天津市自然科学基金(12JCYBJC19900)
- 作品数：9 被引量：19H指数：3
- 相关作者：黄永春张伟赵鹏陈志永刘红梅更多>>
- 相关机构：中华人民共和国农业部环境保护科研监测所上饶师范学院江西省科学院更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学环境科学与工程医药卫生生物学更多>>
- 核糖体工程技术选育卡伍尔链霉菌高产菌株被引量：3
- 2017年
- 通过赋予前期分离获得的一株卡伍尔链霉菌菌株TJ430利福平抗性,达到迅速提高菌株产抗生素能力的目的;采用核糖体工程技术使菌株TJ430的ropB基因发生突变从而获得利福平抗性,通过构建好的高通量筛选模型结合高效液相色谱技术,筛选正向和负向突变菌株,利用液体发酵复筛进一步确认初筛结果,通过对突变株进行基因测序寻找突变株ropB基因的突变位点;构建的高通量筛选模型能准确、快速筛选出突变菌株,分离到5株正向突变株和2株负向突变株。在负向突变株ropB基因的第280 bp处发现一个点突变,但是在正向突变株测序片段中未发现突变位点。采用的引物序列只能对ropB基因的部分序列进行测序,从正向突变菌株抗生素产量较原始菌株提高2.5倍以上,且菌丝形态发生显著变化来推测,正向突变菌株的突变位点应位于ropB基因中未测序片段。在完成原始菌株全基因组测序基础上,可重新设计引物对该菌株的全ropB基因进行测序,寻找突变位点。
- 李文华黄永春杨少彬陈璐
- 关键词：高通量筛选
- 链霉菌TJ430的鉴定及产物结构被引量：4
- 2014年
- 【目的】通过对分离获得的土壤耐热放线菌株进行鉴定,并对该菌株产生的抗菌活性产物进行分离纯化和结构解析,达到判定该菌株归属及其产物新颖性目的。【方法】采用干热法对土壤样品进行前处理;采用经改良的HV培养基分离土壤耐热放线菌;通过琼脂块快速初筛法对分离获得的耐热放线菌进行生物活性快速评价;分别采用形态学观察法、细胞化学组分分析法、生理生化及酶学特征分析、16S rDNA序列分析、DNA杂交法,对分离获得的编号为TJ430的菌株进行菌株鉴定;采用柱层析法和制备色谱法,对发酵获得的有效成分粗提物进行分离纯化;采用红外光谱法、高分辨质谱法对分离获得的生物活性成分代谢产物进行结构探索。【结果】共分离获得570株耐热放线菌;抗菌活性快速初筛表明,编号为TJ430的菌株表现出优良的抗卵菌及广谱抗真菌活性;采用多种方法对菌株TJ430进行鉴定,结果表明该菌株为一株卡吾尔链霉菌;最终分离获得了纯度高达98%以上的有效成分纯品化合物;该有效成分的分子式为C40H66N3O11,分子量为765;分子中应含有亚胺基、甲基、亚甲基、羰基、共价双键、异丙基等化学基团。【结论】目前对该抗菌活性成分的详细化学结构研究尚有待深入,但该抗菌活性成分极有可能是一种新型化合物,具有较好的开发应用前景。
- 杨少彬黄永春王常荣赵鹏张伟
- 关键词：菌株鉴定农用抗生素分离纯化
- 一种农用抗生素发酵培养基优化及其分离纯化工艺研究被引量：2
- 2013年
- 目的优化分离获得的一株土壤稀有放线菌发酵培养基,获得该有效成分的大孔树脂分离条件。方法分别利用单因素试验和均匀试验设计法,对发酵培养基构成成分和最佳用量进行优化;分别利用抑菌圈法和液相色谱法对发酵液中有效成分含量进行测定,考察大孔树脂的吸附及解吸附参数。结果经优化后的最佳培养基配方为葡萄糖1.8%、蛋白胨0.5%、豆粕0.3%、酵母膏1.0%、CaCO30.25%,此时发酵液中有效成分活性最强;D-101型大孔吸附树脂对发酵液中有效成分的吸附能力最强,最佳吸附时间为120min,采用70%的丙酮水溶液即可对有效成分形成有效解吸附,最佳解吸附时间为120min。结论通过一次吸附与解吸附分离使发酵液中有效成分得到了有效分离。
- 黄永春刘红梅陈志永赵鹏张伟
- 关键词：大孔树脂农用抗生素
- 外源钙对两种价态锑胁迫下水稻幼苗吸收积累锑和钙的影响被引量：5
- 2015年
- 通过溶液培养试验,研究外源钙对两种价态锑[Sb(III)和Sb(Ⅴ)]胁迫下水稻吸收积累锑和钙的影响。结果表明,这两种价态的Sb对水稻生长均有抑制作用,Sb(III)比Sb(Ⅴ)对水稻毒害更明显,施Ca可缓解Sb对水稻的毒害。Sb(III)和Sb(Ⅴ)的添加对水稻根系和茎叶吸收积累Ca影响不一致。当溶液中的Ca浓度为5.0 mmol·L-1时,添加三价Sb 10和30μmol·L-1均可以显著地降低水稻茎叶中的Ca含量15.7%和49.4%,但是添加Sb(Ⅴ)浓度为30μmol·L-1时,却分别提高水稻茎叶和根系Ca含量26.2%和50.4%。Ca的添加可以显著地降低水稻根系和茎叶对两个价态Sb的吸收积累。在30μmol·L-1Sb(III)处理下,添加5.0和20 mmol·L-1的Ca可导致水稻根系和水稻茎叶Sb浓度分别比对照处理降低19.0%-79.4%和42.6%-71.8%;在30μmol·L-1Sb(Ⅴ)处理下,添加5.0和20 mmol·L-1的Ca可导致水稻根系和水稻茎叶Sb浓度分别比对照处理降低34.3%-70.6%和74.1%-84.6%。Ca的添加对Sb在水稻根系和茎叶中的富集系数和分配比率也有显著影响。综上所述,可以通过施用Ca肥来防治农田Sb污染,降低Sb对人体健康的危害。
- 向猛黄益宗蔡立群保琼莉黄永春王小玲高柱余发新乔敏胡莹金姝兰李季王斐
- 关键词：钙锑毒害
- 水稻吸收积累硅和锑的相互影响水培试验研究被引量：3
- 2014年
- 通过溶液培养试验,研究两种价态锑Sb（Ⅲ）和Sb（Ⅴ）与Si交互作用对水稻吸收积累Sb和Si的影响。结果表明,这两种价态的Sb对水稻生长均有抑制作用,Sb（Ⅲ）比Sb（Ⅴ）对水稻毒害更明显,施Si可缓解Sb对水稻的毒害。Sb（Ⅲ）和Sb（Ⅴ）的添加可显著地影响水稻根系和茎叶对Si的吸收积累。当Si的浓度为1.0mmol·L＾-1时,添加30μmol·L＾-1Sb（Ⅲ）和Sb（Ⅴ）可使水稻根系Si含量分别比对照处理降低46.0%和36.0%,水稻茎叶Si含量分别降低52.2%和23.5%。同样,Si的添加也可以显著地降低水稻根系和茎叶对两个价态Sb的吸收积累。在10μmol·L＾-1Sb（Ⅲ）处理下,添加1.0和2.0 mmol·L＾-1的Si可使水稻根系和茎叶Sb浓度分别比对照降低52.0%～88.4%和24.6%～45.4%;在10μmol·L-1Sb（Ⅴ）处理下,添加1.0 mmol·L＾-1和2.0 mmol·L＾-1的Si可使水稻根系和茎叶Sb浓度分别比对照降低53.8%～75.5%和34.8%～49.6%。Si的添加对Sb在水稻根系和茎叶中的富集系数和分配比率也有显著影响。研究结果表明,在Sb污染农田中可通过施用Si肥来提高植物的Si营养,降低植物对Sb的吸收积累,从而降低Sb的危害。
- 向猛黄益宗蔡立群保琼莉黄永春王小玲乔敏胡莹金姝兰李季王斐
- 关键词：硅锑水稻毒害
- 一种新型高效农用抗生素（保田霉素）的研究
- 2013年
- 1研究背景
马铃薯和番茄的晚疫病是一种遍及全球的毁灭性病害，每年仅给马铃薯生产造成的损失可高达100亿美元，我国每年损失在10亿美元以上。该病菌在自然界中的超强适应性，不仅给抗病品种带来巨大威胁，而且致使多种特效药物如甲霜灵、乙磷铝等的药效迅速降低。探寻新型抗菌药物对挽回农业经济损失具有重要意义。从微生物代谢产物中寻找新型农药是一种简便、高效的方法。然而在过去的二十年中，从常规土壤放线菌中发现新型先导化合物的速率已明显降低，不断重复发现已知化合物的现象严重困扰着世界各国的科研工作者。
- 关键词：农用抗生素马铃薯生产先导化合物抗菌药物毁灭性病害土壤放线菌
- 卡伍尔链霉菌TJ430的分离鉴定及抗菌活性研究
- 2015年
- 目的从土壤中分离、筛选稀有放线菌,对其产生的抗生素进行评价,以期发现新型农用抗生素。方法采用高温烘烤法对土壤中稀有放线菌进行富集,采用改良的HV培养基进行分离。对分离获得的编号为TJ430的菌株采用形态学观察法、细胞化学组分分析法、生理生化及酶学特性分析、16S rDNA序列分析和DNA杂交法进行鉴定。菌株TJ430产生的抗生素水溶液在温室内进行生物防效试验。结果共计分离获得570株稀有放线菌,其中TJ430表现出优良的广谱抗真菌活性。鉴定表明TJ430是一株卡伍尔链霉菌。生物防效试验结果表明,TJ430产生的抗生素水溶液对番茄晚疫病、番茄细菌性斑点病、黄瓜菌核病及黄瓜炭疽病的防效分别为100%、79.36%,98.11%和75.79%。结论菌株TJ430产生的抗生素具有宽泛的抗菌谱和良好的抗菌活性,具备较好的开发应用前景。
- 杨少彬黄永春陈志永梁军锋
- 关键词：菌株鉴定农用抗生素生物防治效果
- 采用大孔吸附树脂D-101初步分离提取TJ430菌株发酵液中的抗生素被引量：5
- 2013年
- 借助生物活性测定法和高效液相色谱法对发酵液中农用抗生素进行追踪监测,探讨了大孔吸附树脂对菌株TJ430发酵液中农用抗生素的分离纯化条件。经过对比试验发现D-101型大孔吸附树脂的吸附性能最好;最佳吸附时间为120 min;70%丙酮水溶液的解吸附能力最佳;最佳解吸附pH为接近中性条件;最佳解吸附时间为120min。采用D-101型大孔吸附树脂对TJ430菌株发酵液中抗生素进行吸附,在中性条件下经70%丙酮水解吸附,使发酵液中抗生素得到了有效的分离纯化。
- 黄永春刘红梅赵鹏张伟陈志永
- 关键词：大孔吸附树脂农用抗生素
- 一种农用抗生素的浸提及硅胶柱层析纯化研究被引量：1
- 2014年
- 为了实现对一种农用抗生素的提取及柱层析分离,采用易于蒸发浓缩的丙酮替代常用的甲醇作提取剂,加速了有效成分的分离纯化进程,并有助于保持有效成分的生物活性;采用3因素、3水平正交试验设计法,探寻了该农用抗生素粗提物的浸提条件;借助极差分析法和方差分析法,最终确定最佳浸提条件为:100%丙酮、3倍物料体积的浸提液、浸提时间为2 h。采用硅胶柱层析法对浸提出的有效成分进行了分离纯化,以乙酸乙酯作为洗脱液,通过1次过柱分离除去了大量杂质,有效成分的回收率可达到83%以上,为有效成分的进一步分离纯化奠定了基础。
- 黄永春刘红梅陈志永赵鹏张伟
- 关键词：农用抗生素正交试验浸提柱层析
