国家自然科学基金(30200257)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肌动蛋白参与TNFRⅡ介导的TM-TNF杀瘤活性的研究被引量：1
- 2007年
- 目的研究肌动蛋白解聚对跨膜型肿瘤坏死因子(TM-TNF)杀瘤活性的影响。方法利用细胞松弛素D解聚肌动蛋白,采用免疫荧光技术,观察HL-60细胞内肌动蛋白的形态改变;采用细胞毒实验,检测TM-TNF杀瘤活性;采用免疫共沉淀技术和Western blot,探索肌动蛋白参与TM-TNF杀瘤活性的分子机制。结果2μmol/L松弛素D对HL-60细胞内肌动蛋白有明显的解聚效果;肌动蛋白解聚对TM-TNF杀瘤活性有抑制作用;被刺激的HL-60细胞主要从TNFRⅡ上沉淀下大量的肌动蛋白。结论肌动蛋白主要参与TNFRⅡ介导的TM-TNF正向信号的传递,以增强TM-TNF的杀瘤活性。
- 陈慧张海龙秦娜琳姜晓丹李卓娅
- 关键词：肌动蛋白
- 人跨膜型TNF-α(TM-TNF-α)特异性单克隆抗体的制备、鉴定及功能初探
- 2007年
- 目的:制备TM-TNF-α特异性单克隆抗体,并进行鉴定和初步功能分析。方法:用表位预测软件选定TM-TNF-α特异的20个氨基酸多肽,偶联载体蛋白,免疫BALB/c小鼠;用杂交瘤技术制备单克隆抗体。采用ELISA、流式细胞术和Western blot鉴定单抗的特异性,观察单抗对Jurkat细胞在AICD模型中凋亡率的影响。结果:成功制备了6株抗TM-TNF-α的单克隆抗体。ELISA结果显示6株单抗均特异性结合免疫原多肽,与S-TNF-α等细胞因子无交叉反应;流式细胞术显示6株单抗均能结合细胞膜表面TM-TNF-α分子,并可区分人源和鼠源TM-TNF-α;Western blot结果证实6株单抗只能识别26kD的人TM-TNF-α,而不识别17kD的S-TNF-α。在AICD模型中,单克隆抗体不影响Jurkat细胞凋亡率。结论:成功制备了6株TM-TNF-α特异性单克隆抗体,且单抗不干扰TNF-α与TNFR结合,为进一步研究TM-TNF-α在相关疾病中的作用提供又一研究手段。
- 柯杭君喻明霞王晶石文芳姜小丹冯玮李卓娅
- 关键词：跨膜型TNF-Α单克隆抗体杂交瘤技术
- 抗人跨膜型肿瘤坏死因子-α多克隆抗体的制备和鉴定
- 2005年
- 目的制备特异的能区分人跨膜型肿瘤坏死因子(TM TNFα)和分泌型肿瘤坏死因子(sTNFα)的多克隆抗体。方法借助抗原肽预测软件对TM TNFα的抗原表位进行预测,合成TM TNFα特异的20个氨基酸的多肽,将之与匙孔碱血蓝蛋白(KLH)耦联,BALB/c小鼠皮背部多点注射,收集分离血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和流式细胞术鉴定其特异性。结果成功免疫BALB/c小鼠,ELISA证实该抗血清与免疫多肽有良好的结合,而与sTNFα、白细胞介素2(IL2)和γ干扰素(IFNγ)无交叉反应,流式细胞术显示该抗血清可与细胞系U937表达的TM TNFα发生特异性结合。结论成功制备了TM TNFα特异性多克隆抗体,为制备TM TNFα特异性单克隆抗体奠定了基础,为区分TM TNFα和sTNFα的生物学作用提供了有力的工具。
- 柯杭君李清芬李卓娅姜小丹冯玮徐勇熊平
- 关键词：肿瘤坏死因子多克隆抗体酶联免疫吸附试验流式细胞术
