上海市科学技术委员会资助项目(10411963500)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：叶添文郭清河陈爱民陈方经安静更多>>
- 相关机构：第二军医大学上海大学更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目国家自然科学基金上海市高校选拔培养优秀青年教师科研专项基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 瞬时性受体电位通道香草酸受体亚型6基因敲除小鼠模型的建立
- 2012年
- 目的建立瞬时性受体电位通道香草酸受体亚型6(Trpv6)基因敲除小鼠模型,为在体研究Trpv6的生物学功能及其与骨代谢关系奠定基础。方法从Ensembl数据库中获得小鼠Trpv6基因组序列。设计基因敲除策略,构建基因敲除载体pBR322-MK-Trpv6。以电穿孔方法将基因敲除载体导入胚胎多能干细胞(ES细胞),用G418和Ganciclovoir进行正负筛选,获得双抗性克隆。PCR鉴定出正确同源重组的ES细胞克隆。将正确同源重组的ES细胞注射到C57BL/6J小鼠的囊胚中,获得嵌合体小鼠。挑选嵌合率在50%的雄鼠与C57BL/6J小鼠交配,获得的灰鼠经PCR鉴定为杂合子小鼠。杂合子小鼠交配后获得纯合子小鼠。结果成功构建了打靶载体pBR322-MK-Trpv6。电穿孔后,共获得24个正确同源重组的克隆,同源重组效率为25%。同源重组的克隆经显微注射后,共获得4只嵌合率大于50%的雄鼠。嵌合鼠与C57BL/6J小鼠交配,获得57只来源于ES细胞的灰鼠,PCR鉴定证实其中17只为杂合子小鼠,阳性率为29.8%。杂合子小鼠交配获得纯合子小鼠。经蛋白质印迹分析证实纯合子小鼠无Trpv6蛋白的表达。结论成功建立了Trpv6基因敲除小鼠模型,其中纯合子小鼠未出现胚胎致死现象。
- 叶添文郑晋华安静郭清河陈方经陈爱民
- 关键词：基因敲除小鼠骨重建
- TRPV5/TRPV6调节骨代谢作用的研究进展被引量：2
- 2011年
- 骨质疏松是一种严重的老年性疾病。全球骨质疏松的患者约2亿人。在中国,骨质疏松的患者超过9 000万,约占总人口的7.1%。骨质疏松症及其引起的骨折位居常见疾病的第7位,严重威胁着中、老年人的健康,成为全球公共卫生问题之一。骨质疏松与成骨细胞/破骨细胞功能障碍有关。影响成骨细胞/破骨细胞增殖、分化及功能的各种因素是骨质疏松发病的重要原因。在上皮组织中高度表达的钙离子通道TRPV5/TRPV6,对全身钙离子代谢有着非常重要的作用。 TRPV5/TRPV6在骨质疏松发病机制中的作用,
- 郭清河叶添文
- 关键词：钙离子通道TRPV骨质疏松
