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水生呼肠孤病毒基因组研究进展被引量：4: 2013年; 水生呼肠孤病毒隶属于呼肠孤病毒科水生呼肠孤病毒属,可感染多种淡水或海水水生动物并造成不同程度危害,严重影响了水产养殖业健康发展。水生呼肠孤病毒基因组为分11个节段的双链RNA,推测编码12种结构多肽。论文综述了近年来水生呼肠孤病毒基因组序列测定及其应用的研究进展,为进一步了解水生呼肠孤病毒基因组的多样性,推测其编码蛋白的功能及检测方法的建立,基因工程疫苗的研制,以及抗病毒研究提供借鉴和参考。; 殷亮王庆曾伟伟李永刚王英英石存斌吴淑勤; 关键词：基因组

草鱼呼肠孤病毒HZ08株VP4蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：10: 2013年; 为了建立针对草鱼呼肠孤病毒(GCRV)流行株的血清学检测方法,实验构建了能高效表达GCRV HZ08株主要衣壳蛋白VP4的重组表达载体pET32a-S6,利用纯化的VP4重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,经过克隆和筛选,获得3株能稳定分泌抗VP4重组蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)的杂交瘤细胞,分别命名为2C2、2F3和5E5。抗体经亚型鉴定均为IgG1,轻链为κ链;间接ELISA试验证明,3株杂交瘤细胞分泌的MAb可特异性识别GCRV-HZ08,与GSRV,ISKNV,IHNV均无交叉反应。选择2C2作为腹水生产细胞株,免疫小鼠后腹水ELISA效价为1∶720 000;IFA和Western-blotting结果显示,这株杂交瘤细胞分泌的MAb能够特异性识别GCRV-HZ08病毒粒子。本实验制备的MAb具有良好的生物学特性,为GCRV流行株血清学检测方法的建立及VP4蛋白相关功能研究奠定了基础。; 曾伟伟王庆王英英石存斌吴淑勤; 关键词：草鱼呼肠孤病毒单克隆抗体

基因组学、转录组学、蛋白质组学和结构生物学在水产科学中的应用被引量：5: 2015年; 基因组学、转录组学、蛋白质组学和结构生物学分别研究生物体的基因组成、基因差异表达、蛋白间相互作用和分子结构特征,在当代生命科学中发挥了重要的作用。近年来,这些新技术的引入为水产科学的发展提供了不可多得的机遇。论文阐述了基因组学、转录组学、蛋白质组学和结构生物学在水产科学中的最新进展,并为蛋白质组学和结构生物学的进一步应用提供了见解。; 方翔曾伟伟王庆石存斌吴淑勤; 关键词：基因组学转录组学蛋白质组学结构生物学水产科学

基因Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒TaqMan Real-Time PCR检测方法的建立及应用被引量：5: 2014年; 为了建立和应用可检测基因I型草鱼呼肠孤病毒（GCRV）的荧光定量检测方法，实验根据基因I型GCRV的s6保守序列，分别设计扩增目的条带661bp普通引物（P1、P2）、扩增目的条带159bp荧光定量引物（F1、F2）和一条探针；同时构建含有目的片段的PVAX1-S6作为标准质粒，10倍梯度稀释构建质粒拷贝数与Ct值的标准曲线（Y=-3．389X＋38．076）。结果表明，此方法在3．9×10^7～3．9×10^1拷贝／uL之间相关性较好，R2为0．992，最小检测量为4拷贝／uL；且与基因Ⅱ型、Ⅲ型GCRV以及其他病原核酸无交叉反应。运用该方法检测16份草鱼出血病疑似样品，阳性结果为4份；而普通PCR检测仅2份显示阳性。本研究建立了针对基因I型GCRV的荧光定量检测方法，具有高效、特异、灵敏、可重复性强的优点，适合于目前基因I型GCRV的临床快速检测和病毒定量分析。; 殷亮王庆曾伟伟李永刚王英英刘春梁红茹石存斌吴淑勤; 关键词：草鱼呼肠孤病毒 TAQMAN PCR

草鱼呼肠孤病毒HZ08株S10编码蛋白多克隆抗体制备及其特性分析被引量：2: 2014年; 为研究草鱼呼肠孤病毒(GCRV)HZ08株S10基因节段编码蛋白的可能功能,采用PCR方法扩增草鱼呼肠孤病毒HZ08株S10基因节段,并把该基因节段克隆至表达载体pET-32a(+),获得的重组表达载体pET-32a-S10转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE分析鉴定后,再通过变性、过Ni柱纯化、透析复性纯化获得目的蛋白。然后用纯化的重组蛋白免疫昆明小白鼠,制得多克隆抗体,用间接ELISA方法测定抗体效价,用Western blot和IFA(间接免疫荧光试验)鉴定抗体特异性。结果表明,SDS-PAGE分析表达的重组蛋白约为53 ku,大小与预期相符,目的蛋白主要存在于包涵体中;过Ni柱纯化、透析复性纯化后的重组蛋白纯度可达97.4%;间接ELISA测得制备的多克隆抗体效价约为1∶106,Western blot和IFA结果显示,制备的多克隆抗体能识别HZ08毒株,表明S10编码蛋白为GCRV-HZ08株的结构蛋白。; 李永刚曾伟伟王庆殷亮王英英梁红茹刘春石存斌吴淑勤; 关键词：草鱼呼肠孤病毒多克隆抗体

草鱼呼肠孤病毒分子生物学研究进展被引量：11: 2013年; 由草鱼呼肠孤病毒引起的草鱼出血病是危害我国淡水养殖业,尤其是草鱼养殖业最为重要的疫病,论文就近年来国内外对草鱼呼肠孤病毒一般生物学特性、基因组特征、蛋白及其功能、细胞培养特性、致病机理、分子生物学诊断技术等各方面的研究进展进行综述,为草鱼呼肠孤病毒的进一步深入研究和草鱼出血病的防控提供参考。; 李永刚曾伟伟王庆殷亮王英英石存斌吴淑勤; 关键词：草鱼呼肠孤病毒草鱼出血病分子生物学

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