广州市医药卫生科技项目(2008-YB-149)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：江洁华李翊泉张东梅徐韫健廖伟娇更多>>
- 相关机构：广州医学院第一附属医院中山大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：广州市医药卫生科技项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶原核表达条件的研究被引量：1
- 2010年
- 目的探讨重组质粒pET-28a(+)/CTX-M-3分别在大肠埃希菌ER2566和BL21(DE3)中进行原核表达的最佳条件。方法分别在不同的宿主菌、诱导温度、诱导时间和诱导剂浓度中诱导pET-28a(+)/CTX-M-3融合表达载体,目的产物经SDS-PAGE和BandScan凝胶分析软件分析,以获得最佳表达条件。结果表达载体的最佳诱导条件是重组质粒在BL21(DE3)中18℃诱导24h,IPTG终浓度为0.8mmol/L;表达载体在最佳条件下表达时,目的蛋白的最高表达量占菌体总蛋白的33%。结论获得pET-28a(+)/CTX-M-3在大肠埃希菌中表达CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamase,ESBLs)蛋白的最佳条件,为此酶的大量纯化奠定了基础。
- 徐韫健李翊泉廖伟娇江洁华张东梅
- 关键词：原核表达
- CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶的表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2012年
- 目的将肺炎克雷伯菌所产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamase,ESBLs)进行表达、纯化及其多克隆抗体的制备。方法将保存的重组质粒pET-28a(+)/CTX-M-3在大肠埃希菌BL21(DE3)中原核表达。IPTG诱导CTX-M-3融合蛋白表达,利用镍琼脂糖凝胶亲和柱层析纯化蛋白,用纯化的CTX-M-3型ESBLs酶蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果可溶性检测表明表达产物以可溶性形式(上清中)和包涵体形式(沉淀中)两种形式存在。通过蛋白表达条件的优化实验,SDS-PAGE电泳结果显示18℃,0.8 mmol/L IPTG诱导24 h的CTX-M-3重组蛋白的可溶性表达最佳。SDS-PAGE电泳和Western-blot检测表明获得纯化的重组32 kD蛋白。免疫获得的CTX-M-3型ESBLs酶蛋白抗血清的效价为1∶32。结论 pET-28a(+)/CTX-M-3表达载体在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,用His亲和层析柱纯化可获得高纯度可溶性的重组蛋白,成功制备了效价较高的抗CTX-M-3型ESBLs酶蛋白多克隆抗体。
- 李翊泉黄伟青徐韫健张志强张东梅江洁华
- 关键词：肺炎克雷伯菌纯化多克隆抗体
- CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶的原核表达及纯化被引量：3
- 2010年
- 目的对肺炎克雷伯菌所产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamase,ESBLs)进行基因重组表达及纯化。方法以产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌总基因组DNA为模板PCR扩增CTX-M-3,将其克隆入pET-28a(+)载体,重组质粒转入大肠埃希菌ER2566中表达,表达产物经过Ni-琼脂糖凝胶柱纯化,用SDS-PAGE电泳和Western-blot鉴定纯化蛋白。结果PCR扩增出大小为876bp的基因片段,与GenBank上同类酶的基因序列同源性为100%。此基因能在大肠埃希菌ER2566中大量表达,蛋白分子质量大约为32KD得到SDS-PAGE电泳和Western-blot的证实,与理论值相符。结论成功表达及纯化CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶,为进一步酶生物学特性及酶的抗体制备研究奠定了基础。
- 李翊泉徐韫健廖伟娇江洁华张东梅
- 关键词：超广谱Β-内酰胺酶原核表达纯化
