国家自然科学基金(81071638)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：何志巍李彬彬黄国良孔霞董子明更多>>
- 相关机构：广东医学院郑州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金湛江市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 组蛋白H3Ser10磷酸化对人鼻咽癌细胞增殖和转化的调控作用被引量：1
- 2014年
- 目的 :探讨组蛋白H3第10位丝氨酸(serine 10,Ser10)磷酸化在调控鼻咽癌CNE1细胞增殖和恶性转化中的作用及可能的作用机制。方法 :采用蛋白质印迹法检测表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)作用下鼻咽癌CNE1细胞中组蛋白H3Ser10磷酸化水平的改变;构建组蛋白H3野生型(H3WT)和突变型(H3S10A)真核表达质粒,转染CNE1细胞,采用杀稻瘟菌素筛选获得稳定过表达野生型或突变型组蛋白H3细胞株;蛋白质印迹法检测转染组蛋白H3野生型和突变型重组质粒后对CNE1细胞中组蛋白H3Ser10磷酸化水平的影响;采用CCK-8(cell counting kit-8)法和软琼脂集落形成实验检测过表达野生型和突变型组蛋白H3对CNE1细胞增殖和克隆形成能力的影响;分别采用蛋白质印迹法和双荧光素酶报告基因系统检测过表达野生型和突变型组蛋白H3对CNE1细胞中c-Jun、c-Fos和Bcl-2蛋白表达以及激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)转录活性的影响。结果 :EGF可诱导CNE1细胞中组蛋白H3Ser10磷酸化水平的上调;成功构建了稳定过表达野生型和突变型组蛋白H3的CNE1细胞株,组蛋白H3Ser10位点的突变可明显抑制EGF作用下组蛋白H3的磷酸化水平;与转染空质粒细胞相比,过表达野生型组蛋白H3可促进EGF作用下CNE1细胞增殖和软琼脂克隆形成能力,并且上调c-Jun和c-Fos蛋白的表达以及提高AP-1的转录活性,但过表达突变型组蛋白H3则没有引起上述明显的改变。结论 :组蛋白H3,尤其是组蛋白H3Ser10磷酸化,在调控EGF诱导的CNE1细胞增殖和恶性转化中具有重要作用,其机制与促进c-Jun和c-Fos基因的转录,进而增强AP-1的活性有关。
- 李彬彬万郑王槐高陈华何志巍
- 关键词：鼻咽肿瘤组蛋白类表皮生长因子磷酸化CNE1细胞
- 依托泊苷联合紫杉醇对前列腺癌细胞株生长的协同抑制作用
- 2013年
- 目的研究单独或联合使用依托泊苷(ETOP)和紫杉醇(TAXOL)对前列腺癌细胞株生长和细胞凋亡的影响。方法前列腺癌细胞株经过不同浓度的ETOP和TAXOL单独或联合用药处理后,用MTT法检测细胞抑制率,荧光显微镜观察细胞染色质形态的改变,DNA梯度定性检测细胞凋亡的变化。结果单独利用ETOP或TAXOL和联合用药,均能抑制前列腺癌细胞生长,并呈浓度和时间依赖关系,其中联合用药组抑制率明显高于单独用药组(P<0.05)。ETOP、TAXOL及联合用药组细胞核出现典型的凋亡形态学的改变,细胞数目明显少于对照组,联合用药组细胞数目最少。ETOP、TAXOL及联合用药组处理后的前列腺癌细胞的DNA,经琼脂糖凝胶电泳均出现典型"梯形"DNA条带,联合用药组改变最明显。结论 ETOP和TAXOL均能够抑制前列腺癌细胞生长,联合用药能产生协同抑制作用。
- 刘星言黄国良邹颖王建何志巍丁聪聪刘宏
- 关键词：依托泊苷紫杉醇前列腺癌凋亡
- siRNA靶向干扰组蛋白H3表达对人鼻咽癌细胞增殖的抑制作用被引量：2
- 2013年
- 目的:应用RNA干扰技术抑制人鼻咽癌细胞株CNE1中组蛋白H3的表达,观察其对鼻咽癌细胞增殖的影响。方法:构建针对组蛋白H3的小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,转染CNE1细胞并筛选获得稳定表达细胞株。实时荧光定量RT-PCR和Western blotting检测细胞中组蛋白H3 mRNA和蛋白表达的改变;CCK-8法和平板克隆形成实验观察细胞增殖能力的改变;双萤光素酶报告系统检测细胞激活蛋白1(AP-1)转录活性的改变。结果:与阴性对照组和空白对照组相比,siRNA-H3质粒转染组的组蛋白H3 mRNA和蛋白表达均显著下降,细胞生长速度明显减慢,表皮生长因子诱导的细胞克隆形成能力和AP-1转录活性均受到明显抑制。结论:通过RNA干扰技术阻断组蛋白H3的表达,可抑制CNE1细胞的生长、增殖,其机制可能与下调AP-1转录活性有关。组蛋白H3可能是潜在的肿瘤治疗新靶点。
- 李彬彬黄国良孔霞李蓉董子明何志巍
- 关键词：鼻咽肿瘤组蛋白H3RNA干扰激活蛋白1
