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郑州市科技攻关计划项目(112PPTGY250-3): 作品数：10 被引量：43H指数：5; 相关作者：崔波蒋素华袁秀云王默霏田云芳更多>>; 相关机构：郑州师范学院河南农业大学拓洋实业有限公司更多>>; 发文基金：郑州市科技攻关计划项目河南省科技攻关计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程更多>>

朵丽蝶兰MADS-box基因DtpsMADS1的克隆与表达特性被引量：10: 2014年; 植物MADS-box基因家族编码高度保守的转录因子,参与了包括花器官发育和开花在内的多种发育进程。为阐释兰科植物成花的分子调控机制,根据MADS-box基因保守序列设计简并引物,用RACE方法从朵丽蝶兰花葶中克隆到1个MADS-box家族基因,该基因cDNA全长960 bp,包含37 bp 5'UTR,一个738 bp的开放阅读框(ORF)和185 bp 3'UTR,共编码245个氨基酸。序列和系统进化树分析表明,该基因与其他植物的MADS-box基因具有很高的同源性,属于AP1/FUL-like亚家族,命名为DtpsMADS1,GeneBank登录号为JQ065097。实时荧光定量PCR检测结果显示:DtpsMADS1具有明显的组织表达特异性;在根和叶中,DtpsMADS1在花前期和花后期表达量较高;苗期和盛花期表达量较低;DtpsMADS1在花葶中的表达趋势与根和叶相似;而在花器官中,DtpsMADS1只有痕量表达。由此推断,DtpsMADS1可能参与开花进程调控,而不参与花器官的形态建成。; 袁秀云田云芳蒋素华王默霏马杰崔波; 关键词：RACE 系统树

萼脊兰AP1-like基因的克隆与表达分析被引量：11: 2013年; 采用RT-PCR和RACE技术从萼脊兰(Sedirea japonica)花瓣中分离到1个MADS-box A类基因,该基因命名为AP1-like(登录号JQ776636)。AP1-like基因的cDNA全长1 221bp,包含1个753bp的开放阅读框(ORF),共编码250个氨基酸。蛋白序列比对和进化树分析表明,AP1-like蛋白与蝴蝶兰ORAP11蛋白的一致性为96%,进化距离最近。二级结构分析表明,该蛋白分子属于亲水性蛋白,其中有53.60%的α螺旋、7.20%的延伸链、39.20%的不规则折叠。实时荧光定量PCR分析表明,萼脊兰AP1-like基因在盛花期的根和叶中表达量最高;在生殖器官中花蕾期花葶的表达量最高,其次是花蕾;盛花期中花葶的表达量最高,子房和合蕊柱的表达量次之,萼片、花瓣、唇瓣均有微量表达。研究认为,AP1-like可能在调控植物由营养生长向生殖生长过渡阶段及子房的建成中起重要作用。; 崔波蒋素华刘佳田云芳袁秀云马杰; 关键词：MADS-BOX基因实时荧光定量PCR

蕙兰GAPDH基因的全长克隆及生物信息学分析被引量：2: 2013年; 根据GenBank中已登陆的GAPDH基因的同源核苷酸保守序列,设计简并引物,采用RT-PCR的方法得到5个875 bp的片段,分别命名为CfGAPDH1-CfGAPDH5,GenBank登录号分别为JN177722-JN177726。同时结合RACE方法得到蕙兰GAPDH基因cDNA全长,命名为CfGAPDH(JX560732),该序列cDNA全长为1 496 bp,具有完整的开放阅读框(ORF,173-1 195 bp),编码340个氨基酸,该基因编码的氨基酸序列与其他植物的GAPDH蛋白有较高的同源性(80%以上)。系统进化分析表明蕙兰CfGAPDH基因核苷酸序列与墨兰GAPDH1、GAPDH2和春兰GAPDH1的同源性最高(99%),所编码的氨基酸序列与墨兰GAPDH2的同源性达100%。生物信息学分析推测,该基因编码的蛋白残基主要有两个卷曲螺旋区域,分别位于25和250位点附近,属于不稳定蛋白,亲水性较强,初步推断CfGAPDH是一个胞质型GAPDH,二级结构中的β转角所占比例较高(41.2%),三级结构与春兰和小麦非常相似。; 田云芳蒋素华袁秀云崔波; 关键词：蕙兰 GAPDH RACE 生物信息学

萼脊兰TUB基因片段的克隆及序列分析被引量：1: 2015年; 为了给筛选萼脊兰内参基因和研究 TUB 基因的生理功能提供研究基础，对萼脊兰 TUB 基因片段进行克隆与序列分析。采用 CTAB 法提取萼脊兰盛花期花瓣总 RNA，并运用 RT-PCR 方法克隆萼脊兰 TUB 基因序列，长度为1055 bp，编码351个氨基酸残基，氨基酸序列中存在微管蛋白的保守区域 GGGTGSG。序列分析结果表明：与其他已登录物种的 TUB 基因相比，其核苷酸序列的同源性达75％～96％，与朵丽蝶兰（JN185665．1）同源性高达96％，氨基酸序列的同源性也在96％以上，且与单子叶植物的同源序列表现出较高的相似性。在 GenBank 注册，登录号为KP686397。; 蒋素华梁芳王洁琼李艳辉王默霏崔波; 关键词：TUB 基因克隆

1个兰花MADA-box基因的克隆与表达分析被引量：5: 2013年; 为阐释兰科植物成花的分子调控机制,根据MADS-box基因保守序列设计简并引物,用RACE方法从蝴蝶兰花葶中克隆到1个MADS-box家族基因.序列和系统进化树分析表明,该基因与其他植物的MADS-box基因具有很高的同源性,属于AP1/FUL-like亚家族,命名为DtpsMADS2,GeneBank登录号为JQ065098.实时荧光定量PCR检测结果显示,DtpsMADS2在营养器官和生殖器官均有表达,表达量以盛花期花葶中最高;在根中,DtpsMADS2随着苗期、抽葶期和盛花期表达量逐渐降低,而花后期又升高;在叶中,DtpsMADS2在苗期表达量较高,随后在抽葶期下降,又随着盛花期和花后期表达量升高,DtpsMADS2在花葶中以抽葶期表达量最低,盛花期大幅度升高,花后期有所下降;而在花器官各轮结构中,DtpsMADS2只有少量表达.由此推断,DtpsMADS2的表达与开花进程呈正相关,主要参与开花调控,而对花器官的发育没有明显的决定和调控作用.; 袁秀云蒋素华田云芳崔波; 关键词：兰花系统树

萼脊兰总RNA提取方法的比较研究被引量：2: 2015年; 采用Trizol法、CTAB法、RNA prep Pure Plant Kit方法分别从萼脊兰的根、叶、花葶、花萼、花瓣、唇瓣、柱头中提取总RNA,比较3种总RNA提取方法的优劣,分析所提取萼脊兰不同组织总RNA质量高低。结果显示:CTAB法提取的RNA得率最高,完整性好,凝胶电泳泳道无杂质,条带单一,可以满足荧光定量PCR的试验需要。; 蒋素华李艳辉王洁琼梁芳王默霏崔波; 关键词：总RNA提取方法

蝴蝶兰MADS-Box基因克隆及植物表达载体的构建被引量：1: 2014年; 【目的】克隆蝴蝶兰MADS-Box基因并构建其正义和反义植物表达载体,为其功能研究奠定基础。【方法】以蝴蝶兰杂交品种(Phalaenopsis hybrid cv.Jiuhbao Red Rose)为试验材料,采用RT-PCR和RACE技术从花葶中克隆MADS-Box基因,并构建正义和反义植物表达载体。【结果】克隆获得一个蝴蝶兰MADS-Box基因,命名为DtpsMADS1(GeneBank登录号JQ065097)。该基因cDNA全长960 bp,包含37 bp的5'非编码区、185 bp的3'非编码区和一个738 bp的编码区;该基因编码245个氨基酸。生物信息学分析结果表明,该基因编码的蛋白质为碱性亲水性蛋白,具有62.45%的α-螺旋,8.16%的延伸链和29.39%的不规则折叠。序列比对和系统进化分析结果表明,DtpsMADS1与蝴蝶兰ORAP13的亲缘关系最近,同源性达99.0%,与石斛和蕙兰的同源性分别为83.0%和82.0%,属于MADS家族A类亚家族。将DtpsMADS1基因连接到植物表达载体pBI121上,构建获得正、反义植物表达载体pBI121-DtpsMADS1-S和pBI121-DtpsMADS1-A。【结论】成功克隆的蝴蝶兰DtpsMADS1基因属于MADS家族A类亚家族,具有明显的保守性和特异性,可为蝴蝶兰DtpsMADS1基因功能的鉴定及蝴蝶兰的遗传改良奠定基础。; 袁秀云蒋素华王默霏崔波; 关键词：克隆表达

三种甘薯病毒多重RT-PCR检测技术的建立被引量：10: 2017年; 本文根据GenBank中甘薯G病毒(SPVG)、甘薯卷叶病毒(SPLCV)和甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)外壳蛋白(CP)基因序列设计特异引物,对多重RT-PCR退火温度、延伸温度、模板浓度、引物浓度进行改良优化,建立能同时检测3种甘薯病毒的多重RT-PCR方法。该方法能同时扩增出SPVG、SPLCV和SPFMV特异片段,其大小分别是800、276和570bp。测序结果表明,扩增出的3种病毒序列与相应参考序列相似性达到98%以上。灵敏度分析结果表明,多重RT-PCR方法能够检测cDNA的量为0.1ng。应用建立的多重RT-PCR检测方法对田间样品进行检测,结果显示该方法可以特异、快速、灵敏地同时检测3种甘薯病毒。这些研究结果可为甘薯病毒检测提供参考。; 蒋素华程喜梅宋彩霞许申平梁芳崔波; 关键词：甘薯病毒多重RT-PCR

文心兰开花相关OnAP1-like基因的克隆及表达分析被引量：7: 2014年; 以南茜文心兰(Gower Ramsey)盛花期花葶提取的总RNA为模板,通过RT-PCR与RACE扩增,获得一个958 bp的AP1(APETALA1)-like基因的cDNA全长序列,其基因编码区690 bp,共编码氨基酸229个,命名为OnAP1-like(登录号:KC426946)。蛋白质二级结构分析表明,该蛋白质48.91%为α螺旋,10.92%为β折叠,40.17%为无规则卷曲,为亲水性蛋白质。蛋白序列比对和进化树分析表明,OnAP1-like蛋白与蕙兰AP1-like蛋白一致性最高,进化距离最近。利用RT-qPCR对从文心兰不同时期不同器官中的OnAP1-like基因表达量进行分析,结果表明,同一器官不同发育时期比较,在叶中,花蕾期的表达量最高;在根中,随发育时间推移,表达量逐渐升高,至花后期达到最高;在花葶中的表达量的趋势与根相同。同一时期不同器官比较,抽葶前,根中表达量高于叶片;花蕾期,花瓣中的表达量最高;盛花期和花后期,花葶中的表达量最高。推测该基因在花的发育及形成中发挥作用。; 崔波武振江刘佳张国付袁秀云叶永忠; 关键词：文心兰 RT-QPCR 克隆

文心兰一个PEBP家族基因的克隆、表达及载体构建被引量：3: 2014年; 采用RT-PCR方法从文心兰(Oncidium‘Sweet Sugar’)中克隆到一个PEBP家族基因,该基因命名为OnFT-like(登录号AHB86975)。该基因编码区531 bp,编码177个氨基酸。蛋白序列比对和进化树分析表明,On FT-like蛋白与蝴蝶兰FT蛋白的相似性为99%,进化距离最近。qRT-PCR分析表明,On FT-like在根和花器官没有检测到表达;在苗期和花蕾期的叶片和花葶中有表达,其中在花蕾期花葶中的表达量最高;在盛花期和花后期的叶片和花葶中不表达。分析认为,On FT-like基因可能在花期转变中起调控作用。将On FT-like基因连接到p CAMBIA1301载体上,成功构建了正义和反义植物表达载体,为下一步进行文心兰On FT-like基因功能鉴定及遗传改良奠定基础。; 袁秀云梁芳蒋素华王默霏刘佳崔波; 关键词：文心兰实时荧光定量PCR 基因表达

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