黑龙江省博士后科研启动基金(LBH-Q09171)
- 作品数：3 被引量：3H指数：2
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- 小地老虎几丁质脱乙酰基酶基因的克隆与原核表达
- 2013年
- 几丁质脱乙酰基酶(Chitin deacetylase,CDA)可以将几丁质修饰为壳聚糖,在昆虫几丁质代谢中具有重要作用。研究以小地老虎(Agrotis ipsilonHufngel)5龄幼虫虫体为材料提取总RNA,利用RT-PCR和RACE技术,扩增得到小地老虎几丁质脱乙酰基酶基因的cDNA序列。该序列含有2 048个碱基,包括一个1 626个碱基的开放读码框,编码541个氨基酸,分子质量约为61.7 ku,多肽的等电点为5.03。推导得到的氨基酸序列与其他昆虫,尤其是鳞翅目昆虫的几丁质脱乙酰基酶高度同源。所获小地老虎CDA基因的cDNA序列已登录GenBank并获得登录号,登录号为JQ012932。将CDA基因连接到PET21b载体上转入到BL21中诱导表达,SDS-PAGE电泳得到目的蛋白条带。
- 樊东郭博智高艳玲赵奎军王晓云
- 关键词：小地老虎克隆原核表达
- 苜蓿实夜蛾几丁质脱乙酰基酶基因cDNA序列的克隆与序列分析被引量：2
- 2011年
- 几丁质脱乙酰基酶（CDA）在昆虫几丁质代谢中具有重要作用。本研究以苜蓿实夜蛾5龄幼虫虫体为材料提取总RNA，利用RT-PCR和RACE技术，扩增得到该虫CDA基因的cDNA序列。该序列含有1984个碱基，包括1个1626个碱基的开放阅读框，编码一个含541个氨基酸的蛋白，分子量约为61．86ku。克隆基因推导的氨基酸序列具有几丁质脱乙酰基酶典型的3个功能区，分别是几丁质结合区（47～103），催化区（199-355），低密度脂蛋白受体区（124～158）。序列比对表明，克隆的苜蓿实夜蛾CDA与其他昆虫的CDA在核苷酸和氨基酸水平上的一致性存在较大差异。苜蓿实夜蛾CDA的氨基酸序列与棉铃虫CDA（GQ411189）一致性达到98％，而与另外3种昆虫粉纹夜蛾CDA（AY966402）、蓓带夜蛾CDA（EU660852）和棉铃虫CDA（GQ411190＼GQ411191＼EF600051）氨基酸序列间的一致性只有36％～38％，属于两类CDA类群中的一类。基因的cDNA序列已经登录GenBank并获得登录号GU188855。
- 李玲樊东吴丽梅姚磊
- 关键词：苜蓿夜蛾克隆
- 甘蓝夜蛾两种不同类型几丁质脱乙酰基酶基因的克隆与组织特异性表达被引量：2
- 2011年
- 几丁质脱乙酰基酶(chitin deacetylase,CDA)是昆虫几丁质降解酶中的一种酶,可以将几丁质转化为壳聚糖,在昆虫几丁质代谢中具有重要作用。本研究以甘蓝夜蛾Mamestra brassicae5龄幼虫虫体为材料提取总RNA,利用RT-PCR和RACE技术,分别扩增得到甘蓝夜蛾的2类不同几丁质脱乙酰基酶基因的cDNA序列。其中一种CDA含有2036个碱基,包括一个1617个碱基的开放读码框,编码一个含539个氨基酸的蛋白,分子量约为61.5ku,作者定义其为cDNA1;另一种CDA含有1312个碱基,包括一个1173个碱基的开放阅读框,编码一个含390个氨基酸的蛋白,分子量约为44.1ku,作者定义其为cDNA2。cDNA1推导的氨基酸序列具有几丁质脱乙酰基酶典型的3个功能区,分别是几丁质结合区、催化区和低密度脂蛋白受体区,属于CDA第1组的成员。cDNA2推导的氨基酸序列只有几丁质催化区,属于CDA第5组的成员。利用RT-PCR进行该基因的mRNA水平上的表达表明几丁质脱乙酰基酶cDNA1在幼虫取食期的唾腺、中肠、脂肪体组织表达,在体壁和马氏管中不表达,在预蛹期和蛹期表达;cDNA2只在幼虫期的中肠表达,在其他组织及时期都不表达。获得的基因cDNA序列已经登录GenBank并获得登录号,cDNA1登录号为HQ680620,cDNA2登录号为HQ680621。
- 姚磊樊东王晓云高艳玲
- 关键词：甘蓝夜蛾克隆
