国家自然科学基金(81301619)
- 作品数：7 被引量：38H指数：3
- 相关作者：张晓娟马晓春梁英健栾正刚陈松更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第一医院海南医学院天津医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金沈阳市科技计划项目辽宁省自然科学基金更多>>
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- 血栓弹力图预测SICU患者抗凝治疗的风险被引量：21
- 2018年
- 目的探讨血栓弹力图（TEG）能否预测外科重症加强治疗病房（SICU）接受抗凝治疗患者发生静脉血栓栓塞症（VTE）及出血的风险。方法选择2016年12月至2017年12月天津市天津医院SICU收治的205例接受低分子肝素抗凝治疗的患者。于抗凝治疗后1 d对所有患者进行TEG检测，记录凝血反应时间（R值）、血块生成时间（K值）、血块生成率（α角）和最大宽度值（MA值）；同时进行传统凝血功能指标检测，记录凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）和D-二聚体水平。观察患者住院期间深静脉血栓形成（DVT）、肺栓塞（PE）和出血的发生情况。采用多因素Logistic回归法分析接受抗凝治疗患者发生VTE及出血的危险因素。结果205例患者在抗凝治疗过程中发生DVT 14例，肺栓塞（PE）4例（其中2例合并DVT），VTE发生率为7.8%（16/205）；发生脑出血2例，胃出血2例，气道内出血1例，出血发生率为2.4%（5/205）。与未发生VTE/出血的患者比较，VTE患者TEG的R值明显降低（min：4.6±2.2比7.4±1.4，P〈0.01），出血患者TEG的R值明显升高（min：12.1±1.1比7.4±1.4，P〈0.01）。发生与未发生VTE或出血患者间TEG的K值、α角、MA值及传统凝血功能指标PT、APTT和D-二聚体水平比较差异均无统计学意义。多因素Logistic回归分析显示，TEG的R值是SICU患者抗凝治疗后发生VTE或出血事件的独立危险因素〔VTE：β＝0.386，优势比（OR）＝1.096，95%可信区间（95%CI）＝1.021～2.361，P＝0.006；出血：β＝-1.213，OR＝1.051，95%CI＝1.017～3.458，P＝0.045〕。结论TEG的R值是能预测SICU接受抗凝治疗患者发生VTE和出血的有效指标。
- 武子霞刘志永张伟张文正穆恩
- 关键词：血栓弹力图抗凝治疗静脉血栓栓塞症
- 肝素对脓毒症小鼠急性肾损伤时肝素酶表达及肾功能影响的研究
- 2017年
- 目的:探讨肝素干预对脓毒症小鼠肾脏肝素酶表达的影响及其保护性作用。方法:选取6~8周龄SPF级健康雄性C57BL/6小鼠80只,采用CLP法建立小鼠脓毒症模型。依照随机原则,分为假手术组、假手术肝素组、脓毒症组、脓毒症肝素组。在造模后4h、24h两个时间点分别采集标本,每个时间点每组各10只。分别在各个时间点采血、摘取肾脏采集标本。利用ELISA的方法检验IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α炎性因子表达水平,以及BUN和Cr浓度。光镜下观察肾脏病理改变,免疫组织化学的方法观察肝素酶表达水平的变化。结果:脓毒症组4hCr,24hBUN、Cr出现增高,均显著高于对照组(P<0.05),给予肝素干预后,脓毒症组小鼠4hCr,24hBUN、Cr均显著下降。脓毒症组小鼠4h免疫组织化学显示肝素酶表达显著高于对照组(P<0.05),肝素干预后脓毒症组小鼠4h肝素酶表达显著低于脓毒症组(P<0.05)。肝素干预组的肾脏病理损害明显较脓毒症组轻。结论:肝素能够抑制肾脏内的肝素酶的表达,这可能是肝素保护脓毒症所致急性肾损伤的作用机制之一。
- 肖丰史键山张晓娟陈松
- 关键词：肝素酶肝素脓毒症急性肾损伤
- 短发夹高迁移率族蛋白B1真核细胞表达载体通过HOXA9下调人脐静脉血管内皮细胞表达E-选择素被引量：3
- 2015年
- 目的：探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）基因表达对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）激活表达E-选择素的分子机制。方法将同源盒转录因子（HOXA9）小干扰RNA（siRNA）短序列转染至对数生长期的HUVEC，采用实时荧光定量聚合酶链反应（实时qPCR）和蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测其对HOXA9 mRNA和蛋白表达的影响；另设空白对照组和无意序列nonsilence阴性对照组。取已经稳定转染pRNA-u6.1/Neo-HMGB1 shRNA质粒的HUVEC（低表达HMGB1的HUVEC），采用实时qPCR法检测HOXA9和E选择素的mRNA表达；另设nonsilence转染组作为阴性对照。将HOXA9 siRNA转染至低表达HMGB1的HUVEC中作为共同转染组，采用实时qPCR法检测E-选择素的mRNA表达；以HMGB1 shRNA组和HOXA9 nonsilence组作为对照。结果①空白对照组HOXA9 mRNA（2-ΔΔCT）和蛋白（积分A值）表达分别为1.094±0.115和1.031±0.060。与无意序列nonsilence转染组比较， HOXA9 siRNA转染组可显著降低HUVEC细胞中HOXA9的mRNA和蛋白表达〔HOXA9 mRNA（2-ΔΔCT）：0.257±0.030比1.035±0.091，t＝14.010，P＝0.002；HOXA9蛋白（积分A值）：0.278±0.042比0.975±0.014，t＝27.310，P＝0.002〕。②与nonsilence转染组比较， HMGB1 shRNA转染上调了HUVEC中HOXA9 mRNA（2-ΔΔCT）表达（2.519±0.278比0.856±0.063，t＝10.100， P＝0.001），同时下调了E-选择素mRNA（2-ΔΔCT）表达（0.311±0.046比1.080±0.201，t＝7.415，P＝0.000）。③与HOXA9 nonsilence组及HMGB1 shRNA组比较，HMGB1 shRNA和HOXA9 siRNA共同转染后HUVEC细胞中E-选择素 mRNA（2-ΔΔCT）表达明显升高（3.445±0.428比1.085±0.212、1.004±0.104，t1＝8.507， t2＝9.603，均P＜0.001）。结论 HMGB1在HUVEC细胞核内可能通过HOXA9调节E-选择素的表达。
- 张晓娟焦丽丽栾正刚马晓春
- 关键词：E-选择素真核细胞表达载体
- 肝素通过下调脂多糖诱导的NO和活性氧表达保护肾脏微血管内皮细胞被引量：7
- 2018年
- 目的 观察肝素对脂多糖(LPS)刺激肾脏微血管内皮细胞(RMVECs)形态学改变及一氧化氮(NO)和活性氧(ROS)表达的影响.方法 采用三步梯度筛网法原代培养大鼠RMVECs,取长势优异的3~4代细胞进行实验,并分为空白对照组、10 mg/L LPS处理组和2.5、5、10 kU/L肝素预处理组(LPS刺激前0.5 h给予相应剂量肝素干预).透射电镜下观察LPS刺激24 h细胞形态学改变;于LPS刺激5、15、30、45 min采用免疫荧光法检测RMVECs内ROS表达;采用硝酸还原酶法检测RMVECs内NO生成情况.结果 ① 空白对照组RMVECs细胞膜完整,细胞内线粒体和内质网清晰可见,核膜完整,核仁明显.LPS刺激24 h后,RMVECs细胞器空泡变性明显,以线粒体为主,且细胞膜产生大量微粒体.经10 kU/L肝素预处理后,细胞器空泡变性明显减轻,细胞膜形态稳定.② LPS刺激5 min即可在RMVECs细胞内检测到ROS表达和NO生成明显增加,并随时间延长逐渐增加,ROS表达30 min达峰值,NO生成45 min达峰值,与空白对照组同期比较差异均有统计学意义〔30 min ROS(平均荧光值):76.2±5.8比1.5±0.1,45 min NO(μmol/L):70.3±8.6比1.8±0.1,均P<0.01〕.随肝素剂量增加,预处理RMVECs后细胞内ROS表达及NO生成逐渐减少,以10 kU/L作用最明显,与LPS处理组同期比较差异均有统计学意义〔30 min ROS(平均荧光值):16.8±1.7比76.2±5.8,45 min NO(μmol/L):11.8±8.6比70.3±8.6,均P<0.01〕.结论 肝素可通过下调LPS诱导的NO、ROS表达和稳定细胞形态发挥保护肾脏内皮细胞的作用,以10 kU/L作用最明显.
- 李鑫梁英健张晓娟马晓春
- 关键词：肝素脂多糖活性氧
- 普通肝素通过抑制HOXA9表达下调可以减少内皮细胞活化被引量：1
- 2018年
- 目的探讨普通肝素（UFH）对脂多糖（LPS）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）活化的影响及作用途径。方法将HUVECs传代培养后随机分为对照组（加入等量磷酸盐缓冲液）、LPS组（加入LPS 10 mg/L）、UFH组（加入UFH 10 kU/L）、UFH＋LPS组（UFH 10 kU/L处理30 min后再加入LPS 10 mg/L）4组，处理3 h后收集各组蛋白，采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测内皮细胞中HOXA9、E-选择素、核转录因子-κB（NF-κB）的表达。结果与对照组比较，LPS组HOXA9表达明显下降，E-选择素、NF-κB表达明显升高（HOXA9/β-actin：0.082±0.009比0.199±0.067，E-选择素/β-actin：0.113±0.055比0.047±0.030，NF-κB/β-actin：0.845±0.025比0.664±0.092，均P〈0.05）。与LPS组比较，UFH＋LPS组HOXA9表达明显增加，E-选择素、NF-κB表达明显下降（HOXA9/β-actin：0.190±0.096比0.082±0.009，E-选择素/β-actin：0.057±0.017比0.113±0.055，NF-κB/β-actin：0.544±0.060比0.845±0.025，均P〈0.05）。UFH组各蛋白表达与对照组一致。结论UFH可能通过抑制LPS致HUVECs中HOXA9表达下降，并通过NF-κB途径来抑制内皮细胞活化。
- 杨瑞张晓娟梁英健马晓春
- 关键词：内皮细胞活化普通肝素HOXA9E-选择素
- 肝素对脓毒症肝损伤小鼠肝组织和血清肝素酶水平的影响被引量：3
- 2017年
- 目的探讨肝素对脓毒症肝损伤小鼠体内肝素酶（HPA）表达的影响。方法6~8周龄健康雄性C57BL/6小鼠48只，按照随机数字表法将动物分组。24只采用盲肠结扎穿孔术（CLP）建立脓毒症小鼠模型（CLP组）；24只进行假手术处理（Sham组），仅开腹、关腹，不予结扎。Sham组和CLP组各有12只动物进行肝素预处理（Sham＋UFH组、CLP＋UFH组），分别于术前30 min及术后12 h经小鼠尾静脉注射8 U普通肝素（UFH，稀释至200 μL）；另外12只小鼠注射等量生理盐水。分别于术后4、24 h留取各组小鼠血清及肝脏组织标本，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清HPA、白细胞介素（IL-6、IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）水平；采用苏木素-伊红（HE）染色，观察肝组织病理学改变；采用免疫组化法检测肝组织HPA表达。结果与Sham组比较，CLP组血清HPA、IL-6、IL-1β、TNF-α、ALT、AST水平均明显升高，且随时间延长呈进一步升高趋势；HE染色显示肝组织炎性细胞浸润，肝细胞坏死；免疫组化显示肝组织HPA表达水平明显增加，说明脓毒症动物模型制备成功。与CLP组比较，CLP＋UFH组术后4 h血清HPA、炎性因子、转氨酶水平即明显下降〔HPA（ng/L）：76.72±2.75比101.55±7.54，IL-6（ng/L）：51.16±5.68比63.89±3.26，IL-1β（ng/L）：31.53±2.90比40.87±2.88，TNF-α（ng/L）：171.76±5.60比194.62±14.13，ALT（μg/L）：0.26±0.09比0.62±0.17，AST（μg/L）：1.03±0.22比1.45±0.08，均P〈0.05〕，24 h时虽较4 h显著升高，但仍显著低于CLP组〔HPA（ng/L）：125.30±7.80比302.50±17.81，IL-6（ng/L）：81.16±4.54比176.56±5.45，IL-1β（ng/L）：61.13±2.80比113.73±3.96，TNF-α（ng/L）：328.47±10.79比599.62±10.20，ALT（μg/L）：0.38±0.17比0.91±0.26，AST（μg/L）：1.16±0.15比1.88±0.08，均P〈0.05〕。HE染色显示，CLP＋UFH组�
- 胡紫薇张晓娟陈松朱然马晓春
- 关键词：脓毒症肝损伤肝素肝素酶
- 高迁移率族蛋白B1对人脐静脉内皮细胞增殖及迁移能力的影响被引量：3
- 2013年
- 目的探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖和迁移能力的影响。方法通过稳定转染的方法将pRNA—u6．1／Neo-对照和pRNA—u6．1／Neo—HMGB1短发夹RNA（shRNA）质粒转至HUVEC细胞，构建对照及HMGB1 shRNA细胞株，通过蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）和实时荧光逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）进行稳定转染细胞的鉴定，通过四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞株增殖情况，流式细胞仪检测细胞株周期的分布，划痕实验检测细胞株迁移能力。结果Western blotting及RT—PCR检测证明HMGB1 shRNA稳定转染的HUVEC细胞株构建成功，培养72h时细胞中HMGB1蛋白及mRNA表达较对照细胞明显降低（蛋白：0．436±0．027比1．017±0．038，T=12．180，P=0．000；mRNA：0．436±0．031比1．020±0．051，T=9．660，P=0．001）。MTF结果显示，HMGB1 shRNA稳定转染HUVEC细胞株2、3、4、5d的增殖能力比对照细胞株明显下降（2d：0．210±0．023比0．240±0．011，T=1．050，P=0．351；3d：0．240±0．022比0.361±0．030，T=3．203，P=0．033；4d：0．373±0．031比0．531±0．033，T=3．530，P=0．022；5d：0．441±0．031比0．602±0．030，T=4．180，P=0．106）。流式细胞仪检测结果显示，HMGB1 shRNA细胞株在s期的比例明显低于对照细胞株[（13．10±1．10）％比（21．12±1．20）％，T=4．950，P=0．001]。划痕实验结果显示，HMGB1 shRNA细胞株在细胞刮除后12h划痕愈合的细胞比例较对照细胞株明显降低[（21．07±3．33）％比（88．53±3．15）％，T=14．142，P=0．000]。结论HMGB1 shRNA能明显抑制HUVEC细胞的增殖和迁移能力。
- 张晓娟栾正刚马晓春
- 关键词：人脐静脉内皮细胞高迁移率族蛋白B1增殖迁移
