国家自然科学基金(C30371288)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：高学松纪冬赵龙凤刘妍郭江更多>>
- 相关机构：山西医科大学北京地坛医院解放军第302医院更多>>
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- 抑制性消减杂交技术克隆乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活蛋白2的反式激活基因
- 2008年
- HBV为带包膜的嗜肝DNA病毒属，其基因组由松弛环状、部分双链DNA（rcDNA）组成。负链较长，约为3200个核苷酸（nt），其5’端共价结合病毒多聚酶；正链较短，长度可变，为1700～2800nt，在其5’端有寡聚核糖核苷酸帽。HBV基因组具有4个开放读码框（ORF），通过不同的起始密码子（ATG）编码至少7个蛋白，包括3个表面抗原：
- 郭江成军张黎颖纪冬赵龙凤刘妍高学松
- 关键词：乙型肝炎病毒抑制性消减杂交技术反式激活基因嗜肝DNA病毒克隆
- 抑制性消减杂交技术克隆和筛选丙型肝炎病毒F蛋白的反式调节基因被引量：2
- 2005年
- 目的构建丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白反式激活相关基因差异表达的差异cDNA,克隆HCV F蛋白反式激活相关基因。方法以HCV F表达质粒pcDNA3.1(-)-F转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1 (-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并合成cDNA,经RsaI酶切后将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆聚合酶链反应后进行测序及同源性分析。结果成功构建人HCV F蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA。扩增后得到56个200-1000 bp插入片段的克隆,随机挑选其中28个插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得19种编码基因,其中2个为未知功能的新基因。结论筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、物质代谢和细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因。
- 郭江成军纪冬赵龙凤高学松刘妍吴顺华
- 关键词：F蛋白抑制性消减杂交技术丙型肝炎病毒反式调节基因PCDNA3
- 丙型肝炎病毒F反式调节靶基因反式激活基因的筛选和生物信息学分析被引量：1
- 2006年
- 目的构建丙型肝炎病毒(HCV)F反式调节靶基因FTP2的反式激活基因的cDNA文库,克隆FTP2反式激活基因。方法以HCV FTP2表达质粒pcDNA3．1(-)-HCV FTP2转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3．1(-)为对照；制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并合成cDNA,经Rsa I酶切后将实验组cDNA分成两组．分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠埃希菌进行文库扩增,随机挑选克降PCR后进行测序及同源源性分析。结果成功构建人HCV FTP2反式激活相关基因差异表达的cDNA。扩增后得到56个200～1000 bp插入片段的克隆,随机挑选其中24个插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得20种编码基因,其中1个为未知功能的新基因。结论筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、物质代谢和细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因。
- 郭江成军赵龙凤纪冬高学松刘妍张黎颖戴久增
- 关键词：肝炎病毒F蛋白
