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国家自然科学基金(81260261): 作品数：15 被引量：40H指数：5; 相关作者：张万江章乐吴芳吴江东张玉清更多>>; 相关机构：石河子大学石河子市人民医院石河子大学医学院第一附属医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金新疆生产建设兵团医药专项基金高层次人才科研启动基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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检测不同毒力结核分枝杆菌感染对巨噬细胞凋亡的影响及其Caspase-3和Bcl-2的表达被引量：5: 2013年; 该文为探讨不同毒力的结核分枝杆菌感染对巨噬细胞凋亡的调控作用及其机制。实验用结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株和卡介苗BCG分别感染巨噬细胞RAW264.7株,同时设空白对照组,在感染后1,6,12,24 h,用流式细胞技术检测各组巨噬细胞的凋亡率,应用Western blot检测细胞Caspase-3和Bcl-2蛋白表达。结果发现,结核分枝杆菌感染组的凋亡率显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);BCG感染组凋亡率高于H37Rv感染组,在感染后1,12,24 h凋亡率显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。巨噬细胞感染结核分枝杆菌后其Caspase-3蛋白表达增高,结核分枝杆菌感染组的Caspase-3蛋白表达高于对照组:对照组; 董伟杰李微刘丹霞刘云霞庹清章吴芳章乐张万江; 关键词：结核分枝杆菌 CASPASE-3 BCL-2

结核杆菌对巨噬细胞转铁蛋白受体和铁蛋白表达的影响被引量：1: 2013年; 为了研究结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株和卡介苗菌株(BCG)分别感染巨噬细胞RAW264.7细胞株对细胞内转铁蛋白受体和铁蛋白表达量的时相变化及意义,分别于感染后1,6,12,18,24 h,应用ELISA和Western blot检测各组巨噬细胞中TfR和Fn的表达量。ELISA检测结果显示,各组感染巨噬细胞上清液中TfR表达量均高于对照组,在感染12,18 h差异最明显,具有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示:于模型建成后1,6,18 h各感染组差异有统计学意义(P<0.05)。用ELISA和Western blot检测显示各组小鼠巨噬细胞内Fn随时间变化表达逐渐增强,在1 h时Fn的表达为对照组高于H37Rv组和BCG组;6 h后,感染组表达逐渐高于对照组,12 h时,H37Rv组>对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),在18 h和24 h时,H37Rv组>BCG组>对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结核分枝杆菌感染导致巨噬细胞内TfR和Fn表达量增高,且与菌株毒力强弱有关,毒力强的菌株感染巨噬细胞的TfR和Fn的表达量更高。; 李微董伟杰刘云霞庹清章刘丹霞吴芳章乐吴江东张万江; 关键词：结核分枝杆菌巨噬细胞转铁蛋白受体铁蛋白

结核分枝杆菌Pup-蛋白酶体系统与不同毒力结核分枝杆菌致病性的相关性研究被引量：6: 2014年; 目的通过比较分析不同毒力结核分枝杆菌Pup、Dop、PafA和Mpa基因的表达差异,探讨Pup-蛋白酶体系统与不同毒力结核分枝杆菌致病性的相关性。方法分别提取卡介苗菌株(BCG)、结核分枝杆菌国际标准无毒珠(H37Ra)、结核分枝杆菌国际标准强毒珠(H37Rv)、新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株总RNA,并进行纯度鉴定。运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测结核分枝杆菌Pup、Dop、PafA和Mpa基因的表达,比较分析不同毒力结核分枝杆菌Pup、Dop、PafA和Mpa基因的表达差异。结果 H37Rv菌株和新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株与BCG菌株相比,Pup基因表达分别上调1.67、2.65倍,Dop基因表达分别上调2.42、3.69倍,PafA基因表达分别上调4.09、7.36倍,Mpa基因表达分别上调2.65、3.91倍,差异有统计学意义(P<0.05);BCG、H37Ra、H37Rv菌株与新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株相比,Pup基因表达分别下调62%、59%、37%倍,Dop基因表达分别下调63%、64%、34%倍,PafA基因表达分别下调87%、86%、44%倍,Mpa基因表达分别下调64%、67%、32%倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在BCG、H37Ra、H37Rv、新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株Pup、Dop、PafA和Mpa基因的表达有差异性,且与菌株毒力呈正相关。Pup-蛋白酶体系统与不同毒力结核分枝杆菌致病性具有相关性。; 朱彬吴芳章乐吴江东张辉张春军曹旭东邬博何丽张玉清李瑞山王钊庄睿李文娟梁晨樊超张万江; 关键词：结核分枝杆菌毒力

泛素样蛋白蛋白酶体系统对单耐异烟肼结核分枝杆菌耐药性机制研究被引量：6: 2017年; 目的探讨泛素样蛋白蛋白酶体系统对单耐异烟肼结核分枝杆菌耐药性的影响及其机制。方法采用刃天青显色法,比较单耐异烟肼结核分枝杆菌(对照组)与4种基因(Pup、Dop、PafA、Mpa基因)分别过表达和缺失单耐异烟肼结核分枝杆菌菌株异烟肼最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)值的差异;比较加入改变细胞壁通透性试剂后,单耐异烟肼结核分枝杆菌(对照组)与4种基因分别过表达和缺失单耐异烟肼结核分枝杆菌菌株异烟肼MIC差值间的差异。结果 (1)与单耐异烟肼结核分枝杆菌相比,异烟肼的MIC值过表达PafA基因株增加1.03μg/ml,过表达Dop、Mpa基因株分别降低1.03μg/ml、0.68μg/ml,差异均无统计学意义(F=1.898,P>0.05);过表达Pup基因株异烟肼的MIC值增加8μg/ml,差异有统计学意义(t=2.185,P<0.05);缺失Pup、Dop、PafA、Mpa基因株异烟肼的MIC值分别降低4.82、4.98、4.99、4.9μg/ml,差异均有统计学意义(F=35.809,P<0.05)。(2)与加入改变细胞壁通透性试剂后单耐异烟肼结核分枝杆菌相比,异烟肼的MIC差值过表达Pup基因株增加7.78μg/ml,差异有统计学意义(t=2.173,P<0.05);缺失Pup、Dop、PafA、Mpa基因株分别降低4.58、4.73、4.75、4.68μg/ml,差异均有统计学意义(F=33.598,P<0.05);过表达Dop、Mpa基因株分别降低1μg/ml和0.7μg/ml,过表达PafA基因株增加0.97μg/ml,差异均无统计学意义(F=1.935,P>0.05)。结论结核分枝杆菌泛素样蛋白蛋白酶体系统可能通过调控单耐异烟肼结核分枝杆菌细胞壁的通透性影响其耐药性。; 张帅张舜文吴芳吴江东章乐张杰董江涛张玉清柳小玲梁粟朱荟云张大龙武青青张万江; 关键词：结核分枝杆菌耐药性异烟肼

PhoPR双组分信号转导系统对结核分枝杆菌持留性的调控机制研究: 2015年; 目的本研究通过诱导结核分枝杆菌在低氧环境中进入持留状态,来比较分析不同时间不同低氧环境下结核分枝杆菌中的PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异,探讨研究PhoPR双组分信号转导系统对结核分枝杆菌持留性的调控机制。方法首先对结核分枝杆菌国际标准无毒株(H37Ra)和结核分枝杆菌国际标准强毒株(H37Rv)在不同低氧环境下进行培养,提取每个样本菌株的总RNA,并进行完整性鉴定;运用SYBR Green I实时荧光定量PCR检测每个样本菌株中PhoP基因和PhoR基因的表达水平;比较分析不同时间不同低氧环境下的结核分枝杆菌菌株PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异。结果在不同时间点对低氧环境的结核分枝杆菌PhoP基因和PhoR基因的表达水平进行检测,结果显示:与第10d相比,培养至第15d时H37Rv菌株和H37Ra菌株中的PhoP基因和PhoR基因的表达水平均显著上调,差异有统计学意义(P<0.05);并且培养至第25d时,H37Rv菌株中的PhoP基因和PhoR基因的表达水平比H37Ra菌株表达均上调2.34倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在不同时间点相同毒力的结核分枝杆菌的PhoPR双组分信号转导系统中PhoP基因和PhoR基因在不同低氧环境下的表达存在差异,而且在相同时间点不同毒力结核分枝杆菌的PhoPR双组分信号转导系统中PhoP基因和PhoR基因在不同低氧环境下的表达也存在差异,表明PhoPR双组分信号转导系统对结核分枝杆菌的持留性具有调控作用。; 邬博雷英吴芳章乐吴江东曹旭东朱彬何丽李瑞山张玉清王钊王君柳小玲张培培梁粟张万江; 关键词：结核分枝杆菌

泛素样蛋白蛋白酶体系统对单耐异烟肼结核杆菌耐药性的影响研究被引量：2: 2017年; 为探讨泛素样蛋白蛋白酶体系统对单耐异烟肼结核杆菌耐药性的影响及其机制。采用刃天青显色法,比较单耐异烟肼结核杆菌(对照组)与4种基因(Pup基因、Dop基因、PafA基因、Mpa基因)过表达的单耐异烟肼结核杆菌菌株和4种相同基因缺失突变的单耐异烟肼结核杆菌菌株异烟肼最低抑菌浓度(MIC)值的差异;比较在应用外排泵抑制剂后,单耐异烟肼结核杆菌(对照组)与4种基因(Pup基因、Dop基因、PafA基因、Mpa基因)过表达的单耐异烟肼结核杆菌菌株和4种相同基因缺失突变的单耐异烟肼结核杆菌菌株异烟肼MIC差值间的差异。结果显示:(1)与单耐异烟肼结核杆菌相比,过表达PafA基因的该菌株异烟肼的MIC值增加了1.03μg/m L,过表达Dop、Mpa基因的该菌株异烟肼的MIC值分别降低了1.03μg/m L、0.68μg/m L,差异均无统计学意义(P>0.05);与单耐异烟肼结核杆菌相比,过表达Pup基因的该菌株异烟肼的MIC值增加了8μg/m L,缺失Pup、Dop、PafA、Mpa基因的该菌株异烟肼的MIC值分别降低了4.82、4.98、4.99、4.9μg/m L,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)与在应用外排泵抑制剂后单耐异烟肼结核杆菌相比,过表达Pup基因的该菌株异烟肼的MIC差值增加了8μg/m L,缺失Pup、Dop、PafA、Mpa基因的该菌株异烟肼的MIC差值分别降低4.65、4.81、4.83、4.75μg/m L,差异均有统计学意义(P<0.05);与在应用外排泵抑制剂后单耐异烟肼结核杆菌相比,过表达Dop、PafA、Mpa基因的该菌株异烟肼的MIC差值分别降低了1、0.99、0.65μg/m L,差异均无统计学意义(P>0.05)。由此可知,结核杆菌泛素样蛋白蛋白酶体系统对单耐异烟肼结核杆菌耐药性的产生有调控作用,其作用机制可能是通过调控单耐异烟肼结核杆菌外排泵的功能来调控其耐药性的产生。; 张帅吴芳吴江东章乐朱荟云张大龙武青青张万江; 关键词：结核杆菌耐药性异烟肼

结核杆菌Pup-蛋白酶体系统与结核杆菌持留性的相关性研究被引量：1: 2015年; 目的:本研究通过诱导结核杆菌在低氧环境中进入持留状态,比较分析不同时间点、不同环境下结核杆菌Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的表达水平差异,探讨研究Pup-蛋白酶体系统对结核杆菌持留性的调控作用。方法:本实验以结核杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株(以下简称为H37Rv菌株)为研究对象,在低氧、有氧环境下进行培养,分别提取不同时间点每组样本菌株的总RNA,并进行纯度鉴定。运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的方法,分别检测各组结核杆菌菌株的Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的表达;比较分析不同时间点、不同环境下的各结核杆菌菌株Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的表达水平差异。结果:在不同时间点对低氧环境下菌株Pup、Dop、Paf A和Mpa的表达水平进行检测,Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的相对表达水平:低氧环境下,与0 d比较,Pup基因在4 d、7 d、10 d分别上调1.66、2.43、2.76倍,Dop基因在2 d、4 d、7 d、10 d分别上调1.38、1.91、2.54、3.28倍,Paf A基因在2 d、4 d、7 d、10 d分别上调1.22、1.75、2.37、2.67倍,Mpa基因在4 d、7 d、10 d分别上调1.66、2.21、2.63倍(P<0.05);以有氧环境组做对照,低氧环境下,相同时间点,Pup基因在4 d、7 d、10 d分别上调1.85、2.81、2.93倍,Dop基因在2 d、4 d、7 d、10 d分别上调1.20、1.76、2.01、3.01倍,Paf A基因在2 d、4 d、7 d、10 d分别上调1.22、1.57、2.29、2.29倍,Mpa基因在2 d、4 d、7 d、10 d分别上调1.16、1.58、2.16、2.69倍(P<0.05)。结论:低氧环境下,不同时间点,Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的相对表达量存在差异;以有氧环境组作对照,相同时间点,低氧环境下与有氧环境下Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的相对表达量也存在差异。Pup-蛋白酶体系统对结核杆菌持留性具有一定的调控作用。; 朱彬雷英吴芳张辉张春军章乐吴江东曹旭东邬博何丽张玉清李瑞山王钊张万江; 关键词：结核杆菌

结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3基因缺失突变菌株对感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡率的影响及其时相性变化被引量：3: 2013年; 探讨结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3基因缺失突变菌株对感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡率的影响及其时相性变化。用激光共聚焦显微镜技术检测及鉴定结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞,流式细胞术检测不同时期感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡率,比较结核分枝杆菌Hsp16.3基因缺失突变株与正常株感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡率的时相性变化。激光共聚焦显微镜检测结果显示:结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株、结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株Hsp16.3基因缺失突变株(△H37Rv)、卡介苗菌株(BCG)以及卡介苗株Hsp16.3基因缺失突变株(△BCG)均被小鼠肺泡巨噬细胞大量吞噬。流式细胞技术检测结果显示:小鼠感染△H37Rv菌株后,巨噬细胞的凋亡率逐渐上升,至感染7d时达到高峰,随后逐渐降低,1～7d内,各时间段△H37Rv感染组巨噬细胞凋亡率均显著高于H37Rv感染组,9～11d内,△H37Rv感染组巨噬细胞凋亡率反而低于H37Rv菌株组,但13～15d内,△H37Rv感染组巨噬细胞凋亡率又呈现出比H37Rv感染组高的现象,差异均有统计学意义(P<0.05)。△BCG组凋亡率1～7d内呈现明显下降趋势,7d后巨噬细胞凋亡率变化趋于平稳,且1～5d内,△BCG组凋亡率显著高于BCG组(P<0.05),7～15d内,△BCG组与BCG组巨噬细胞凋亡率无明显差异。结果表明:与结核分枝杆菌H37Rv株野生株相比,结核分枝杆菌H37Rv株Hsp16.3基因缺失突变株在感染的早期和晚期对小鼠肺泡巨噬细胞有更强的致凋亡作用,而这种致凋亡作用与结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3基因的缺失相关,说明在结核分枝杆菌感染的早期和晚期,结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3的表达能够抑制宿主巨噬细胞的凋亡。; 赵小杰黄晓艳庹清章董江涛田玺择刘云霞董伟杰刘丹霞李微吴芳章乐张万江; 关键词：结核分枝杆菌缺失突变凋亡

结核杆菌PhoPR双组分系统与广泛流行的耐药结核杆菌耐药性的相关性研究: 2013年; 目的：通过比较分析不同耐药的结核杆菌临床分离株PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异，探讨研究结核杆菌PhoPR双组分系统与新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌耐药性是否具有相关性。方法以新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌临床分离株为研究对象，分别提取结核分枝杆菌临床分离药物敏感菌株、单纯耐异烟肼的结核杆菌临床分离株（ INH-MTB）、单纯耐利福平的结核杆菌临床分离株（ RFP-MTB）、单纯耐链霉素的结核杆菌临床分离株（ SM-MTB）、单纯耐乙胺丁醇的结核杆菌临床分离株（ EB-MTB）、耐多药结核杆菌临床分离株（ MDR）总RNA，并进行纯度鉴定，运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的方法，分别检测各组结核杆菌菌株的PhoP基因和PhoR基因的表达，比较分析不同耐药的结核杆菌临床分离株PhoP基因和PhoR基因的表达水平的差异。结果与结核分枝杆菌临床分离药物敏感菌株相比，PhoP基因在RFP-MTB中的表达上调1．48倍，在MDR中的表达上调2．74倍，差异有统计学意义（P＜0．05）；与MDR相比，PhoP基因在INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB和EB-MTB中的表达下调0．70、0．50、0．25和0．21倍，差异有统计学意义（P＜0．05）。与结核分枝杆菌临床分离药物敏感菌株相比，PhoR基因在INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB和EB-MTB中的表达分别上调6．33、4．56、2．34和1．85倍，在MDR中的表达上调9．06倍，差异有统计学意义（ P＜0．05）；与 MDR相比，PhoR基因在INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB 和EB-MTB 中的表达下调0．36、0．54、0．35和0．19倍，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论在结核分枝杆菌临床分离药物敏感菌株、INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB、EB-MTB和MDR中，结核杆菌PhoP和PhoR基因的表达有差异，结核杆菌PhoPR双组分系统与新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌的耐药性具有相关性。; 李文娟宝音王霞张峰梁晨庄睿樊超庹清章张春军张辉吴芳吴江东章乐张万江; 关键词：结核分枝杆菌耐药性

结核分枝杆菌PhoPR双组分系统与不同毒力结核分枝杆菌致病性的相关性研究被引量：3: 2014年; 目的:通过比较分析卡介苗株(BCG)、结核分枝杆菌国际标准无毒株(H37Ra)、结核分枝杆菌国际标准强毒株(H37Rv)、新疆地区流行的优势强毒株结核分枝杆菌临床分离株(XJ-MTB)的PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异,探讨研究结核分枝杆菌PhoPR双组分系统与不同毒力结核分枝杆菌的致病性是否具有相关性。方法:首先提取上述四种不同毒力结核分枝杆菌菌株的总RNA,并进行完整性鉴定;再运用SYBR Green I实时荧光定量PCR技术检测各组菌株中PhoP基因和PhoR基因的表达水平;最后比较不同毒力结核分枝杆菌PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异。结果:四种不同毒力菌株PhoP基因的相对表达量,由高到低依次为XJ-MTB(9.05)、H37Rv(1.00)、H37Ra(0.25)、BCG(0.08),且四种菌株中PhoP基因的表达有显著的统计学差异(P<0.05);同时四种不同毒力菌株PhoR基因的相对表达量,由高到低依次为XJ-MTB(5.72)、H37Rv(1.00)、H37Ra(0.18)、BCG(0.07),且四种菌株中PhoR基因的表达有显著的统计学差异(P<0.05)。其中XJ-MTB菌株PhoP基因和PhoR基因的表达水平与BCG、H37Rv、H37Ra相比存在显著的统计学差异(P<0.05);H37Rv菌株PhoP基因和PhoR基因的表达与BCG、H37Ra相比存在显著的统计学差异(P<0.05);而BCG菌株PhoP基因和PhoR基因的表达与H37Ra相比统计学差异不显著(P>0.05)。结论:结核分枝杆菌PhoPR双组分系统中PhoP基因和PhoR基因在不同毒力结核分枝杆菌中的表达存在差异,并且该系统与不同毒力结核分枝杆菌的致病性存在相关性。; 邬博吴芳章乐吴江东张辉张春军曹旭东朱彬李瑞山何丽王钊张玉清庄睿李文娟梁晨樊超张万江; 关键词：结核分枝杆菌

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