国家自然科学基金(30100195)
- 作品数：9 被引量：37H指数：4
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- EGCG对羟自由基损伤小鼠胚胎海马神经元的保护作用被引量：2
- 2005年
- 为了探讨表没食子儿茶素没食子酸酚(tea polyphenol(-)-epigallocatechin gal-late,EGCG)对羟自由基损伤小鼠海马神经元的保护作用,采用原代细胞培养技术,分离培养18 d小鼠胚胎海马神经元,培养4 d后,加入FeSO4和H2O2进行处理,随后加入不同浓度的EGCG培养24 h,通过观察细胞的形态学变化,四甲基偶氮唑盐(methylthiazolydi-phenyl-tetrazolium bromide,MTT)比色法分析细胞活性,检测神经元中丙二醛(malondi-aldehyde,MDA)以及培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量的变化,以探讨EGCG对羟自由基损伤神经元的保护作用。结果显示,EGCG能够抑制神经元MDA的产生,降低神经元细胞外液中LDH的含量,增加细胞的活性,从而进一步证明EGCG能够清除羟自由基产生,减轻羟自由基对神经元损伤,对神经元的存活有一定的保护作用,为其用于治疗中枢神经系统病理性损伤的打下实验基础。
- 杨浩李静雯罗娜程希平鞠躬
- 关键词：细胞培养海马羟自由基
- 脊髓半切后损伤区周围ERK1/2活性的改变被引量：1
- 2004年
- 目的 观察大鼠脊髓半切后ERK1/ 2活性的变化及发生变化的细胞类型。 方法 大鼠行脊髓半横断术后 3d ,用免疫组织化学法和免疫荧光双标记法观察磷酸化ERK1/ 2的变化及其与各种神经细胞标记物的共存状况。 结果 观察到脊髓半切 3d大鼠的ERK1/ 2磷酸化程度明显升高。阳性细胞为分布于邻近损伤区周围的具有短突起的小胞体细胞。双标记表明其中的大部分阳性细胞为小胶质细胞和寡突胶质细胞。 结论 本研究提示脊髓半横断 3d ,ERK1/ 2参与了小胶质细胞和寡突胶质细胞的活化 。
- 程希平王春婷刘惠玲焦西英游思维鞠躬
- 关键词：ERK1/2脊髓半横断脊髓再生小胶质细胞
- Nogo-A在成年大鼠脑内神经元的分布被引量：19
- 2005年
- 目的研究Nogo_A阳性神经元在正常成年大鼠脑内的分布。方法免疫组织化学方法(ABC法)。结果Nogo_A在正常大鼠脑内的神经元和纤维有广泛的表达,出现在许多核团,主要在1.前脑的大脑皮质、嗅觉系统、海马、隔区、基底神经节、丘脑、下丘脑和视前区等部位;2.脑干的视听觉、体躯感觉、内脏觉核团、运动核团以及网状结构等;3.小脑Purkinje细胞和深核。阳性反应物主要见于神经元的胞浆和突起内,在脑室系统的嗅球室管膜、侧脑室和第三脑室部分室管膜细胞及其突起内也有表达。结论Nogo-A在脑内神经元的广泛存在提示其在正常状态下的脑功能中可能起重要作用。
- 程希平刘惠玲宋朝君金伯泉焦西英游思维鞠躬
- 关键词：NOGO-A脑室神经元免疫细胞化学
- Nogo-A在成年大鼠脊髓和背根节的分布被引量：6
- 2005年
- 目的研究NogoA在成年正常大鼠脊髓和背根节的分布。方法免疫组织化学方法(ABC法)和免疫荧光双标记法。结果正常成年大鼠的脊髓灰质分布有大量的NogoA免疫阳性的寡突胶质细胞、运动神经元和中间神经元,免疫阳性反应产物主要分布于细胞的胞体和部分突起中。NogoA广泛分布于穿行于脊髓白质的纤维包裹的髓鞘和轴突上。在脊髓前根、后根和坐骨神经的运动和感觉的有髓和无髓纤维也可观察到NogoA的表达。而背根神经节的神经元也大量表达NogoA,其强度由弱至强不等,广泛分布于大、中、小各类感觉神经元的胞质及突起中。结论NogoA在成年大鼠脊髓,背根神经节和外周神经纤维的广泛存在提示其在正常状态下的神经功能中可能起重要作用。
- 程希平刘惠玲宋朝君金伯泉焦西英游思维鞠躬
- 关键词：背根神经节外周神经髓鞘
- 新生鼠中枢神经系统内Nestin蛋白免疫阳性的组织分布
- 2006年
- 为了观察Nestin在新生SD大鼠中枢神经系统中的分布,探讨神经干细胞在新生鼠的分布.采用免疫荧光法,显示含神经干细胞特征性的标志物Nestin的阳性结构在新生SD大鼠中枢神经系统中的分布.结果表明在新生SD大鼠中枢神经系统中,Nestin在前脑、脑干和小脑的各个部位均有表达,阳性结构多为纤细的纤维状突起,分布密集,标记强度多为中等强度,分布相对比较均匀.在脊髓实质的Nestin免疫阳性产物明显减少,分布稀疏,染色也较浅,中央管Nestin免疫染色阳性的室管膜细胞很少,但在脊髓中央管的背侧(延髓见于腹侧和背侧)可见到“喷泉”状免疫强阳性纤维束垂直伸展,直达软膜.由此可得出结论:新生SD大鼠中枢神经系统的广泛脑区均存在大量的神经干细胞,而脊髓的神经干细胞数目较少,提示神经干细胞在生后从神经系统的尾端开始逐渐减少.
- 程希平刘惠玲焦西英赵宇游思维鞠躬
- 关键词：NESTIN神经干细胞胎鼠
- 3种方法检测体外神经细胞存活的技术探讨被引量：5
- 2005年
- 为了准确、客观、快速、高效地反映体外培养细胞存活的情况,将PC12细胞以不同密度接种于96孔板中,培养48h后,然后采用结晶紫比色法,中性红比色法,MTT比色法来检测细胞的存活情况,再将所得结果进行比较,比较3种方法的优缺点,寻求最佳检测细胞存活方案.结果发现,不同方法检测细胞存活的范围各不相同.其中结晶紫比色法细胞存活数与比色光吸收值(absorbancevalue,A值)呈正相关程度较其它两种好,而且检测细胞存活范围最为宽广.
- 杨浩鞠冬阳程希平鞠躬
- 关键词：存活细胞培养MTT比色法
- Nogo-A在维甲酸诱导SH-SY5Y细胞分化后的表达分布
- 2006年
- 目的研究Nogo-A在维甲酸(RA)诱导SH-SY5Y细胞分化后的表达及分布。方法采用免疫荧光单标记法和免疫荧光双标记法染色,显微镜观察。结果SH-SY5Y细胞经RA诱导后,细胞生长出较长的突起,具有典型的神经元形态。Nogo-A在未分化的SH-SY5Y细胞中主要分布于胞浆中。经RA诱导后,Nogo-A分布于胞浆及突起中,尤以突起末梢生长锥处免疫阳性强度高。结论Nogo-A在RA诱导SH-SY5Y细胞分化后的轴丘和生长锥处的表达提示其在神经元突起生长过程中可能起到重要作用。
- 赵宇游思维刘惠玲宋朝君金伯泉鞠躬程希平
- 关键词：NOGO-ASH-SY5Y细胞维甲酸分化
- 大鼠Nogo基因片段的克隆及与GST融合蛋白的表达和纯化被引量：4
- 2003年
- 目的 :获取大鼠Nogo基因片段并高效表达纯化 .方法 :用RT PCR技术 ,从成年SD大鼠脊髓的总RNA中 ,获得编码Nogo基因功能片段的DNA .测序后 ,通过酶切亚克隆至表达载体pGEX 4T 1,构建重组表达载体 ,并导入E .coliDH5α中 ,IPTG诱导表达重组的GST融合蛋白 .对重组融合蛋白过谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化 .结果 :获得成年SD大鼠Nogo(5 70～ 6 91和 10 2 8～ 10 89氨基酸残基 )的基因 ,测序结果与已发表的基因序列相一致 .重组GST融合蛋白经SDS PAGE分析 ,在相对分子质量 (Mr) 390 0 0和 32 0 0 0处 ,有特异的蛋白条带 .重组蛋白经谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化后 ,得到了高纯度的融合蛋白 .结论 :成功克隆成年大鼠No go基因片段 ,并在E .coliDH5α中高效表达 。
- 张萍程希平费玲玲王春婷杨浩陈镔复鞠躬
- 关键词：NOGO基因克隆纯化
- 抗大鼠Nogo分子单克隆抗体的制备与初步鉴定被引量：7
- 2003年
- 目的:制备抗大鼠Nogo分子单克隆抗体(mAb),为研究Nogo分子的组织分布和功能提供实验手段。方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术制备小鼠源性抗大鼠Nogo mAb。用免疫荧光组织化学技术,对Nogo分子在大鼠中枢神经系统(CNS)的分布进行鉴定。结果:获得3株分泌抗Nogo mAb的杂交瘤细胞株。间接ELISA测定腹水效价达10-6,两株mAb为IgGl(K)亚类,另一株为IgG2b(K),在免疫荧光组织化学技术应用中获得较满意效果。结论:获得3株能特异性识别天然Nogo分子的mAb,为进一步研究Nogo分子的结构和功能奠定了基础。
- 宋朝君程希平刘雪松朱勇张萍许晓光刘莹金伯泉
- 关键词：NOGO单克隆抗体
