国家自然科学基金(81200250)
- 作品数：9 被引量：16H指数：3
- 相关作者：闫长栋刘磊乔伟丽石玥崔洁更多>>
- 相关机构：徐州医科大学徐州医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 外源性硫化氢减轻D-半乳糖诱导的亚急性衰老大鼠血管老化被引量：8
- 2014年
- 本文旨在观察亚急性衰老大鼠血管壁结构和功能的改变,探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对血管老化的影响。雄性SD大鼠40只,随机分为溶剂组、D-半乳糖组、NaHS(H2S的供体)低、中、高剂量组,每组8只。D-半乳糖组每日背部皮下注射125 mg/kg D-半乳糖,连续8周;溶剂组每日背部皮下注射等体积生理盐水;NaHS低、中、高剂量组每日背部皮下注射125 mg/kg D-半乳糖,同时分别按1、10、100μmol/kg腹腔注射NaHS,连续8周。HE和Masson染色法观察各组大鼠主动脉形态学改变;硫代巴比妥酸(TBA)法和黄嘌呤氧化酶法检测大鼠主动脉超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量以及抗超氧阴离子含量;生化方法测定大鼠血清H2S浓度的变化;酶联免疫法(ELISA)检测血浆血管紧张素II(AngII)浓度变化;免疫印迹法测定大鼠主动脉血管紧张素II型1类受体(AT1R)蛋白的表达。结果显示,与溶剂组相比,D-半乳糖组大鼠血清H2S的浓度降低(P<0.05);而给予NaHS处理后,NaHS各剂量组大鼠血清H2S的浓度较D-半乳糖组明显升高(P<0.05)。血清H2S浓度的增高能够改善D-半乳糖引起的亚急性衰老大鼠主动脉形态学的变化。HE染色结果中,溶剂组主动脉内膜较薄,结构完整,中膜平滑肌排列规则;D-半乳糖组主动脉内膜增厚、隆起,内皮细胞部分脱落,中膜明显增厚,平滑肌增生、紊乱;与D-半乳糖组相比,NaHS各剂量组内皮细胞脱落减少,平滑肌细胞增生减少。Masson染色结果表明:与溶剂组相比,D-半乳糖组胶原纤维增多,平滑肌细胞增生(P<0.05);与D-半乳糖组相比,NaHS各剂量组胶原纤维减少,平滑肌细胞增生减少(P<0.05)。ELISA检测结果显示:与溶剂组相比,D-半乳糖组大鼠血浆AngII浓度明显升高(P<0.05);而给予NaHS处理后,NaHS各剂量组大鼠血浆AngII浓度较D-半乳糖组明显降低(P<0.05)。与溶剂组相比,D-半乳糖组大鼠主动脉SOD活性下降、MDA含量升高、抗超氧阴�
- 乔伟丽杨文学刘磊石玥崔洁柳红闫长栋
- 关键词：D-半乳糖主动脉
- 外源性H2S增加Keap1硫巯基化水平延缓大鼠主动脉内皮细胞衰老的机制
- 2018年
- 目的研究硫化氢（hydrogensulfide，H2S）延缓大鼠主动脉内皮细胞（RAECs）衰老的机制。方法细胞按不同处理方法分为6组：年轻组、老年组、DMSO组、NaHS组、ATRA组、NaHS＋ATRA组。用β-半乳糖苷酶（β-ga1）染色法检测内皮细胞的老化程度，用改良生物素法测定内皮细胞Keap1巯基蛋白，用免疫印迹法测定内皮细胞核转录因子（Nrf2）和超氧化物歧化酶2（SOD2）。结果与年轻组相比，老年组细胞β—ga1染色阳性数升高（P〈0．01）。给予外源性H2S（NariS）处理后，老年组细胞染色阳性数降低（P〈0．01）。预先给予Nrf2阻断剂全反式维甲酸（ATRA）后，老年组细胞染色阳性数升高（P〈0．01）。与老年组相比，NariS处理组内皮细胞Keap1硫巯基化水平、Nrf2和SOD2蛋白表达均升高（P〈0．01）；预先给予ATRA阻断Nrf2蛋白表达后，内皮细胞Nrf2及SOD2蛋白表达均明显降低（P〈0．01）。结论外源性H2S能通过提高内皮细胞Keap1的硫巯基化水平，减弱Keap1对Nrf2的抑制作用，促进Nrf2进入细胞核，从而增加其下游SOD2蛋白的表达，提高内皮细胞的抗氧化应激作用，延缓内皮细胞的衰老进程。
- 丁宁顶乔伟丽刘磊崔洁闫长栋
- 关键词：衰老大鼠主动脉内皮细胞
- 外源性H2S改善老年大鼠血管功能
- 2016年
- 目的探讨H：S对老年血管功能的影响。方法雄性sD大鼠30只，随机分为年轻组，老年大鼠对照组，老年大鼠NariS（H2S的供体）低（1μmol·kg^-1·d^-1）、中（5μmol·kg^-1·d^-1）、高（10μmol·kg^-1·d^-1）剂量组，每组6只。颈总动脉插管观察NariS对老年大鼠心率及动脉血压的影响，离体血管环灌流方法评估大鼠血管收缩及舒张功能，Masson染色方法观察血管形态学改变。结果与年轻组相比，老年大鼠动脉血压降低（P〈0．05），心率明显减慢，血管收缩舒张功能受损（P〈0．05），给予低、中、高剂量的NariS后，动脉血压均没有明显改善，但老年大鼠的心率明显增加（P〈0．05）；NariS中剂量组能明显改善老年大鼠血管收缩舒张功能（P〈0．05）。与年轻组相比，老年大鼠血管胶原纤维增多，给予低、中、高剂量的NaHS后，血管周围胶原沉积有不同程度减少，NaHS中、高剂量组更为明显。结论适量的外源性H：S能够改善老年大鼠血管的功能。。
- 彭娇娇陈冰刘磊闫长栋乔伟丽
- 关键词：H2S血管舒张
- 脊髓NF-κB／IL-6信号通路在小鼠烫伤痛中的作用
- 2016年
- 目的研究脊髓NF-κB／IL-6信号通路在小鼠烫伤痛中的作用。方法造模分组：将24只小鼠随机分为正常组（N组）、假手术组（S组）和烫伤疼组（BI组），每组8只。检测造模当天和造模后3、7和14天各组小鼠热缩足潜伏期（TwL）及脊髓中核因子KB（NF-κB）和白细胞介素-6（IL-6）mRNA的含量。治疗分组：将40只小鼠随机分为假手术组（s组）、假手术＋生理盐水组（s＋NS组）、烫伤痛组（BI组）、烫伤痛＋生理盐水组（BI＋NS组）和烫伤痛＋NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）组（BI＋PDTC组），每组8只。测定各组小鼠治疗前及治疗第3、4、5、6天的TwL，并在治疗后第6天检测各组小鼠脊髓NF-κB和IL-6mRNA的含量。结果与造模当天相比，造模后3、7和14天BI组小鼠TwL明显降低，脊髓NF-κB和IL-6mRNA的含量明显增加，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。与BI＋NS组相比，治疗第3、4、5和6天BI-4-PDTC组小鼠的TwL明显增加，治疗第6天脊髓中NF-κB和IL-6mRNA含量明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论阻断脊髓NF-κB／IL-6信号通路可以减轻小鼠烫伤痛敏。
- 钱海涛马叶枝刘磊闫长栋
- 关键词：核因子-ΚB白细胞介素-6烫伤
- 外源性硫化氢减轻D－半乳糖诱导的亚急性衰老大鼠心肌纤维化
- 2016年
- 目的：观察硫化氢（ H2 S）处理对亚急性衰老大鼠心肌纤维化的影响。方法健康雄性SD大鼠随机分为3组，每组6只。对照组每日背部皮下和腹腔注射等体积生理盐水；D－半乳糖组每日背部皮下注射D－半乳糖（125 mg· kg^-1· d^-1），同时腹腔注射等体积生理盐水；硫氢化钠（NaHS，H2S供体）组每日背部皮下注射D－半乳糖（125 mg·kg^-1· d^-1），同时腹腔注射NaHS（10μmol· kg^-1· d^-1）。每组处理时间均为8周。苏木精－伊红染色和Masson染色观察大鼠心肌细胞和心肌胶原纤维等形态学变化；免疫印迹法测定大鼠心肌基质金属蛋白酶2（MMP－2）及基质金属蛋白酶抑制剂－1（TIMP－1）蛋白的表达。结果与对照组相比，D－半乳糖组大鼠心重指数增高（P＜0．01），心肌胶原纤维容积率增加（P＜0．05），心肌组织MMP－2表达减少（P＜0．01），TIMP－1表达增加（P＜0．01）。与D－半乳糖组相比，NaHS组大鼠心重指数降低（P＜0．05），心肌胶原纤维容积率减少（P＜0．05），心肌MMP－2表达增加（P＜0．05），TIMP－1表达减少（P＜0．01）。结论外源性H2S处理可以促进心肌胶原纤维降解，抑制胶原纤维聚集，从而减少D－半乳糖诱导的亚急性衰老大鼠心肌纤维化，其机制可能是通过减少TIMP－1蛋白的表达，增加MMP－2的活性，调节MMP－2／TIMP－1的平衡实现。
- 黄继良刘磊乔伟丽夏勇闫长栋
- 关键词：衰老心肌纤维化基质金属蛋白酶-2基质金属蛋白酶抑制剂-1
- Ki67和p53蛋白表达在外源性硫化氢抗内皮细胞老化过程中的作用
- 2016年
- 目的探索外源性硫化氢（H2S）抗内皮细胞老化过程中对Ki67和p53表达量的影响。方法将大鼠主动脉内皮细胞（RAECs）随机分为3组，即年轻组（原代RAECs传至第4代）、老年组（原代RAECs传至第12代）、硫氢化钠（NaHS，细胞内H2S的供体，即外源性H2S）组（RAECs从第4代开始给予NaHS10μmol／L处理至第12代）。用β-半乳糖苷酶（SAβ-gal）染色法鉴定细胞老化程度，DAPI荧光染色检测老化相关的异染色质位点（SAHF）的表达变化，Western blot方法检测Ki67及p53蛋白的表达量。结果给予NaHS处理后，细胞老化程度及SAHF的表达明显低于老年组（P〈0．01）；Ki67及p53蛋白在老年组RAECs中表达量明显低于年轻组（P〈0．01），而NariS处理后Ki67及p53表达量较老年组明显增加（P〈0．05）。结论外源性H2S（即NaHS）延缓内皮细胞老化过程中Ki67及p53基因的表达显著增加，提示外源性H2S延缓血管内皮细胞老化可能与提高Ki67、p53表达有关。
- 李洪民李岩刘磊崔洁闫长栋
- 关键词：硫氢化钠KI67主动脉内皮细胞
- 外源性硫化氢通过Keapl—Nrf2信号通路减轻胃缺血再灌注引起的黏膜损伤被引量：3
- 2015年
- 目的观察外源性硫化氢（hydrogensulfide，H：S）供体NariS预处理对大鼠胃缺血再灌注（gastricische—mia—reperfusion，GI—R）损伤的影响及其可能的作用机制。方法雄性Sprague—Dawley（SD）大鼠，实验分3组：假手术（Sham）组、GI—R组和NaHS组。采用夹闭腹腔动脉30min再灌注1h方法建立GI—R损伤模型。GI～R后处死各组大鼠，采用AdobePhotoshop软件分析计算GI～R引起的胃黏膜损伤面积，苏木精一伊红染色后光镜下观察GI—R引起的胃黏膜损伤深度，化学比色法检测大鼠胃黏膜中过氧化氢（H2O2）和谷胱甘肽（GSH）含量，免疫印迹法测定大鼠胃黏膜组织中Keapl、Nrt2、超氧化物歧化酶（SOD2）和黄嘌呤氧化酶（XOD）的表达，免疫组化法检测大鼠胃黏膜Keapl和Nrf2表达。结果GI—R组胃黏膜损伤明显、损伤深度较深，NaHS组胃黏膜损伤面积和深度较GI—R组明显缩小和减少。与GI—R组相比，NaHS预处理后能增加胃黏膜组织中GSH、Nrf2、SOD2水平（P〈0．05），降低H2O2、Keapl、XOD水平（P〈0．05）。结论外源性Hs预处理可以通过Keapl—Nrf2信号通路减轻大鼠胃缺血再灌注引起的黏膜损伤。
- 吴迪刘磊王光明石玥闫长栋
- 关键词：硫化氢KEAP1NRF2
- 丹参素通过SIRT1-SOD信号通路延缓大鼠主动脉内皮细胞老化被引量：2
- 2014年
- 本研究旨在观察丹参素(Danshensu,DSS)预处理对大鼠主动脉内皮细胞(rat aortic endothelial cells,RAECs)老化的影响及机制。原代RAECs株传代培养到第四代为年轻组细胞(Young group),传代至第十二代为老年组细胞(Old group);自第四代起,给予DSS孵育到第十二代,即为DSS组细胞;自第四代起,联合给予DSS和细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)抑制剂尼克酰胺(NAM)孵育到第十二代,即为DSS+N组细胞。用细胞衰老β-半乳糖苷酶(SAβ-gal)染色法鉴定细胞老化程度,DAPI荧光染色检测老化相关的异染色质位点(senescence associated heterochromatin foci,SAHF)的表达变化,硫代巴比妥酸(TBA)法和化学比色法检测RAECs中丙二醛(MDA)和过氧化氢(H2O2)含量,免疫印迹法测定细胞SIRT1、黄嘌呤氧化酶(XOD)和超氧化物歧化酶2(SOD2)的表达。结果显示,与年轻组相比,老年组细胞发生明显衰老,细胞SAβ-gal阳性率、SAHF形成率、MDA及H2O2含量显著增加(均P<0.01);DSS处理能明显减少老年组细胞SAβ-gal阳性率、SAHF形成率、MDA及H2O2含量(P<0.05或P<0.01),SIRT1阻断剂可以逆转DSS对细胞的保护作用;免疫印迹结果显示,与年轻组相比,老年组细胞XOD蛋白表达增加,SIRT1和SOD2蛋白表达减少(P<0.05或P<0.01),DSS可以使老年组细胞XOD蛋白表达减少,SIRT1和SOD2蛋白表达增加(P<0.05);而给予SIRT1阻断剂逆转DSS的作用。以上结果提示,DSS预处理能减轻RAECs的氧化应激水平,延缓细胞的衰老进程,其机制可能与SIRT1蛋白表达的上调有关。
- 王硕吴迪刘磊崔洁乔伟丽孙红闫长栋
- 关键词：丹参素大鼠主动脉内皮细胞氧化应激
- 硫化氢通过CaMKKβ-AMPK信号通路延缓大鼠主动脉内皮细胞老化被引量：3
- 2016年
- 该研究探讨了硫化氢(H2S)延缓大鼠主动脉内皮细胞(rat aortic endothelial cells,RAECs)老化的机制。原代RAECs传代培养至第4代为年轻组,传代至第12代为老年组。从第4代起,给予H2S的供体Na HS培养至第12代为Na HS组;从第4代起培养至第12代,在提取处理细胞前6 h加入Ca MKKβ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase kinaseβ)特异性抑制剂STO-609共培养,即STO-609组;从第4代起,给予H2S的供体Na HS培养至第12代,在提取处理细胞前6 h加入STO-609共培养,即Na HS+STO-609组。采用SA-β-gal(senescence-associatedβ-galactosidase)染色法和DAPI荧光染色法检测细胞的老化程度和老化相关异染色质(senescence-associated heterochromatin foci,SAHF)的表达变化。通过化学比色法检测RAECs的NO(nitric oxide)含量。应用Western blot方法检测细胞Ca MKKβ、AMPK(AMP-activated protein kinase)和p-AMPK蛋白的表达。结果显示,与年轻组相比,老年组细胞老化程度明显增加,细胞中SA-β-gal阳性率和SAHF形成率显著增加(P<0.01),NO含量明显下降(P<0.01)。与老年组相比,Na HS处理组的SA-β-gal阳性率和SAHF形成率明显下降,同时NO含量上升(P<0.01)。与年轻组相比,老年组Ca MKKβ、AMPK和p-AMPK蛋白质水平明显降低(P<0.01),而给予Na HS处理后,Ca MKKβ、AMPK和p-AMPK增加(P<0.05)。给予STO-609阻断Ca MKKβ信号通路,能够降低或消除Na HS的细胞保护作用(P<0.01)。结果表明,外源性H2S通过影响Ca MKKβ-AMPK信号通路减轻RAECs的衰老过程,延缓了细胞老化的进程。
- 李岩李洪民刘磊乔伟丽崔洁张琳闫长栋
- 关键词：硫化氢大鼠主动脉内皮细胞AMPK
