中国博士后科学基金(20080440336)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 相关机构：北京中医药大学内蒙古民族大学吉林大学第一医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组人胸腺素α1基因在黄芪毛状根中的表达被引量：1
- 2010年
- 目的利用黄芪毛状根表达人胸腺素α1。方法合成人胸腺素α1基因,构建重组载体pCAMBIA1301-hTα1,以黄芪下胚轴为外植体,通过发根农杆菌C58C1介导转入黄芪毛状根中,取潮霉素抗性毛状根用PCR法检测人胸腺素α1基因的整合,SDS-PAGE、Western印迹法分析人胸腺素α1基因的表达。结果潮霉素抗性毛状根整合并表达了人胸腺素α1基因。结论重组人胸腺素α1基因在黄芪毛状根中能够表达,为以黄芪毛状根为生物反应器工业化生产人胸腺素α1提供了实验基础。
- 范伟全包晓群韩树海刘永刚张宏桂
- 关键词：黄芪毛状根发根农杆菌
- 人碱性成纤维细胞生长因子在植物毛状根和毕赤酵母中的表达
- 2010年
- 目的在植物毛状根和毕赤酵母中表达人碱性成纤维细胞生长因子(Human basic fibroblast growth factor,hbFGF),并对发酵条件进行优化。方法将hbFGF基因分别克隆至表达载体pCAMBIA1301和pPICZα上,构建重组表达质粒pCAMBIA1301-hbFGF和pPICZα-hbFGF。通过发根农杆菌介导,将pCAMBIA1301-hbFGF质粒转入大豆毛状根;采用电转化法将质粒pPICZα-hbFGF转入毕赤酵母X-33菌株,PCR法筛选阳性转化子,诱导表达。筛选高效稳定表达株,发酵培养并优化发酵条件,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物,并进行纯化。结果经酶切及测序证明两个重组表达质粒构建正确;经PCR鉴定证明hbFGF基因已整合入大豆毛状根及毕赤酵母基因组中;筛选出了在两种体系中发酵培养的最佳条件;hbFGF在大豆毛状根和毕赤酵母中的表达量分别占总蛋白的31%和42%,且均具有良好的反应原性;经纯化后,均可见相对分子质量约18000的单一条带。结论 hbFGF能够在大豆毛状根和毕赤酵母中高效表达,为其大规模工业化生产奠定了实验基础。
- 范伟全牟旭鹏韦安慧刘永刚张宏桂
- 关键词：毛状根毕赤酵母发酵
