国家自然科学基金(39970485)
- 作品数：11 被引量：179H指数：8
- 相关作者：朱常香温孚江郭兴启孟祥兵宋云枝更多>>
- 相关机构：山东农业大学浙江大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 翻译和非翻译马铃薯Y病毒外壳蛋白基因介导的抗病性比较被引量：44
- 2001年
- 利用RT PCR方法克隆获得马铃薯Y病毒烟草叶脉坏死株系 (PVYN)的可翻译和不可翻译外壳蛋白 (CP)基因 ,并分别插入 pROKⅡ质粒中获得重组双元表达载体。通过根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens) 介导的基因转化方法 ,将可翻译和不可翻译的PVYN CP基因分别导入烟草栽培品种NC89叶片组织中 ,得到抗卡那霉素的再生植株。对所得到的抗卡那霉素的再生苗进行PCR检测表明 ,被导入可翻译和不可翻译CP基因的植株分别占卡那霉素抗性植株的 95 %和 98%。攻毒实验表明 ,两种类型的转基因烟草对PVYN 的抗病性具有相似性 ,其表现型为 :免疫、抗病和感病。免疫型转基因植株的抗病性不受接种物类型及其剂量的影响。Southern印迹杂交结果显示 ,目的基因已经整合到烟草基因组中。Northern印迹杂交证明 ,两种类型的CP基因都已在RNA水平上得到了表达 ,但细胞内RNA的积累量与转基因植株的抗病强度成负相关。Western印迹杂交表明 ,在表达不可翻译PVYN CP基因的转基因植株内未检测到CP蛋白 ,而在导入可翻译的PVYN CP基因的植株内检测到了CP蛋白 ,且CP蛋白含量与抗病性不存在正相关。本研究结果证明 ,表达可翻译与不可翻译PVYN CP基因的转基因烟草对PVYN 的抗病性均为RNA介导的抗病性。
- 郭兴启温孚江宋云枝孟祥兵吕士恩郑成超朱常香
- 关键词：马铃薯Y病毒外壳蛋白基因RNA介导抗病性翻译
- RNA沉默与植物病毒被引量：23
- 2002年
- 植物中 ＲＮＡ沉默（ＲＮＡ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ）亦称为转录后基因沉默（ＰＴＧＳ）或共抑制，是植物抵抗外来核酸（转座子、转基因或病毒）入侵；并保护自身基因组完整性的一种防御机制。ＲＮＡ沉默是近十年来发现的植物界中普遍存在的现象，已成为植物分子生物学领域的一个新的研究方向。对ＲＮＡ沉默特点和机制的研究表明，植物病毒与（转基因）植物内发生的 ＲＮＡ沉默有着密切的联系。作者从病毒对ＲＮＡ沉默的诱导、抑制、防御等方面，简述了 ＲＮＡ沉默与病毒的关系；并对病毒载体所诱导的 ＲＮＡ沉默在植物发育和基因组功能分析等方面的应用价值进行了讨论。
- 郭兴启朱常香宋云枝
- 关键词：RNA沉默植物病毒病毒诱导基因沉默
- 一个马铃薯Y病毒山东分离物的分离与鉴定被引量：13
- 2003年
- 从具有典型花叶症状的马铃薯叶片中分离到马铃薯Y病毒 (PotatovirusY ,PVY) (本文称PVY SD TA分离物 ) ,扩繁后 ,提纯病毒 ,电镜下可观察到 70 0～ 90 0nm× 11nm的病毒粒体 ,病组织超薄切片观察可见风轮状的内含体结构 ,寄主反应特性研究表明其能侵染 2科 13种植物。SDS PAGE电泳检测病毒编码的外壳蛋白亚基的分子量为 33kDa。以PVY SD TA基因组RNA为模板 ,应用RT PCR方法和特异引物合成了外壳蛋白基因。对cDNA全序列分析表明 ,PVY SD TACP基因核苷酸序列与N株系的同源性为 96 % ,与GenBank中登录序列号为AJ390 30 6的O株系分离物的同源性最高 ,为 99% ;与国内不同学者报道的PVY中国流行株的同源性分别为 96 % ,97%和 98%。通过以上生物学特性和分子水平的研究将PVY SD TA鉴定为普通株系 (PVYO 株系 )。
- 王秀芳朱常香温孚江竺晓平郭兴启
- 关键词：马铃薯Y病毒分离物外壳蛋白克隆
- 一个马铃薯X病毒分离物的外壳蛋白基因序列分析与株系鉴定被引量：16
- 2003年
- 对山东省侵染马铃薯的一个马铃薯X病毒(PVX)分离物PVX-SD_1的外壳蛋白(CP)基因进行了克隆和序列分析。以提纯的病毒RNA为模板,应用RTPCR扩增目的基因,通过常规的基因克隆法将扩增的CP基因导入pUC19载体,测序。结果表明,PVX-SD_1的CP基因长719bp,可编码248个氨基酸;与Gen-Bank中报道的15个有代表性的株系或分离物相比较,核苷酸同源性在80.1％～99.7％,氨基酸同源性在89.8％～100％;与欧洲株系UK_3仅1个核苷酸不同,同源性为99.7％,氨基酸同源性达100％,表明它们可能为同一株系,属于X^3细。
- 曲静朱常香温孚江郭兴启宋云枝
- 关键词：马铃薯外壳蛋白基因
- 植物转基因沉默与病毒抗性被引量：5
- 2001年
- 对植物基因沉默的机制及其在植物抗病毒基因工程中的应用作了综述 .植物转基因沉默是转基因植株中普遍发生的一种现象 ,引起植物转基因沉默的原因是多方面的 ,但主要涉及转录水平的基因沉默和转录后水平的基因沉默 .
- 孟祥兵田玉安王秀芳王爱菊
- 关键词：DNA甲基化共抑制
- 植物分子育种方法研究进展被引量：13
- 2001年
- 综述了各种植物外源遗传物质转移方法 ,就其原理和各自特点作了概述 .并且展望了各种转基因方法的应用前景 。
- 张杰道孟祥兵
- 关键词：植物转基因
- 利用RNA介导的抗病性获得高度抗马铃薯Y病毒的转基因烟草被引量：49
- 2001年
- 以马铃薯 Y病毒坏死株系 (PVYN)的 RNA为模板 ,应用反转录 -聚合酶链式反应 (RT- PCR)方法 ,扩增出长度为 80 1bp的非翻译的马铃薯 Y病毒外壳蛋白基因。将扩增的片段克隆到 p BSK的Bam HI和 Kpn I之间并进行了序列测定。用 Bam HI和 Kpn I从重组克隆载体上切下该基因并插入到质粒 p ROKII内得到植物表达载体 p PVYCP。通过根癌农杆菌 (LBA4 40 4 )介导的方法转化烟草NC89,经卡那霉素抗性筛选、PCR和 Southern blot检测 ,获得 82株转基因植株。 Northern blot和Western blot分析表明 ,转基因植株只在 RNA水平上得到了表达。抗病性试验表明转基因植株之间抗性水平存在着差异 ,其中有 7株是对 PVYN高度抗病性的植株。转基因植株抗病特异性试验初步表明 ,对 PVYN 表现高度抗病的植株对 PVYO 也具有高度抗病性。
- 郭兴启吕士恩朱常香宋云枝孟祥兵郑成超温孚江
- 关键词：RNA介导病毒抗性马铃薯Y病毒转基因烟草
- 植物转座因子被引量：1
- 2001年
- 王爱菊孟祥兵
- 关键词：转座因子转座机制植物
- 转录后基因沉默与植物的病毒抗性被引量：38
- 2001年
- 转录后基因沉默 (PTGS)是近 10年发现的一种生物 (特别是真核生物 )细胞抵抗外来核酸入侵及保持生物自身基因组完整性的防御机制 ,特别是与生物的病毒抗性密切相关。PTGS最初在植物内发现 ,近几年又分别在真菌、动物等生物细胞内发现。经过 10年的研究 ,我们对PTGS的机制和特点有了相当的了解。这不但对深入地了解基因的表达调控机制意义重大 ,而且还可为人们如何调控和利用PTGS奠定了基础。本文从PTGS的特点、PTGS与病毒抗性、PTGS在真核生物内发生的广泛性等方面进行综述 。
- 温孚江朱常香
- 关键词：转录后基因沉默转基因植物病毒抗性RNA干扰
- 马铃薯Y病毒属病毒与寄主互作的分子基础被引量：3
- 2002年
- 近年来 ,分子生物学及生物技术的迅速发展 ,极大地促进了人们对马铃薯Y病毒属病毒与寄主之间 ,病毒与传播介体之间互作关系的研究 ,并取得了一些新的进展。从病毒诱导的症状 ,病毒的系统侵染、传播以及寄主植物抗病性等方面 ,对病毒与寄主互作关系的分子基础作一简述。
- 郭兴启李学涛朱常香温孚江
- 关键词：马铃薯Y病毒属寄主分子生物学
