江苏省科技支撑计划项目(BE2008623)
- 作品数：2 被引量：16H指数：2
- 相关作者：周国华马寅姣成思佳初亚男崔仑标更多>>
- 相关机构：中国药科大学江苏省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：江苏省科技支撑计划项目中央高校基本科研业务费专项资金江苏省基础研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 热稳定生物素化荧光素酶的制备及其在焦测序中的应用被引量：5
- 2010年
- 新一代大规模焦测序技术需要稳定的可固定化的荧光素酶,为了制备热稳定性好且被生物素化的荧光素酶,本研究采用基因工程方法将生物素羧基载体蛋白C端87个氨基酸残基(BCCP87)与荧光素酶在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行融合表达,以实现菌体内直接表达生物素化的荧光素酶(BCCP-LUC);并对北美萤火虫(Photinus pyralis)荧光素酶基因进行了定点突变以增强其热稳定性;用链亲和素包被的磁珠对重组融合蛋白进行固定化,用于焦测序。实验结果表明:突变后的荧光素酶在50℃环境中仍具有活性;在43℃下10min活性保留大于80%,热稳定性明显增强。Western blot分析结果表明,荧光素酶能够在大肠杆菌内生物素化。用链亲和素包被的磁珠结合BCCP-LUC后具有较高活性(2.1×105RLU/μL Beads),经过多次洗涤活性无明显下降。采用微球固定的荧光素酶以及ATP硫酸化酶成功的进行了DNA序列的测定且定量准确,表明固定化的荧光素酶可以应用于焦测序中,为建立高通量大规模芯片焦测序技术提供有效、稳定的工具酶。
- 朱术会邹秉杰武海萍马寅姣陈颖周国华
- 单管高灵敏度等温扩增技术快速检测甲型H1N1流感病毒被引量：11
- 2011年
- 建立了单管逆转录环介导等温扩增法(RT-LAMP)快速检测甲型H1N1流感病毒的方法。针对甲型H1N1流感病毒的M基因和HA基因的保守区,设计了两组特异性引物,分别用于筛选甲型流感病毒及鉴定甲型H1N1流感病毒。对反应体系中的关键因素进行优化,反应结果可直接通过浊度或者SYBR GreenⅠ荧光进行判定。本方法最低可检测到10拷贝/管的甲型H1N1流感病毒。为验证方法的可行性,对30例临床样本进行了检测,与美国疾病控制与预防中心(CDC)的TaqMan方法进行对比,检测的灵敏度和特异性分别为92%和100%。本方法实现了单管快速检测甲型H1N1流感病毒,为甲型H1N1流感病毒的现场检测提供了新方法。
- 成思佳陈之遥初亚男崔仑标史智扬马寅姣周国华
- 关键词：甲型H1N1流感病毒SYBR
