深圳市科技计划项目(200802150)
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 相关作者：彭运生孙顺昌贺敬波林志坚陈卫东更多>>
- 相关机构：深圳市宝安区人民医院北京大学深圳医院更多>>
- 发文基金：深圳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肌母细胞MSTN基因沉默后的细胞形态学观察被引量：2
- 2009年
- 目的观察肌母细胞MSTN基因沉默后的细胞形态及超微结构,探讨沉默MSTN基因治疗肌肉萎缩的可行性。方法构建可沉默MSTN基因的小干扰RNA表达载体,通过转染导入肌母细胞并进行培养,计数培养肌母细胞,并观察肌母细胞的形态及超微结构。结果肌母细胞MSTN基因沉默后细胞数增加,增殖能力增强,细胞形态无明显改变,透射和扫描电镜观察显示MSTN基因沉默后肌母细胞表面出现大量微绒毛。结论MSTN基因沉默后肌母细胞的增殖能力增强,细胞形态正常,因此沉默MSTN基因可能成为治疗肌肉萎缩的一种新途径。
- 彭运生孙顺昌贺敬波
- 关键词：MSTN基因基因沉默细胞形态学
- MSTN基因siRNA表达载体的构建和鉴定被引量：4
- 2009年
- 目的构建能沉默MSTN基因的小干扰RNA表达载体，并鉴定它沉默肌母细胞MSTN基因的效率。方法合成3对发夹小干扰RNA模板寡核苷酸链，退火后插入pSileneer载体．构建成可沉默MSTN基因的小干扰RNA表达载体，通过酶切和测序鉴定构建的小干扰RNA表达载体。将小干扰RNA表达载体转染肌母细胞，用实时荧光定量RT—PCR和Western印迹检测转染的肌母细胞myostatin的表达水平。结果酶切和测序证实3个小干扰RNA表达载体构建正确，实时荧光定量RT—PCR显示所构建的3个小干扰RNA表达载体对肌母细胞MSTN基因的干扰率分别为43．6％、47．7％和81．6％，它们的干扰效果被Western印迹所证实。结论干扰率为81．6％的小干扰RNA表达载体为构建成功的小干扰RNA表达载体，。岜可用作MSTN基因的功能研究和肌病治疗的分子研究。
- 孙顺昌林志坚陈卫东贺敬波彭运生
- 关键词：MSTN基因RNA干扰
- siRNA阻断鼠成肌细胞myostatin表达对细胞增殖及分化能力的影响被引量：7
- 2011年
- 目的研究myostatin表达被阻断后鼠成肌细胞的增殖及分化能力。方法构建可阻断myostatin表达的siRNA表达载体,并转染鼠成肌细胞,用实时荧光定量RT-PCR和Western印迹鉴定myostatin表达。培养myostatin表达被阻断的成肌细胞,计数不同时间的细胞数和测定细胞表达的肌酸激酶。使用诱导分化培养液培养myostatin表达被阻断的成肌细胞,观察其分化成肌管的能力。结果 siRNA表达载体对成肌细胞myostatin表达的干扰率为81.6%,其干扰效果也被Western印迹所证实。Myostatin表达被阻断的成肌细胞数目增加(P<0.05),细胞内肌酸激酶活力升高(P<0.05)。正常成肌细胞培养7 d可分化成肌管,myostatin表达被阻断后需10 d才分化成肌管。结论 siRNA表达载体阻断成肌细胞的myostatin表达后细胞的增殖能力增强,分化被延迟,或许可成为治疗肌肉萎缩的一种新途径。
- 孙顺昌彭运生贺敬波林志坚
- 关键词：成肌细胞MYOSTATINRNA干扰分化
