广东省科技计划工业攻关项目(2008B030301115)
- 作品数：4 被引量：15H指数：3
- 相关作者：钟英强朱兆华刘娟黄花荣傅玉如更多>>
- 相关机构：中山大学附属第二医院中山大学孙逸仙纪念医院绵阳市第三人民医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- siRNA靶向沉默hTERT基因对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、凋亡和周期的影响被引量：2
- 2008年
- 目的研究hTERT-siRNA对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响。方法利用RNAi技术靶向沉默Capan-2的hTERT基因表达,应用细胞直接计数法和流式细胞术(FCM)检测Capan-2细胞的增殖、凋亡和细胞周期的变化。结果在hTERT-siRNA的使用浓度为50nm、Lipo转染浓度为3μl/2ml转染体积和hTERT沉默效率为100%的条件下,转染hTERT-siRNA24h后,细胞生长已明显减慢,抑制细胞增殖率为26.39%(P<0.05),第2、3、5、7天抑制细胞增殖率分别为46.77%、70.61%、84.71%和85.99%(P<0.001)。随着转染细胞按常规培养时间的延长,早期凋亡细胞明显增多(P<0.001),以24h后更明显;活性细胞明显减少(P<0.001),而损伤细胞明显增多(P<0.001),以6h后明显;死亡细胞明显增多(P<0.001),以24h后更明显。siRNA组与阴性对照组和Lipo对照组均有明显差异(P<0.001)。G0～G1期细胞明显增多(P<0.01),S期细胞明显减少(P<0.01),以24h后明显;G2～M期细胞明显减少(P<0.01),以48h后明显;晚期凋亡细胞增多(P<0.05),以48h后明显。结论hTERT-siRNA可抑制人胰腺癌Capan-2细胞生长,使较多的细胞停留在G0～G1期,而进入G～M期和S期的细胞减少,可促进细胞凋亡。
- 钟英强魏菁罗招凡傅玉如邵静刘娟朱兆华
- 关键词：胰腺肿瘤细胞周期
- siRNA沉默COX-2基因对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、细胞周期、凋亡和成瘤能力的影响被引量：3
- 2011年
- 目的:研究siRNA沉默环氧合酶-2(COX-2)基因对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、细胞周期、凋亡和成瘤能力的影响。方法:以Lipofectamine 2000(Lipo)为载体转染siRNA-COX-2至Capan-2细胞。应用RT-PCR、realtime PCR检测COX-2-mRNA表达,Western blotting检测COX-2蛋白的表达。应用细胞直接计数法检测细胞的增殖,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡与周期。应用裸鼠模型评估COX-2-siRNA转染的Capan-2细胞成瘤能力的影响。结果:在siRNA-COX-2浓度为50 nmol/L、Lipo为5μL∶2 mL转染容积条件下,在Capan-2细胞的转染效率可达96.47%。siRNA-COX-2沉默Capan-2细胞中COX-2基因表达的最佳序列为siR-NA006,转染24 h以后沉默效率达73%,COX-2蛋白表达水平在转染后48 h和72 h分别被下调了67%和61%。转染48 h后,Capan-2细胞生长明显减慢(P<0.05),48 h和72 h抑制细胞增殖率分别为35.48%和56.32%。细胞凋亡率较对照组高(P<0.05),48 h和72 h细胞凋亡率为2.03%和3.27%。转染24 h、48 h和72 h G0/G1期的比例分别是58.03%、63.31%和65.66%,S期的比例分别是30.27%、24.87%和22.2%。siRNA-COX-2转染Capan-2细胞在裸鼠的皮下形成的肿瘤体积和重量明显减少(P<0.05)。结论:siRNA006-COX-2可有效沉默COX-2基因的表达,可明显抑制Capan-2细胞的生长并降低其成瘤能力。
- 钟英强黄花荣刘娟林莹夏忠胜昝慧
- 关键词：环氧合酶-2细胞增殖细胞周期
- 阳离子脂质体Lipofectamine2000对人胰腺癌Capan-2细胞的毒性作用被引量：5
- 2008年
- 目的探讨阳离子脂质体Lipofectamine2000(Lipo)在一定浓度下对细胞毒性的作用机制。方法应用一定毒性浓度的Lipo作用于胰腺癌Capan-2细胞,利用细胞直接记数法和流式细胞术检测其对Capan-2细胞生长、细胞凋亡和周期的影响。结果Lipo与siRNA的浓度均影响转染率的高低。在2ml转染体积中,Lipo在5μl的浓度下,使Capan-2细胞生长明显减慢,以第3天后更加明显(P<0.001)。随着转染细胞按常规培养的时间延长,早期凋亡细胞明显增多(P<0.05),活性细胞明显减少(P<0.01),而损伤细胞和死亡细胞明显增多(P<0.001),以48h后更明显;G0～G1期细胞明显增多(P<0.05),G2-M期细胞明显减少(P<0.01),S期细胞明显减少(P<0.01),晚期凋亡细胞减少(P<0.05)。结论在一定浓度下,Lipo可影响细胞的生长、早期凋亡和细胞周期分布,因此,利用Lipo在不同的细胞系进行基因转染过程中Lipo应进行浓度梯度筛选。
- 钟英强魏菁傅玉如邵静梁倚文林燕华刘娟朱兆华
- 关键词：脂质体LIPOFECTAMINE胰腺肿瘤细胞生长流式细胞术
- siRNA靶向沉默hTERT基因对人胰腺癌的凋亡抑制基因bcl-2和环氧合酶-2基因表达的影响被引量：6
- 2010年
- 目的应用siRNA靶向沉默人胰腺癌Capan-2细胞的hTERT基因表达,观察其对凋亡抑制基因(bcl-2)和环氧合酶-2(COX-2)基因表达的影响。方法应用脂质体Lipofectamine2000作为基因转染的载体,实时PCR进行扩增检测转染细胞的hTERT、bcl-2、COX-2基因的mRNA表达水平,应用Western blotting检测hTERT、bcl-2、COX-2蛋白表达水平。结果在hTERT-siRNA完全沉默hTERT表达的基础上,bcl-2、COX-2基因mRNA表达的量在hTERT-siRNA转染后48h均明显受到抑制(P<0.001),抑制率分别为87.86%、100.00%,但在72h后均恢复至与对照组相似的水平,而阴性对照组、Lipo对照组与空白对照组的各基因表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。bcl-2、COX-2蛋白水平在转染48h和72h后被分别下调了58.54%和63.44%、50.06%和82.77%(P<0.01),Lipo对照组和阴性对照组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 siRNA靶向沉默hTERT基因表达,可在一定程度上抑制人胰腺癌Capan-2细胞的bcl-2、COX-2基因的表达。
- 钟英强黄花荣付玉如朱兆华
- 关键词：基因BCL-2环氧化酶2末端转移酶
