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国家自然科学基金(81270927)
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韩洁
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小鼠前脂肪细胞3T3-L1培养与四联诱导分化方法的探讨
2016年
目的改进小鼠前脂肪细胞3T3-L1的培养并诱导分化为成熟脂肪细胞的方法。方法使用含有10%胎牛血清(FBS)的高糖型DMEM液体培养基常规培养小鼠前脂肪细胞,2~3d换液1次。细胞按诱导分化方式的不同分为三联诱导组和四联诱导组。三联诱导组诱导分化培养基Ⅰ成分为常规培养基基础上加用人胰岛素10mg/L,1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(IBMX)0.5mmol/L,地塞米松(DEX)1.0μmol/L;四联诱导组诱导分化培养基Ⅰ的成分为在三联诱导组基础上加入吲哚美辛0.1mmol/L。2组均诱导分化培养基Ⅰ培养2d,连续诱导2次后换用诱导分化培养基Ⅱ,成分为:高糖型DMEM培养基含10%胎牛血清、100U/mL青霉素和100mg/L链霉素混合液,人胰岛素10mg/L。培养2d,连续诱导2次。倒置显微镜和油红O染色观察诱导前及诱导后2组细胞的形态变化。结果小鼠前脂肪细胞3T3-L1状态良好,呈现铺路石状生长,均匀布满培养瓶底,2d传代1次。四联诱导组诱导分化结果优于三联诱导组。三联诱导剂诱导前脂肪细胞后,细胞形态并未发生明显变化。四联诱导剂诱导前脂肪细胞后,可达到90%以上的成熟脂肪细胞。成熟的脂肪细胞呈圆形,有大量脂滴聚集,油红O染色显现橘红色。结论在三联诱导基础上加入吲哚美辛的四联诱导法可以更好地促进脂肪前体细胞分化。
孙慧誌
田德润
孟洁
赵楠
韩洁
甘椿椿
王勇
关键词:
脂细胞
体外研究
细胞培养技术
3T3-L1细胞
AMPK/mTOR信号通路在DIO与DR大鼠胰腺中的表达
2014年
目的通过比较DIO大鼠和DR大鼠胰腺中AMPK/mTOR通路的变化探讨其对整个机体能量和代谢过程中的作用。方法建立食源性肥胖大鼠模型:100只体重均衡的大鼠随机分为①高脂饮食组(n=80)和②对照组(n=20),前者14周后根据体重分为肥胖(DIO)和肥胖抵抗(DR)两个亚组。通过免疫组化和免疫荧光的方法检测DIO和DR大鼠胰腺中AMPK/mTOR通路的表达变化。结果①14周后,高脂饮食组体重高于对照组体重(P<0.001),DIO与DR组之间体重相比有明显差异(P<0.001);②与DIO组相比,DR组大鼠胰腺的AMPK表达水平降低,mTOR下游的两个经典靶标S6K和4E-BP1表达水平明显增加。结论 DR大鼠胰腺AMPK水平降低,S6K和4E-BP1水平升高,说明AMPK抑制mTOR通路功能下降,导致胰岛α细胞分泌胰高血糖素增加,这可能是DR大鼠维持正常体重的原因之一。
韩洁
杨慧
杜建颖
王春妹
王启明
田德润
关键词:
食源性肥胖
肥胖抵抗
AMPK
胰岛Α细胞
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