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黑龙江省重点科技攻关项目(GB06B303): 作品数：10 被引量：48H指数：4; 相关作者：刘关君杨传平刘桂丰刘明坤刘昌财更多>>; 相关机构：东北林业大学中国人民解放军61699部队吉林市丰满区林业局更多>>; 发文基金：黑龙江省重点科技攻关项目国家重点基础研究发展计划黑龙江省国际合作项目更多>>; 相关领域：生物学农业科学更多>>

西伯利亚蓼硫堇基因的克隆和序列分析被引量：1: 2007年; 根据西伯利亚蓼抑制消减文库(SSH)中获得的硫堇(THI)基因的部分序列,应用RACE技术克隆了具有PolyA的全长cDNA序列。基因全长789bp,5'非翻译区90bp,3'非翻译区276bp,开放阅读框编码140个氨基酸。序列分析表明,该编码蛋白与大多数植物THI蛋白前体高度相似,N端具24个氨基酸的信号肽,中间46个氨基酸为成熟THI部分,C端的70个氨基酸为酸性多肽部分。西伯利亚蓼THI蛋白与丹参等双子叶植物THI蛋白有较高的同源性,具保守的植物THI标签序列C-C-X(5)-R-X(2)-[FY]-X(2)-C。此成熟THI蛋白带正电荷,偏碱性,推定可能具有抗病原微生物活性,为一种新的植物THI蛋白,GenBank登录号为DQ981482。; 刘昌财刘关君刘桂丰李晓泽; 关键词：西伯利亚蓼硫堇基因克隆 RACE

西伯利亚蓼多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因的克隆及盐胁迫下的表达被引量：1: 2009年; 根据西伯利亚蓼茎抑制消减文库(SSH)中获得的多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(polygalacturonase inhibiting proteins,PGIP)的EST序列,采用RACE技术在西伯利亚蓼消减库(SSH)成功克隆了PGIP蛋白基因的cDNA序列.该基因开放读码框为1020bp,编码339个氨基酸,具有1段24个残基的保守亮氨酸结构域.序列分析表明,该基因具有N端信号肽,具有PGIPs家族共有的典型保守区域,属PGIPs家族基因,命名为PsPGIP,GenBank登录号为ACD01043.荧光定量PCR分析表明,PsPGIP在西伯利亚蓼叶、茎、地下茎等器官中均有分布.在3%NaHCO3诱导表达中,该基因在叶中表达明显受盐胁迫的诱导.推测该基因在抵御盐胁迫伤害中起到了重要的作用.; 刘关君杨春雪曲春浦李晓泽刘昌财刘桂丰杨传平; 关键词：西伯利亚蓼多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 RACE 荧光定量PCR

西伯利亚蓼甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因的cDNA克隆与序列分析被引量：27: 2007年; 根据NaHCO3胁迫下西伯利亚蓼茎部消减库中甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(GAPDH)表达序列标签序列设计引物,采用cDNA末端快速扩增技术,从西伯利亚蓼茎中扩增出GAPDH的全长cDNA序列。该cDNA序列全长1331bp,完整阅读框1014bp,编码337个氨基酸。属于稳定蛋白,具有GAPDH保守功能域。氨基酸组成与其他已知高等植物来自细胞质中的GAPDH基因cDNA序列具有很高的同源性,最高可以达到96%。通过转酿酒酵母INVSC1的NaHCO3和NaCl胁迫试验表明,转基因INVSC1(pYES2-GAPDH)有明显的抗盐胁迫特性。在10%NaHCO3和4mol·L-1 NaCl胁迫下,转基因INVSC1(pYES2-GAPDH)菌株存活率明显比INVSC1(pYES2)高,可以推测GAPDH基因赋予INVSC1(pYES2-GAPDH)抗NaHCO3和NaCl的能力。该基因的cDNA序列在GenBank中登录号为DQ922680。; 李晓泽刘关君杨传平; 关键词：西伯利亚蓼基因克隆

西伯利亚蓼非特异性脂质转移蛋白编码序列的克隆及其盐胁迫下的表达被引量：3: 2008年; 根据西伯利亚蓼地下茎抑制消减文库(SSH)中获得的非特异性脂质转移蛋白(non-specific lipid transfer protein,nsLTP)EST序列,应用RACE技术克隆了具有PolyA的全长cDNA序列.该序列全长604bp,其5′非翻译区65bp,3′非翻译区227bp,开放阅读框编码103个氨基酸残基;序列分析表明,该基因具有N端信号肽,具有nsLTP家族共有的典型保守区域,属nsLTP家族基因,命名为PsnsLTPs;荧光定量PCR分析表明,PsnsLTPs在西伯利亚蓼叶、茎、地下茎中均有表达.在3%NaHCO3诱导表达下,该基因在地下茎中表达明显受盐胁迫的诱导,推测该基因在抵御盐胁迫时具有重要作用.; 刘关君田旭刘昌财曲春浦刘桂丰杨传平; 关键词：西伯利亚蓼非特异性脂质转移蛋白盐胁迫基因克隆实时定量PCR

西伯利亚蓼几丁质酶基因Class IV克隆及生物信息学分析: 2008年; 根据西伯利亚蓼抑制消减文库(SSH)中获得的几丁质酶(CHI)基因的部分序列,采用RACE技术克隆了具完整编码区的cDNA序列,基因全长1 017 bp,开放阅读框编码270个氨基酸。序列分析表明,该基因的编码蛋白(PsCHI1)以前体形式存在,N端分别有22个氨基酸的信号肽和35个氨基酸的几丁质结合域(CBD),C端199个氨基酸为催化区(CD),连接CBD与CD的14个氨基酸为可变交联区,成熟蛋白为不含信号肽部分,呈碱性,带正电荷。PsCHI1与所选其它植物classⅣCHI前体序列具有高度的同源性(53%～69%),而与classⅠ和classⅡCHI的氨基酸序列同源性较低,推测为植物classⅣCHI。根据日本水稻CHI晶体结构构建了PsCHI1三维分子模型,分析显示PsCHI1可以识别比classⅠ和classⅡCHI短的几丁质片段,并以其它植物CHI的已知结构域和功能为基础,确定PsCHI1具有能够水解真菌细胞壁的结构,推测其可能有抗病原微生物的功能。; 刘关君刘昌财刘明坤魏志刚刘桂丰; 关键词：西伯利亚蓼 RACE

旱柳体外培养与直接分化再生系统的建立: 2010年; 给出了旱柳体外培养的方法：9月份至12月份采集1～2a生枝条上带腋芽的茎段，经过筛选确定MS＋0．5mg／L6-BA＋0．1mg／LNAA为最佳诱导培养基，平均每个芽点产生的不定芽数量为3．5个，20d后苗高为1．8cm；不定芽在MS＋0．1mg／L6-BA＋0．2mg／LNAA培养基中继代增殖及生长较好，为适宜的增殖培养基；在形成的不定芽中有些不定芽起源于单株苗的切口基部，因此，初步建立了旱柳的直接分化再生系统，可为旱柳的遗传转化等研究奠定基础．经过壮苗处理的幼苗在MS＋0．2mg／LNAA培养基上的生根率达100％，且生根量多，幼苗生长健壮．生根苗移栽至V（草炭土）：V（河沙）为3：1的混合基质中，60d后成活率为90％左右．; 朱丽君刘关君田春雨李洪业王磊刘昌财; 关键词：旱柳体外培养

西伯利亚蓼半胱氨酸合成酶基因的克隆与表达被引量：5: 2008年; 半胱氨酸合成酶是植物半胱氨酸合成反应的关键限速酶。文中应用RACE技术从西伯利亚蓼中成功克隆了半胱氨酸合成酶基因(GenBank登录号:EU597481),命名为PcCSase1,该基因全长cDNA为1260bp,编码382个氨基酸。经生物信息学分析,初步确定PcCSase1的N端前16个氨基酸为信号肽,并引导PcCSase1蛋白定位于胞质,为胞质型半胱氨酸合成酶。同源序列分析表明,此蛋白与其他植物半胱氨酸合成酶成熟蛋白序列高度保守,氨基酸相似性达到90%左右。荧光定量RT-PCR分析表明,PcCSase1在西伯利亚蓼的叶、茎和地下茎中均有表达,叶中表达最高,茎和地下茎次之,在3%NaHCO3胁迫过程中,该基因在叶、茎和地下茎中均在第2d表达量最高。将PcCSase1转入酿酒酵母INVSc1,结果显示培养基中半胱氨酸和菌体中谷胱甘肽含量均有显著增加,在10%NaHCO3和5mol/LNaCl胁迫下,转基因INVSc1-pYES2-PcCSase1菌株的存活率明显高于对照INVSc1-pYES2,证明PcCSase1基因具有耐高盐的作用。; 刘明坤刘关君魏志刚阎秀峰曲春浦王垠刘桂丰杨传平; 关键词：半胱氨酸合成酶西伯利亚蓼定量RT-PCR

西伯利亚蓼铜伴侣蛋白基因在盐胁迫条件下的表达分析被引量：4: 2008年; 铜伴侣蛋白是细胞质中负责传递铜离子的一种小分子转运蛋白,在逆境胁迫过程中铜伴侣蛋白的ATX1家族具有消除活性氧的作用.本研究应用RACE技术从西伯利亚蓼中克隆了具有完整编码区的铜伴侣蛋白全长cDNA序列,命名为PsATX-1.PsATX-1基因全长516 bp,其中开放读码框为228 bp,编码75个氨基酸,5′非编码区为83 bp,3′非编码区为204 bp.GenBank中登录号为EU620702.经比对发现,该基因所编码蛋白拥有重金属结合位点MXCXXC,缺少多数高等植物铜伴侣蛋白(CCH)所特有的C末端结构域(CTD).实时荧光定量PCR分析显示,PsATX-1基因在西伯利亚蓼的地下茎、茎、叶中皆有表达,其中叶中表达量最高;PsATX-1基因受3%NaHCO3胁迫诱导,在不同部位表达模式有差异.; 刘关君曲春浦刘明坤魏志刚刘桂丰杨传平; 关键词：西伯利亚蓼 RACE 实时荧光定量PCR

盐胁迫下西伯利亚蓼茎叶正反消减文库的构建及初步分析被引量：2: 2009年; 正向文库以3%NaHCO3胁迫48h的材料(茎、叶)为实验方(tester),以未胁迫的材料(茎、叶)为消减方(driver);在负向文库中,以未胁迫的材料(茎、叶)为实验方(tester),以3%NaHCO3胁迫48h的材料(茎、叶)为消减方(driver),利用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)构建了3%NaHCO3胁迫下西伯利亚蓼茎叶正反消减文库。从文库中共获得2282条有效EST序列,其中从茎正向消减文库中获得598条,从茎负向消减文库中获得490条,从叶正向消减文库中获得627条,从叶负向消减文库中获得567条。经BlastX序列比对后,通过MIPs方法对EST功能进行分类并对茎叶正反消减文库做了比较,其中茎与叶部除细胞救援与防御、转运组件中变化趋势相同外,在代谢、能量、光合作用、蛋白合成、转录和信号传导等方面均表现为相反趋势,另外通过荧光定量RT-PCR对12个潜在与盐胁迫相关基因进行定量分析,结果显示12个基因在未经胁迫与盐胁迫处理后的西伯利亚蓼叶与茎部有着很大差异,说明叶与茎部在NaHCO3条件下可能具有不同应答机制与分工,这有助于进一步理解西伯利亚蓼分子耐盐机制。; 刘关君刘明坤许志茹阎秀峰魏志刚杨传平; 关键词：西伯利亚蓼消减文库盐胁迫差异表达基因

植物半胱氨酸合成酶复合体(SAT/OAS-TL)研究进展被引量：5: 2008年; 综述了植物半胱氨酸的合成调节和半胱氨酸合成酶复合体的结构、调节机理及其植物转基因的研究进展。; 刘明坤刘关君

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