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福建省医学创新课题(2009CX-9)
作品数:
1
被引量:3
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相关作者:
王炜
陈晓
杨滨
商红艳
刘灿
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福建医科大学
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2013
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HBVDNA定量与基因分型双重分子信标实时PCR方法的建立及初步应用
被引量:3
2013年
目的研究建立同时进行HBVDNA定量与基因分型检测的双重分子信标实时PCR法(以下简称“定量与分型PCR法”),并探讨其应用价值。方法构建B、c基因型重组质粒作为标准品,通过设计B、c基因型特异性引物和分子信标(B、c基因型分子信标5’端分别标记FAN和Hex荧光基团),建立在1个反应体系中同时定量与分型PER法。然后,用10倍梯度稀释的B、c基因型标准品(10。~1011 kIU/L)评价其检测线性范围和灵敏度;用丙型肝炎病毒感染者、单纯疱疹病毒感染者、人类乳头瘤病毒感染者、健康志愿者血清各5份评价其检测特异性;用高、中、低3份不同浓度的B、c基因型质粒标准品(10、106、104 kIU/L)进行同批次和不同批次各10次重复检测,分别计算批内及批间ct值的变异系数(CV)评价其检测重复性。然后,以湖南圣湘生物科技有限公司HBV核酸定量测定试剂盒为HBVDNA定量参照方法,申友公司HBV基因分型试剂盒为HBV基因分型参照方法,同定量与分型PCR法平行检测132例HBV感染者血清标本,评价自建定量和分型PCR法的准确性。最后,将132例HBV感染者分为无症状携带组(21例)、慢性乙型肝炎组(77例)、肝硬化组(25例)、肝癌组(9例),分析评价基因型、疾病进展的不同阶段与DNA载量间的相关性。结果用自建定量与分型PCR法检测B、c基因型的灵敏度均为103 kIU/L;线性范围均为103一1011 kIU/L;检测B基因型批内CV为1.51%~1.80%,批间CV为2.11%~3.03%,检测C基因型批内CV为1.79%~1.95%,批问CV为2.53%~2.91%;对其他病毒感染者和健康志愿者血清检测结果均为阴性。定量与分型PCR法检On.0132例HBV感染者的基因分型结果与HBV测序分型试剂盒总符合率为90.9%(120/132,Kappa=0.832,P〈0.05);其DNA定量结果[5.07(3.89~6.33)lgkIU/L]与HBV
王炜
陈晓
江凌
刘灿
商红艳
欧启水
杨滨
关键词:
肝炎病毒
乙型
病毒
聚合酶链反应
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