浙江省医学科学院青年基金(A30810Q)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 相关作者：李召东宋广忠漏磊君石君帆泮结超更多>>
- 相关机构：杭州市红十字会医院浙江省医学科学院更多>>
- 发文基金：浙江省医学科学院青年基金浙江省科技厅项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核分枝杆菌rESAT-6-CFP-10融合蛋白的制备及其血清学诊断价值被引量：4
- 2010年
- 目的 表达、纯化结核分枝杆菌rESAT-6-CFP-10（rEC）融合蛋白,评价其在结核病血清学诊断方面的应用价值.方法 用镍离子螯合亲和层析柱纯化融合蛋白,用ELISA法检测血清样本中的抗结核抗体,以37例PPD阴性患者正常血清A492＋2s为正常限值,评价rEC诊断的特异性及灵敏度.结果 rEC融合蛋白在大肠埃希菌中以可溶性非包涵体形式表达,表达浓度为0.19 mg/mL.rFC检测抗结核抗体在PPD阳性健康人群中的特异性为100%（30/30）,在痰涂片或细菌培养阳性和两法均阴性的结核病患者中灵敏度分别为75.56%（34/45）和67.3]%（35/52）.结论 结核分枝杆菌rEC融合蛋白以可溶性形式高效表达,具有较强的免疫反应性和较高的血清学诊断价值.
- 石君帆宋广忠泮结超漏磊君杨明瑾李召东
- 关键词：血清学诊断
- 结核杆菌H37Rv株重组PstS1蛋白的表达纯化研究
- 目的表达纯化结核杆菌H37Rv株重组PstS1(简称rPstS1)蛋白,为结核病血清学诊断价值研究及亚单位疫苗研制提供物质基础。方法:重组质粒pET15b-PstS1转化大肠埃希菌表达菌株BL21(DE3)plysE,I...
- 石君帆宋广忠泮结超漏磊君John T.Belisle
- 关键词：亚细胞定位结核
- 文献传递
- 结核分枝杆菌rPstS1-HspX融合蛋白的制备及其血清学诊断价值被引量：1
- 2012年
- 目的表达、纯化结核分枝杆菌rPstS1-HspX（rPH）融合蛋白，评价其在结核病血清学诊断方面的价值。方法异丙基．陆D一硫代吡喃半乳糖苷（帆）诱导rPH融合蛋白表达，并用镍离子螯合亲和层析柱纯化融合蛋白。Western印迹分析纯化后融合蛋白的免疫反应性。最后用ELISA法检测194份血清抗体样本，其中来源于肺结核患者94份，非结核肺部疾病患者52份，健康对照者48份。结果rPH融合蛋白在大肠埃希菌中主要以可溶性非包涵体形式表达，相对分子质量为51000。经亲和层析后得到了浓度为0．62ng／mL，纯度达92％的融合蛋白。Western印迹实验证实纯化后融合蛋白能与结核病阳性血清发生特异性免疫应答。重组蛋白rPH血清检测的灵敏度为77．6％（73／94），特异性为92．0％（92／100）。结论成功表达和纯化了rPH融合蛋白，其用于结核病血清学诊断具有较好的灵敏度和较高的特异性，是ELISA的可靠抗原。
- 宋广忠石君帆李召东杨明瑾漏磊君李涛王秀芝
- 关键词：结核分枝杆菌血清学诊断
- 结核分枝杆菌rPstS1-HspX融合蛋白的表达、纯化及其免疫反应性分析被引量：1
- 2011年
- 目的构建结核分枝杆菌rpstS1-hspX（rph）融合基因及其原核表达载体pET-23b（＋）-rpstS1-hspX[pET-23b（＋）-rph]，表达、纯化rPstS1-HspX（rPH）融合蛋白，并分析其免疫反应性。方法采用基因拼接技术将PstS1和HspX编码基因通过多肽接头（GSGSG）的DNA序列进行连接，构建融合基因rph。将融合基因定向克隆人原核表达载体pET．23b（＋），构建重组原核表达质粒pET-23b（＋）-rph。将重组质粒转化大肠杆菌E-coli BL21（DE3）pLysE感受态细胞，IPTG诱导融合蛋白表达。SDS—PAGE和Western印迹法鉴定其表达情况。用镍离子鳌合亲和层析柱纯化融合蛋白，Western印迹法初步评价融合蛋白的免疫反应性。结果融合基因rph及其原核表达载体pET-23b（＋）-rph构建成功。融合蛋白rPH主要以可溶性非包涵体形式表达，相对分子质量为51000，表达量约占菌体总蛋白的23％。经亲和层析后得到了纯度达92％的融合蛋白。Western印迹证实融合蛋白能与结核病阳性血清发生特异性免疫反应。结论成功构建了原核表达载体pET-23b（＋）-rph，获得了rPH融合蛋白，为rPH融合蛋白在结核病诊断中的应用提供了依据。
- 宋广忠石君帆泮结超漏磊君李召东
- 关键词：结核分枝杆菌融合基因融合蛋白纯化免疫反应性
- 结核杆菌H37Rv株重组PstS1蛋白的表达纯化及其免疫反应性分析被引量：2
- 2011年
- 目的表达、纯化结核杆菌H37Rv株重组PstS1(简称rPstS1)蛋白,为结核病血清学诊断价值研究及亚单位疫苗研制提供物质基础。方法重组质粒pET15b-PstS1转化大肠埃希菌表达菌株BL21(DE3)plysE,IPTG诱导rPstS1蛋白表达。经SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定后,优化表达条件,用镍离子鳌合亲和层析柱纯化rPstS1蛋白,并用斑点金免疫渗滤法评价纯化蛋白的免疫反应性。结果成功构建了重组质粒pET15b-PstS1,相对分子质量为38×103的rPstS1蛋白约有30%以可溶性蛋白形式表达,经亲和层析后的rPstS1蛋白纯度为94.8%,有较好的免疫反应性。结论构建的重组质粒pET15b-PstS1能高效表达有免疫反应性的rPstS1蛋白,经亲和层析后可得到高纯度的纯化蛋白。
- 石君帆宋广忠泮结超漏磊君李召东
- 关键词：亚细胞定位结核
- 结核分枝杆菌rESAT-6-CFP-10融合蛋白的构建和表达及其免疫反应性分析被引量：2
- 2011年
- 目的构建结核分枝杆菌H37Rv株esat．6-cfp-10（简称ec）融合基因及其原核表达载体pET-23b（＋）．esat．6-cfp-10[以下简称pE％23b（＋）-ec]，表达、纯化融合蛋白rESAT-6-CFP-10（简称rEC），并分析其免疫反应性。方法采用基因拼接技术将ESAT-6和CFP-IO编码基因用疏水甘氨酸接头（Gly4Ser），进行PCR扩增融合。构建TA克隆载体pMDR19-T-esat-6-cfp-10（简称pMD-19-T-ec），利用PCR、酶切和测序进行鉴定。经限制性内切酶NdeI、XhoI双酶切后将融合基因定向克隆入原核表达载体pET-23b（＋）。将构建正确的重导组质粒pET-23b（＋）-ec转化E-coliBL21（DE3）pLysE，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPm）诱导rEC的表达。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western印迹法分析其表达情况。用镍离子螯合亲和层析柱纯化融合蛋白。用Western印迹初步评价融合蛋白的免疫反应性。结果融合基因及其原核表达载体构建成功，融合蛋白以可溶性非包涵体形式表达，相对分子质量为21000，表达量约占菌体总蛋白的35％。经亲和层析后得到了纯度达97．2％的融合蛋白。Western印迹证实，融合蛋白能与确诊的肺结核患者血清发生特异性免疫应答。结论成功构建了原核表达载体pET-23b（＋）-ec，获得了rEC融合蛋白，为rEC融合蛋白在结核病诊断中的应用奠定了基础。
- 宋广忠石君帆漏磊君李召东泮结超John T.Belisle
- 关键词：融合基因
