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siRNA干扰明胶酶对人肾小管细胞ICAM-1表达的影响: 2007年; 目的利用小干扰RNA(siRNA)抑制人肾小管上皮细胞(HKC)的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9,即明胶酶A和B的表达,观察其对胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响。方法培养人肾小管上皮细胞,以100nmol/L佛波醇酯(PMA)刺激18h,脂质体转染抑制MMP-2或MMP-9表达的siRNA或无关siRNA。提取细胞总RNA或胞浆蛋白,利用Real-TimePCR、Western blot或免疫荧光结合激光共聚焦显微镜技术检测MMP-2、MMP-9或ICAM-1的表达情况。结果特异性的siRNA能有效抑制HKC中MMP-2、MMP-9的mRNA和蛋白表达;免疫荧光结果显示经PMA刺激后HKC的ICAM-1表达上调,同时MMP-9-siRNA转染组人肾小管细胞的ICAM-1蛋白表达水比其他实验组高(P<0·05)。结论抑制肾小管上皮细胞MMP-9的表达可使ICAM-1表达上调,提示除了细胞外基质降解途径外,MMP-9还可通过炎症途径影响肾脏纤维化进程。; 梅艳洪权张雪光丁瑞陈香美; 关键词：基质金属蛋白酶类胞间黏附分子1

抗人有机阴离子转运蛋白3抗体制备及其在肾脏定位的研究: 2006年; 目的采用新的基因免疫方法制备小鼠抗人有机阴离子转运蛋白3(anti-humanorganicaniontransporter3,hOAT3)多克隆抗体,并用该抗体对hOAT3在人肾小管上皮细胞的表达进行定位研究。方法应用Accelrys软件分析hOAT3抗原表位,选择其细胞内表位,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法从人肾组织RNA中扩增其261bp的cDNA序列,克隆到pBQAP-TT构建基因免疫载体,与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi-FlT3L同时免疫小鼠,5周后获得血清抗体,人肾组织Westernblot和免疫组化鉴定抗体的特异性和定位表达。结果成功构建基因免疫载体pBQAP-TT-hOAT3,序列分析鉴定正确,ELISA方法测得抗体滴度高达1∶3000,该抗体识别人肾皮质膜蛋白62×103的hOAT3,人肾组织免疫组化提示该抗体识别定位在肾小管上皮细胞基底膜。结论成功用基因免疫方法制备高效特异性抗hOAT3多克隆抗体,为今后的生理病理研究奠定基础。; 张萍陈香美许国双何娅妮吴镝杨聚荣; 关键词：肾脏基因免疫抗体制备

人尿酸转运蛋白基因的克隆与序列分析被引量：3: 2005年; 目的获得编码人尿酸转运蛋白(humanuricacidtransporter,hUAT)的全长基因。方法从人肾小管上皮细胞株(HK-2)中提取总RNA,根据Genbank中hUAT基因序列设计特异性引物,然后通过RT-PCR法扩增目的片段。所得目的片段酶切后与载体pEGFP-C1连接,经酶切及序列分析鉴定。结果成功扩增出980bp的hUAT全长基因,克隆到pEGFP-C1载体后酶切分析结果与预期一致,序列分析结果与Genbank上公布的hUAT序列完全一致。结论成功克隆出hUAT基因,序列分析结果完全正确,为对该基因进一步研究奠定了基础。; 洪权吴镝陈香美侯剀; 关键词：逆转录-聚合酶链反应克隆

人肾尿酸转运蛋白1基因克隆、抗体制备及其在肾小管上皮细胞中的定位被引量：5: 2005年; 目的制备人尿酸转运蛋白1(hURAT1)多克隆抗体并利用该抗体检测hURAT1在肾组织中的表达及亚细胞定位。方法用RT PCR方法从人肾组织中扩增出hURAT1基因全长及其抗原表位区,分别构建绿色荧光蛋白hURAT1pEGFP融合表达载体和GST融合表达载体pGEX5X1。诱导表达并纯化GST融合蛋白,利用改良的蛋白免疫法制备多克隆抗体;Westernblot及免疫组化方法观察人肾组织的hUART1基因产物的表达。将hURAT1pEGFP重组质粒转染细胞,激光共聚焦显微镜动态观察hU RAT1pEGFP在肾小管上皮细胞LLC PK1细胞膜的定位及表达。结果成功获得高效特异的hURAT1抗体,利用该抗体证实hU RAT1基因编码产物分布于人肾组织近端肾小管刷状缘,Westernblot证实hURAT1蛋白在肾组织中表达。激光共聚焦显微镜动态观察显示hURAT1pEGFP定位于LLC PK1细胞膜。结论制备的hURAT1抗体及其全长基因可用于hURAT1基因的生理功能及病理研究,hURAT1基因编码产物分布于人肾组织近端肾小管刷状缘。; 吴镝张萍陈香美洪权许国双张晓洁冯哲丁瑞侯剀; 关键词：尿酸荧光抗体技术抗体

抗人有机阴离子转运蛋白4多克隆抗体的制备及其在肾脏的定位研究被引量：1: 2005年; 目的:拟采用一套新的基因免疫系统制备高特异性和高效价的小鼠抗有机阴离子转运蛋白4(hOAT4 )多克隆抗体,并用该抗体对hOAT4在人肾小管上皮细胞的表达进行定位研究。方法:应用Accelrys软件分析hOAT4抗原表位,选择其中免疫源性较强的细胞内表位(E2 78～R345 ) ,从人肾组织总RNA中用反转录-聚合酶链反应(RT -PCR)方法扩增其2 0 4bp的cDNA序列,克隆到pBQAP -OVA构建基因免疫载体,鉴定正确后与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi -FlT3L同时免疫小鼠,5周后取血清抗体,ELISA方法测定抗体滴度,人肾组织Westernblot和免疫组化鉴定抗体的特异性和定位表达。结果:成功构建基因免疫载体pBQAP -OVA -hOAT4 ,经酶切及序列分析鉴定完全正确。ELISA方法测得抗体滴度高达1∶30 0 0 ,该抗体识别人肾皮质膜蛋白和肾小管刷状缘蛋白6 5kD糖基化的hOAT4。人肾组织免疫组化结果提示该抗体识别定位在近段肾小管上皮细胞刷状缘的hOAT4。结论:用基因免疫方法可以成功制备高效价和高特异性抗hOAT4多克隆抗体。; 吴镝许国双陈香美师锁柱洪权张萍吕扬; 关键词：多克隆抗体免疫系统

影响IgA肾病高尿酸血症的因素被引量：45: 2005年; 目的:探讨IgA肾病高尿酸血症的影响因素及其与肾内动脉病变的关系。方法:对6 4 8例IgA肾病患者进行回顾性研究,应用多元回归的统计学方法分析高尿酸血症发生的影响因素。结果:IgA肾病患者中高尿酸血症的发生率为2 9.6 %。与高尿酸血症独立相关的因素为:血清肌酐升高、高甘油三酯血症、高血压、肥胖及肾内动脉病变。血尿酸的水平与IgA肾病肾内动脉病变的程度密切相关。结论:有效地控制血压和体重、降低血脂及血尿酸水平,可望减轻肾内动脉病变,延缓IgA肾病的进展。; 邱强陈香美谢院生魏日胞吴镝蔡广研刘述文; 关键词：IGA肾病高尿酸血症肾内动脉血液透析

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国家自然科学基金(30100062)