动物贴壁细胞IEC-6及植物半贴壁细胞SF9中检测的准确度度高,灵敏度好,是比MTT法更优的检测贴壁细胞增殖活性的方法。IEC-6细胞最佳接种浓度为4.1×104/mL至5.5×104/mL,SF9细胞最佳接种浓度为3.28×105/mL至4.4×105/mL。MTS最佳孵育时间为3.5h,并确定大鼠空肠上皮细胞热应激模型为43℃,6h。【结论】检测贴壁不牢的细胞活力时MTS法优于MTT法,并成功建立IEC-6细胞热应激模型。 梅晨 何莎莎 许磊 李德银 吕安 张志聪 张彤 宫平 刘凤华 蒋林树关键词:细胞活力 MTT MTS IEC-6 香苇二石口服液对大鼠试验性热应激的影响 被引量:1 2014年 本试验通过检测大鼠肠道中热休克蛋白基因的表达,探究不同剂量香苇二石口服液对热应激的预防和治疗作用。45只健康雄性大鼠随机分为对照组、热应激组、自然恢复组、高剂量预防组、中剂量预防组、低剂量预防组、高剂量治疗组、中剂量治疗组、低剂量治疗组,建立高温应激模型,利用Real time-PCR技术检测大鼠小肠中HSP27、HSP70、HSP90 m RNA的表达变化。结果表明,高温刺激能极显著增加HSPs m RNA的表达量(P<0.01);香苇二石口服液能显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)抑制HSPs m RNA的高表达。表明香苇二石口服液高剂量有极显著预防作用,中剂量有极显著治疗作用。 高志民 王亚芳 赵宏 刘晓曦 刘涛 石达友 刘凤华 陈志虹 郭世宁关键词:热应激 热休克蛋白 厚朴酚缓解热应激诱导的小肠上皮细胞损伤及其分子机制(英文) 被引量:3 2016年 目的:探讨厚朴酚(Mag)对热应激大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)修复作用,并初步探讨其作用机制。创新点:首次在大鼠小肠上皮细胞热应激模型中证明厚朴酚可明显降低细胞损伤程度,且此作用与细胞周期G1期相关。方法:本试验采用大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)为研究对象,将其分为五组:对照组(37°C,5%CO2),热应激组(42°C,3 h),热应激+厚朴酚低浓度组(5μmol/L),热应激+厚朴酚中浓度组(10μmol/L),热应激+厚朴酚高浓度组(20μmol/L)。采用MTS法复制热应激模型及厚朴酚药物浓度筛选;采用流式细胞术检测热应激造成大鼠小肠上皮细胞细胞周期阻滞及不同浓度厚朴酚缓解细胞周期阻滞情况;利用电子显微镜观察热应激造成的细胞损伤情况;利用荧光电子显微镜观察Ed U染色后,热应激对细胞增殖情况的影响及不同浓度厚朴酚的修复作用;采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测热应激对细胞周期基因表达影响及不同浓度厚朴酚对细胞周期基因调节作用,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测热应激对细胞周期蛋白表达的影响及不同浓度厚朴酚对细胞周期蛋白修复作用。结论:流式细胞术显示热应激造成IEC-6细胞周期阻滞在G1期(96.5%),而三种浓度厚朴酚均可以缓解细胞周期阻滞现象且呈剂量依赖性(5μmol/L88.8%,10μmol/L 81.0%,20μmol/L 73.5%)。热应激导致阻滞细胞分裂的G1期基因p21、p27和Rb显著上调(P<0.01),显示细胞周期阻滞,不同浓度厚朴酚下调这三个基因表达且呈剂量依赖性;促进细胞分裂的G1期基因E2F1、CDK4和cyclin D1表达显著下调(P<0.01),显示细胞周期阻滞不能正常增值,厚朴酚有效上调这三个基因表达水平。热应激导致G1期阻滞细胞分裂蛋白p21及p27上调显著(P<0.01),厚朴酚有效下调p21及p27蛋白表达,且在20μmol/L浓度时效果最佳;而G1期促进细胞分裂蛋白p Rb、E2F1、CDK4和cyclin D1(CCND1)在热应激下表� Chen MEI Sha-sha HE Peng YIN Lei XU Ya-ran SHI Xiao-hong YU An LYU Feng-hua LIU Lin-shu JIANG关键词:细胞周期阻滞 细胞损伤 热应激 IEC-6 厚朴酚 安石榴苷对热应激后IEC-6细胞HSPs表达及凋亡影响 被引量:1 2016年 【目的】本试验旨在研究安石榴苷对热应激大鼠肠上皮细胞(IEC-6)损伤的预防作用。【方法】通过MTT法检测细胞活力,倒置显微镜观察细胞形态学变化;RT-PCR检测HSP27、HSP70、HSP90的mRNA变化;AO/EB检测细胞凋亡。【结果】筛选热应激最佳时间为42℃6h,安石榴苷预处理细胞低中高浓度分别为2.5、5、10μmol/L;药物预处理细胞后细胞损伤及凋亡程度减轻,能够显著抑制HSP27、HSP70、HSP90的高表达。【结论】安石榴苷对IEC-6细胞热应激损伤具有显著预防作用,HSP27、HSP70、HSP90参与安石榴苷对IEC-6细胞热损伤预防作用的调控。 许磊 梅晨 李德银 宫平 吕安 张志聪 张彤 蒋林树 刘凤华关键词:IEC-6细胞 热应激 热休克蛋白