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猪细小病毒LDR-PCR检测方法的建立和应用: 2012年; 为准确特异灵敏地检测猪细小病毒(PPV),建立一种新的LDR-PCR方法。首先在病毒的保守区内设计一对LDR探针,LDR探针两端各连有一段引物对应序列,以连接产物为模板进行PCR,琼脂糖凝胶电泳检测结果。以标准质粒为模板,通过对LDR反应的退火温度、连接酶浓度及探针浓度等反应条件进行优化,确定了LDR最佳的反应体系,并建立了LDR-PCR方法。结果表明,可以特异地检测PPV,与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)无交叉反应;最低检测限为102个拷贝。利用建立的方法对41例临床样本进行检测,14份样品PPV阳性,与普通PCR检测结果符合率为97.6%。; 董沁芳郭瑶汪平程菊会徐辉丁先锋郭江峰姜永厚; 关键词：猪细小病毒

猪圆环病毒2型猪伪狂犬病病毒和猪细小病毒三重PCR检测方法的建立被引量：21: 2005年; 针对猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2、猪伪狂犬病病毒(PRV)gD和猪细小病毒(PPV)VP2基因保守区域,设计了特异性引物,在分别建立单一病毒基因PCR检测方法的基础上,通过对3组引物的比例和浓度、dNTPs和Mg2+浓度、退火温度等条件的优化,建立了针对上述3种病毒的三重PCR检测方法。敏感性试验表明,应用该方法最低可检测到4×10-4ng/μL的PRV双链DNA模板和2×10-5ng/μL的PCV2和PPV单链DNA模板。对21份自然感染病猪样品的检测结果表明,该三重PCR检测结果与单一PCR检测的结果完全符合。试验结果显示,建立的三重PCR方法可用于3种DNA病毒的同时检测,具有快速、准确的特点,有临床应用前景。; 方立徐辉陈伟杰赵灵燕倪柏锋方维焕; 关键词：猪圆环病毒2型猪伪狂犬病病毒猪细小病毒三重PCR

马铃薯卷叶病毒的RT-LDR-PCR检测: 2011年; 马铃薯卷叶病毒（Potato leaf roll virus,PLRV）属黄症病毒科Luteoviridae黄花病毒属Polerovirus,是目前严重影响马铃薯产量与品质的病毒,其分布局限于寄主植物的韧皮部,且含量非常低,难于提纯,这给PLRV检测带来很大的困难[1]。; 汪平郭瑶程菊会董沁芳商晗武姜永厚; 关键词：马铃薯卷叶病毒 PCR检测马铃薯产量 LEAF 寄主植物 PLRV

同时检测猪圆环病毒2型、猪细小病毒和伪狂犬病毒连接酶检测反应-PCR基因芯片检测方法的建立被引量：3: 2011年; 为快速、灵敏、准确地同时检测和鉴别猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)和伪狂犬病毒(PRV)的方法,本研究采用连接酶检测反应(LDR)-PCR和基因芯片技术建立一种新型检测方法。首先在3种病毒的保守区内分别设计一对LDR探针,两端各连接一段通用序列,依次进行LDR、通用引物荧光标记扩增和芯片杂交,同时比较引物标记和Cy5-dCTP标记方法的灵敏度。结果表明该方法可以特异地检测PCV2、PPV和PRV3种病毒,而对牛病毒性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、猪圆环病毒1型检测结果均为阴性;对3种病毒的最低检测限少于10个拷贝;Cy5-dCTP标记检测的灵敏度显著高于引物标记。利用建立的方法对41例临床样品进行检测,与普通PCR检测结果符合率为97.6%～100%。该方法的建立为基础研究和临床应用提供了技术平台。; 郭瑶汪平董沁芳程菊会徐辉丁先锋郭江峰姜永厚; 关键词：通用芯片猪病毒

猪瘟病毒基因芯片检测技术的建立与应用被引量：6: 2009年; 应用寡聚核苷酸基因杂交技术建立一种快速可靠的检测猪瘟病毒的方法。在CSFV病毒保守序列5′非编码区设计了两对特异性引物，在此引物之间设计了特异的核苷酸探针（22—30mer）。通过PCR扩增Cy5标记的DNA片段与固定在玻片表面的探针杂交进行CSFV检测。该技术结合了PCR方法的高度敏感性和DNA-DNA杂交技术的选择特异性。并利用该方法对87例临床样品进行了检测鉴定，结果分析显示，可准确鉴别CSFV病毒，灵敏度与琼脂糖凝胶检测接近，可检测到的质粒最低浓度为0．4pg／μl。结果表明寡核苷酸基因芯片技术可有效地应用于CSFV临床诊断和分子流行病学调查。; 姜永厚商晗武徐辉陈伟杰丁先锋赵灵燕; 关键词：猪瘟病毒基因芯片

多重PCR同时检测猪圆环病毒2型,猪细小病毒,猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒被引量：13: 2009年; 本试验建立一种可同时检测猪圆环病毒2型(PCV-2),猪细小病毒(PPV),猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),猪瘟病毒(CSFV)4种病毒的多重PCR方法。对于每一种特定的病毒,用4对寡核苷酸引物均能特异扩增其目的片段。以含有病毒目的片段的质粒为模板,测定了多重PCR的检测灵敏度,PRRSV和CSFV检测最低限是48 pg,而PPV和PCV-2为0.48 pg。利用建立的多重PCR方法对具有产自有繁殖障碍母猪的仔猪或具有呼吸障碍症状的76个仔猪样本进行检测。检出了4种病毒的存在,其中26个样本(34.2%)同时感染了2种以上病毒。结果表明多重PCR方法检测猪混合感染的病毒,是一种快速、灵敏、低成本、高效率的病原学诊断工具。; 姜永厚徐辉商晗武朱良俊陈伟杰赵灵燕方立; 关键词：猪圆环病毒2型猪细小病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒猪瘟病毒多重PCR

宠物用生物制品研究进展: 2007年; 近年来随着宠物业在中国迅速发展,宠物的健康问题逐渐受到了人们的重视。宠物用生物制品作为宠物健康的有力保障,目前已被广泛应用于宠物疾病的预防、治疗和诊断。本文综述了宠物用生物制品的种类及其研发状况。; 赵永旭姜永厚董原陈韦商晗武; 关键词：宠物疫苗抗体

基于多重PCR的寡核苷酸基因芯片检测猪瘟病毒,猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒及猪圆环病毒1型和2型被引量：7: 2010年; 为了建立一种可同时检测区分猪瘟病毒(CSFV),猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)的寡核苷酸基因芯片方法,本研究针对每种病毒设计了4条～6条寡核苷酸探针,检测低限为1.6×104PCV-2拷贝数/μL,1.6×104CSFV拷贝数/μL,1.6×105PRRSV拷贝数/μL,比琼脂糖凝胶灵敏约10倍。利用建立的寡核苷酸基因芯片方法对76个仔猪样本进行了检测,检出了3种病毒的存在,其中25个样本(32.9%)同时感染了2种以上病毒。结果表明寡核苷酸基因芯片检测是一种快速、灵敏和高效的猪只混合感染病毒的病原学诊断方法。; 姜永厚商晗武徐辉朱良俊丁先锋陈伟杰赵灵燕方立; 关键词：基因芯片猪瘟病毒猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒猪圆环病毒

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