国家自然科学基金(30670453)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 靶向性甲基化酶真核表达载体pcDNA3.1-myc-3a的构建
- 2010年
- 目的:在pcDNA3.1真核表达载体中构建表达融合myc-6his标签的靶向性甲基化酶pcDNA3.1-myc-3a并进行鉴定。方法:以含有myc全长基因的pcDNA3.1-myc-Luc质粒为模板,通过PCR方法扩增获得myc(DBD),再以含有靶向性甲基化酶的pcDNA4.0-GBD-3a-myc-6his质粒为模板,通过PCR的方法扩增获得融合有myc-6his标签序列的目的区段3a,然后将两者克隆入表达载体pcDNA3.1;以双酶切和PCR方法对构建的载体进行鉴定。结果:通过PCR方法获得了靶向性甲基化载体pcDNA3.1-myc-3a,并通过免疫印记方法验证了抗myc标签抗体可以特异性识别目的蛋白。结论:正确构建了靶向性甲基化酶pcDNA3.1-myc-3a的真核表达载体。
- 吴琳张治国张健刘新平李福洋
- 关键词：DNA甲基化酶靶向性
- 靶向性DNA甲基化酶在pET32a原核表达载体中的表达和鉴定
- 2008年
- 目的:在pET32a原核表达载体中表达融合myc-6his标签的靶向性甲基化酶B1-3a并进行鉴定。方法:以含有B1-3a基因的pcDNA4.0-B1-3a-myc-6his质粒为模板,通过PCR的方法扩增获得融合有myc-6his标签序列的目的区段B1-3a,然后克隆入表达载体pET32a;以SDS-PAGE和Western blot方法对表达产物进行鉴定。结果:表达产物中在分子量43kD左右可见与目的蛋白分子量相符的条带,该条带可被6his标签单克隆抗体特异识别。结论:正确构建了靶向性甲基化酶B1-3a的原核表达载体,靶向性甲基化酶能够在pET32a中成功表达。
- 吴琳邢克飞张治国张健刘新平药立波李福洋
- 关键词：DNA甲基化酶基因靶向性
- 靶向性DNA甲基化酶在毕赤酵母中的表达和鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的:在毕赤酵母中表达融合Myc-His标签的靶向性甲基化酶B1-3a并进行鉴定。方法:以含有B1-3a基因的pcDNA4.0-myc/his质粒为模板,通过PCR扩增获得融合有myc/his标签序列的目的区段B1-3a基因,然后克隆入表达载体pPIC3.5k;电穿孔转化毕赤酵母菌株GS115,经G418筛选后进行甲醇诱导表达,并以SDS-PAGE和Western印迹对表达产物进行鉴定。结果:表达产物中可见与目的蛋白相对分子质量(50000)相符的条带,该条带可被Myc标签单克隆抗体特异识别。结论:正确构建了靶向性甲基化酶B1-3a的酵母表达载体,靶向性甲基化酶能够在毕赤酵母中成功表达。
- 邢克飞吴琳李燕刘新平药立波李福洋
- 关键词：DNA甲基化酶靶向性毕赤酵母
