上海市自然科学基金(08ZR1405500)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 癌基因p28^(GANK)突变体的构建及其对p53的调控
- 2010年
- 目的构建癌基因p28GANK缺失不同ankyrin序列的突变体,进一步研究p28GANK的功能及在肝癌发生发展中的作用。方法利用QuikChangSite-DirectedMutagenesisKit构建p28GANK5个ankyrin缺失突变体并检测各个突变体对p53的影响。结果构建出分别缺失第1个ankyrin(39～71aa)、第2个ankyrin(72～104aa)、第3个ankyrin(105～137aa)、第4个ankyrin(138～170aa)和第5个ankyrin(171～203aa)的突变体,琼脂糖凝胶电泳及蛋白免疫印迹法验证正确。野生型p28GANK可促进p53降解,其他突变体对p53的表达无明显影响。结论成功构建了p28GANK的5个突变体,证实p28GANK对p53的调控需要全部的ankyrin序列,为ankyrin的研究和p28GANK对肝癌的调控作用研究奠定了基础。
- 任一彬付静陈瑶王红阳
- 关键词：突变体P53基因
- 核转录因子κB抑制子α、β和ε共同稳定下调的HepG2细胞系的建立
- 2009年
- 目的:利用RNA干扰的方法,构建针对人核转录因子κB抑制子(IκB)α、β和ε的共同干扰载体,转染人肝细胞癌HepG2细胞,建立稳定、共同下调IκBα、IκBβ和IκBε的HepG2细胞系,为后续研究奠定基础。方法:构建3个针对人IκBα基因的干扰载体pcDNATM6.2-miR-IκBα(1,2,3),转染HepG2细胞,在mRNA和蛋白水平检测3个干扰载体对IκBα表达的抑制作用,筛选出抑制效果最好的干扰载体。以同样的方法构建并筛选出分别针对人IκBβ和IκBε基因的最佳干扰载体,通过酶切连接反应将分别针对IκBα、IκBβ和IκBε基因的3个最佳干扰片段串联连入pcDNATM6.2-miR干扰载体中,构建可同时干扰IκBα、IκBβ和IκBε的共同干扰载体pcDNATM6.2-miR-IκBα-IκBβ-IκBε。将共同干扰载体转染HepG2细胞,通过G418筛选,建立IκBα、IκBβ和IκBε的表达共同稳定下调的HepG2细胞系,并以蛋白质印迹法检测IκBα、IκBβ和IκBε的蛋白表达。结果:成功构建共同干扰载体pcDNATM6.2-miR-IκBα-IκBβ-IκBε;Western印迹结果显示,与正常及对照载体pcDNATM6.2-miR-Neg转染的HepG2细胞相比,在稳定转染pcDNATM6.2-miR-IκBα-IκBβ-IκBε的HepG2细胞系中,IκBα、IκBβ和IκBε的表达均稳定下调。结论:成功建立了IκBα、IκBβ和IκBε共同稳定下调的人肝细胞癌HepG2细胞系,为后续研究奠定了基础。
- 付静陈瑶任一彬钱尤雯王红阳
- 关键词：RNA干扰HEPG2细胞
