国家高技术研究发展计划(2006AA02A247)
- 作品数：23 被引量：68H指数：4
- 相关作者：张莹洪涛何金生程立均贾茜更多>>
- 相关机构：北京交通大学中国疾病预防控制中心华北制药集团新药研究开发有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 重组单抗药物的肽图分析被引量：4
- 2008年
- 建立了重组单抗药物的肽图分析方法。在变性条件下向抗体溶液加入还原剂,打开抗体内部所有交联的二硫键,再加入烷基化试剂封闭所有的自由巯基,使抗体分子在溶液中以游离伸展肽链的形式存在。加入胰蛋白酶,将充分伸展的肽链酶解成小的肽段。用反相高效液相色谱层析分析肽图谱。对连续3批中试产品及理化测定对照品进行肽图分析,各样品均能酶解完全,批间肽图谱一致。该方法实用有效,适于进行重组单抗等结构复杂的大分子蛋白药物的肽图检查分析。
- 魏敬双程立均刘进怀贾茜
- 关键词：胰蛋白酶反相HPLC
- 重组人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的质控方法及质量标准的建立被引量：1
- 2010年
- 目的建立重组人源抗狂犬病病毒单克隆抗体(rhRMcAb)的质控方法和质量标准。方法采用小鼠中和试验(MNT)和快速荧光灶抑制试验(RFFIT)分别测定6批rhRMcAb样品的中和活性;还原、非还原SDS-PAGE检测rhRMcAb样品的纯度;还原烷基化胰蛋白酶酶切和反相高效液相色谱法分析rhRMcAb的肽图;焦谷氨酸肽酶去除N-端焦谷氨酸封闭后,氨基酸序列分析仪测定rhRMcAb的N-端氨基酸序列;表面等离子共振法(Surface plasmon resonance,SPR)测定rhRMcAb与狂犬病病毒糖蛋白的亲和常数;按《中国药典》三部(2005版)要求检测rhRMcAb的各项其他指标,并建立其质量标准。结果采用MNT和RFFIT2种方法检测6批rhRMcAb的中和活性,批间活性基本一致;3批rhRMcAb原液的还原SDS-PAGE纯度大于99.0%,非还原SDS-PAGE除抗体主带外,在高、低相对分子质量处分别存在一些次带;3批原液样品的肽图图谱与理化测定对照品一致;N-端氨基酸序列与理论序列一致;结合狂犬病病毒糖蛋白抗原的亲和常数为1.86×108/M;其他各项指标均符合《中国药典》三部(2005版)要求;建立的质量标准中,中和活性应不低于500IU/mg,SDS-PAGE及HPLC纯度应不低于98.0%。结论已建立了rhRMcAb的质控方法和质量标准,可用于rhRMcAb产品的检定。
- 魏敬双程立均赵伟周兴军刘进怀贾茜
- 关键词：狂犬病病毒
- 老年性痴呆抗体药物研究进展被引量：2
- 2008年
- 老年性痴呆(Alzhimer’s disease,AD)是一种渐进性神经退化性疾病,其主要表现为记忆功能衰减及识别能力障碍,同时伴有各种神经症状和行为障碍,具有非常高的发病率,目前还没有特异性治疗药物。随着世界人口老龄化,AD发病率逐年增高,成为本世纪威胁人类健康最严重的疾病之一。近年来AD的发病机理和药物研究方面都有突破性进展,尤其是制备针对β淀粉样蛋白(amyloid beta protein,Aβ)特异性抗体药物成为AD治疗极具价值的途径。主要对以Aβ为主的AD发病机理和针对Aβ的抗体药物的治疗机制、研究现状及进展进行综述,为进一步研发AD治疗药物提供参考。
- 包福祥何金生曹贵方王鑫张莹洪涛
- 关键词：老年性痴呆发病机理AΒ蛋白人源性抗体
- Aβ寡聚体高亲和性单克隆抗体制备、初步鉴定及性质研究
- β淀粉样蛋白(Amyloidβ-peptide,Aβ)是阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)发病机制的核心,而Aβ寡聚体在AD早期病理过程中起重要作用。本研究以体外聚合的Aβ寡聚体为抗原免疫BAL...
- 王鑫张莹包福祥李亦清王小波何金生洪涛
- 关键词：Β淀粉样蛋白阿尔茨海默病AΒ寡聚体单克隆抗体
- 文献传递
- 阿尔茨海默病的疫苗研究进展被引量：4
- 2009年
- 王鑫张莹何金生包福祥洪涛
- 关键词：阿尔茨海默病Β-淀粉样蛋白疫苗
- 传染性与非传染性神经系统淀粉样变的比较研究
- 传染性与非传染性神经系统淀粉样变存在共性与特性,近年,二者的比较研究逐渐引起广泛关注。前者多见于朊病毒病(prion diseases),后者常见于包括阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,AD)、帕金森...
- 洪涛
- 文献传递
- β淀粉样肽单克隆抗体可变区基因的5′RACE扩增及序列分析被引量：1
- 2010年
- 目的:克隆并分析抗β淀粉样肽单克隆抗体轻链与重链可变区基因。方法:从分泌抗β淀粉样肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株A8中提取总RNA,根据恒定区序列设计基因特异性引物,通过5′RACE法扩增抗体的轻链和重链可变区基因,测定并分析可变区基因序列,并克隆入pMD18-T载体。结果:重链可变区基因序列全长450bp,编码150个氨基酸残基;轻链可变区基因序列全长429bp,编码143个氨基酸残基。在GeneBank中对氨基酸序列进行比对分析,二者均符合小鼠IgG可变区基因的特征。根据Kabat法则对A8抗体轻链和重链可变区氨基酸序列基因进行分析并确定了3个抗原互补决定区(CDR)、4个框架区(FR)和信号肽。结论:通过5′RACE法得到了抗β淀粉样肽单克隆抗体轻链与重链可变区基因,为进一步研究抗体三维结构,以及对该抗体进行人源化改造奠定了基础。
- 王鑫张莹何金生
- 关键词：Β淀粉样肽单克隆抗体
- 重组单抗药物的非还原电泳纯度分析被引量：4
- 2010年
- 目的对重组单抗药物的非还原电泳纯度进行分析,排除样品制备过程中形成的一些假象。方法结合重组单抗的分子结构特征,改变常规SDS-PAGE条件,将抗体样品在不同的缓冲液及电泳条件下进行比较。结果抗体在非还原SDS-PAGE纯度检测中出现的次带,可通过在供试品缓冲液中加入烷基化试剂封闭自由巯基而几乎全部消除;通过降低电泳过程的环境温度,可有效降低主带上方高相对分子质量带的出现。结论单抗药物中由于含有多对二硫键引起的一些因电泳样品制备而形成的假象带,可以通过试验方法的修正而去除。
- 程立均魏敬双张世雄李耿贾茜
- 关键词：纯度二硫键
- 阿尔茨海默病体液生物学标记物研究进展被引量：5
- 2009年
- 由于阿尔茨海默病患者的增多及其危害性,建立能够用于早期诊断的方法受到人们的高度关注.脑脊液和血液中某些生物学标记物与AD的典型病理变化老年斑(senile plaques,SP)和神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles,NTFs)相关,在临床诊断和治疗方面显示了广阔的前景,但截止目前尚缺乏灵敏、特异的生物学标记物及分析方法用以诊断和监测疾病进程.本文详细综述了近年来体液中阿尔茨海默病生物学标记物及其分析方法的研究进展,鉴于其病理的复杂性,许多问题仍有待深入研究.
- 郑妍鹏何金生洪涛
- 关键词：阿尔茨海默病生物学标记物脑脊液血浆
- 嵌合内含子对抗bFGF抗体基因在293T细胞中表达的影响被引量：4
- 2010年
- 目的:构建含嵌合内含子和抗bFGF抗体基因的真核表达载体并在293T细胞中表达,探讨嵌合内含子对抗体表达的影响。方法:设计引物分别从载体pCl-neo和pComb3-Fab25中扩增出内含子和抗体Fd段、κ链基因序列,按不同组合构建到含人免疫球蛋白IgG1恒定区Fc段基因的表达载体pIgG中。重组质粒经脂质体PEI转染293T细胞,荧光显微镜观察质粒转染情况,采用夹心ELISA和Western blot检测细胞上清中抗体的表达。结果:DNA测序和酶切分析表明,内含子和抗体基因成功插入pIgG,获得了重组质粒pIgG-Fd-κ、pIgG-Fd-intron-κ、pIgG-Fd-κ-intron和pIgG-Fd-intron-κ-intron。倒置荧光显微镜下可观察EGFP大量表达,Western blot分析上清中有抗体的表达,夹心ELISA检测pIgG-Fd-κ、pIgG-Fd-intron-κ、pIgG-Fd-κ-intron和pIgG-Fd-intron-κ-intron抗体表达量分别为1.21mg/L、0.468mg/L、7.39mg/L、0.601mg/L。结论:成功构建了含嵌合内含子和抗体基因的真核表达载体并在293T细胞中得到表达。嵌合内含子插入κ链基因5′端可提高抗体的表达,插入Fd段5′端则抑制抗体的表达。
- 龚义平陶俊王宏宋其芳唐勇向军俭邓宁
- 关键词：抗体基因BFGF293T细胞
