国家自然科学基金(81260288)
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
- 相关作者：刘芬钱克俭邵强赵宁曾振国更多>>
- 相关机构：南昌大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省教育厅科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- MCC950能减轻线粒体损伤相关分子模式对 肺泡巨噬细胞的致炎效应被引量：7
- 2016年
- 目的：观察一种化学合成小分子物质MCC950对线粒体损伤相关分子模式（MTDs）诱导肺泡巨噬细胞炎症反应的影响，并分析其可能的机制。方法利用差速离心法提取SD大鼠肝脏组织来源的MTDs。体外培养大鼠肺泡巨噬细胞NR8383细胞株，并分为空白对照组、LPS阳性对照组（1mg/LLPS刺激12h）、MTDs组（50、100、200mg/LMTDs刺激12h）、MCC950组（0.1μmol/LMCC950处理30min）、MCC950＋MTDs组（终浓度0.001、0.01、0.1、1.0μmol/LMCC950预处理30min＋100mg/LMTDs刺激12h）5组。收集各组细胞上清液及细胞，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL-1β、IL-18）含量；采用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测细胞中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1及其前体（caspase-1、pro-caspase-1）、IL-1β及其前体（pro-IL-1β）的蛋白表达。结果①与空白对照组相比，50、100、200mg/L的MTDs刺激组细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-18含量均显著升高〔TNF-α（ng/L）：459.17±66.71、968.27±124.29、1128.6±172.02比34.67±11.66，IL-1β（ng/L）：341.57±38.09、685.00±75.36、784.97±89.28比26.33±8.04，IL-18（ng/L）：175.87±37.43、364.23±39.24、370.60±44.55比73.77±12.10，均P＜0.05〕，且呈剂量依赖性；并与LPS组具有类似的致炎作用。②与MTDs组相比，0.01、0.1及1.0μmol/LMCC950＋MTDs组细胞上清液中IL-1β、IL-18含量显著降低〔IL-1β（ng/L）：334.23±33.56、38.67±12.89、36.13±17.69比724.00±77.45，IL-18（ng/L）：165.77±25.47、71.37±5.99、66.80±14.61比412.23±40.15均P＜0.05〕，其中0.1μmol/L为产生抗炎作用的最佳有效浓度。而各浓度MCC950对TNF-α影响不大。③与MTDs组相比，0.01μmol/LMCC950＋MTDs组细胞中caspase-1及IL-1β蛋白表达显著下降（A值：14753.29±950.31比19222.50±1234.13，9981.06±673.63比12759.26±574.69，均P＜0.05），pro-caspase-1及pro-IL-1β蛋白表达无�
- 彭菲菲曾振国邵强赵宁江榕钱克俭刘芬
- 关键词：急性呼吸窘迫综合征炎症反应
- 微小RNA-155可降低脂多糖诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应被引量：5
- 2018年
- 目的观察调控微小RNA-155(miR-155)对脂多糖(LPS)诱导大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的影响。方法体外培养大鼠肺泡巨噬细胞NR8383,取处于对数生长期的细胞进行实验。①以1mg/L的LPS分别刺激大鼠肺泡巨噬细胞3、6、12、24h,并设磷酸盐缓冲液(PBS)对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的动态变化,采用实时定量反转录-聚合酶链反应(RT—qPCR)检测细胞中miR-155的动态表达,确定LPS刺激的最佳时间为12h。②应用羧基荧光素(FAM)荧光标记的模拟物(FAM mimic)和抑制物(FAM inhibitor)分别转染肺泡巨噬细胞6h,倒置荧光显微镜下观察转染效果,确定mimic的最佳转染浓度为20nmol/L,inhibitor的最佳转染浓度为100nmol/L。按最佳转染浓度将miR-155mimic、miR-155 inhibitor分别转染至肺泡巨噬细胞24h后,给予1mg/L的LPS刺激细胞12h,并设mimic阴性对照+LPS组和inhibitor阴性对照+LPS组。采用ELISA法检测细胞上清液中IL-1β、TNF—α的表达,观察miR-155对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控作用。结果①用1mg/L的LPS刺激肺泡巨噬细胞后,细胞上清液中IL-1β、TNF—α含量和细胞中miR-155的表达均随时间延长而呈持续升高趋势,IL-1β和TNF-α含量于12h达峰值,miR-155表达于24h达峰值[与PBS对照组比较,IL-1β(ng/L):910.43±36.09比22.66±7.84,TNF-α(ng/L):3138.39±394.10比233.92±8.84,miR-155(2^-△△Ct):7.82±0.30比1,均P<0.05]。②倒置荧光显微镜下显示,采用20nmol/L FAM mimic或100nmol/L FAM inhibitor转染肺泡巨噬细胞6h后,大量细胞呈现绿色荧光,提示转染成功。采用20nmol/L的miR-155 mimic转染细胞24h后细胞中miR-155表达较其阴性对照组上调了(236.73±46.49)倍(P<0.05),加入1mg/L的LPS刺激细胞24h后上清液中IL-1β、TNF-α含量较其阴性对照组显著降低[IL-1β(ng/L):324.37±36.59比799.31±39.44,TNF-α(ng/L):1554.01±342.48比3020.49±418.30
- 彭巍赵宁刘琴聂成卿城邵强刘芬钱克俭丁成志
- 关键词：肺泡巨噬细胞炎症反应细胞转染
- 胞浆内线粒体DNA在脂多糖诱导肺泡巨噬细胞炎症反应时的变化被引量：1
- 2014年
- 目的观察胞浆内线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的NR8383肺泡巨噬细胞炎症反应时的动态变化,以初步探讨胞浆内mtDNA在肺泡巨噬细胞炎症反应中的作用。方法将体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)用终浓度为1μg·mL-1的LPS刺激0、3、6、12和24 h后收集细胞培养上清液及细胞,采用差速离心法分离胞浆中的mtDNA,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测胞浆中mtDNA表达情况,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中IL-1β蛋白水平。结果 LPS刺激后3、6、12和24 h IL-1β及胞浆中mtDNA的含量均显著高于0 h组(P<0.01)。结论 LPS刺激肺泡巨噬细胞后,胞浆中mtDNA含量升高,推测其可能参与了肺泡巨噬细胞的炎症反应。
- 曾振国钱克俭刘芬李勇黄彩雪邓文刚
- 关键词：线粒体DNA肺泡巨噬细胞脂多糖
