广东省自然科学基金(2011010000462)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 相关机构：广东省人民医院广东省医学科学院南方医科大学更多>>
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- LY294002对人晶状体上皮细胞蛋白激酶B活化的影响被引量：1
- 2013年
- 背景蛋白激酶B（Akt）与许多细胞信号转导通路密切相关，从而参与多种细胞功能活动的调控，包括细胞的增生、迁移和代谢等，其中磷脂酰肌醇3-激酶（P13K）可催化Akt活性并启动各种相关的细胞信号通路。P13K抑制剂能够抑制Akt活性，但是否影响后发性白内障发生过程中残留的晶状体上皮细胞（LECs）的生物学行为尚不清楚。目的观察P13K抑制剂LY294002对人LECs中Akt活化的影响。方法对人LECs系HLEC-B3细胞进行常规培养和传代，然后接种于96孔板中，培养24h后在培养板中加入LY294002，终浓度分别为0、10、20、30、40、50、60、70、80μmol／L，继续培养24h后采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测各组细胞的增生抑制率。在同一批接种于6孔板内无菌盖玻片上的传代细胞中加入10μg／L转化生长因子-β2（TGF—β2）为诱导组，用20μmol／LLY294002预培养1h后再加入10Ixg／LTGF—β2进行共培养为TGF—B，与LY294005共培养组，以未加入TGF，p：和LY294002的细胞作为对照组，应用激光扫描共焦显微镜观察各组细胞中磷酸化Akt（p-Akt）的荧光表达情况，并用Westernblot法检测各组细胞中p-Akt表达量的差异。结果CCK-8法检测结果显示，随着LY294002浓度的增加，HLEC—B3的吸光度（A）值逐渐减小，即LY294002对HLEC—B3细胞增生的抑制作用随浓度的增加而逐渐增强，不同浓度LY294002组间HLEC—B3的A值比较差异有统计学意义（F分组=9．72，P=0．00）；随着检测时间点的延长，HLEC—B3的4值逐渐增大，不同检测时间点A值比较差异有统计学意义（F时间=1737．54，P=0．00）。激光扫描共焦显微镜观察显示，对照组细胞仅有微量的p-Akt红色荧光，诱导组p-Akt表达明显增多，并向细胞膜聚集，细胞轮廓清晰，而TGF—β2与LY294005共培养组细胞中p-Akt表达的红色荧光明显减弱，细胞形态不清。Westernblot法检测结果�
- 郭瑞郭海科孟倩丽
- 关键词：LY294002转化生长因子Β2晶状体上皮细胞
- 过氧化氢处理晶状体上皮细胞中黏着斑激酶的表达
- 2013年
- 背景 年龄相关性白内障的发生、发展与长期氧化应激导致的细胞凋亡有关.研究表明,过氧化氢（H2O2）处理体外培养的细胞后可激活细胞内的黏着斑激酶（FAK）信号通路,从而影响细胞的增生与凋亡.研究FAK对氧化应激晶状体上皮细胞（LECs）的影响在年龄相关性白内障的预防方面有重要意义. 目的 研究H2O2对LECs中FAK表达的影响,探讨FAK对细胞的调控功能. 方法 用含质量分数10％胎牛血清的低糖DMEM培养液在体积分数5％CO2培养箱中常规培养人LECs株HLECs-B3,不含H2O2的为阴性对照组,在含不同浓度（30、50、70、100、300、500、700、1000 μmol/L）H2O2的培养基作用24 h,采用CCK-8法检测各组细胞的存活率；对细胞进行FITC免疫荧光染色,荧光显微镜下观察各组细胞的形态变化及细胞内FAK的表达分布；观察Hoeehst33258染色的细胞核,评估各组细胞的凋亡情况；采用Western blot法技术半定量检测各组细胞内FAK蛋白的表达量及其磷酸化水平. 结果 对照组,30、50、70、100、300、500、700、1000 μmol/L H2O2组HLECs-B3细胞的存活率分别为（1.00±0.03）％、（1.24±0.03）％、（1.36±0.24）％、（0.93±0.02）％、（1.75±0.19）％、（1.37±0.18）％、（0.64±0.01）％、（0.59±0.11）％、（0.14±0.05）％,各组间细胞存活率的差异有统计学意义（F=95.30,P=0.oo）,其中300 μmol/L以下的各H2O2组细胞存活率均明显高于对照组,而＞500 μmol/L的各H2O2组细胞存活率均明显低于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.不同浓度H2O2刺激24 h后,各组HLECs-B3细胞形态由多边形变为长梭形,并伸出伪足,FAK在细胞中呈绿色荧光,其分布随H2O2浓度的变化而发生改变.1000 μmol/L H2O2作用细胞24 h,可见细胞碎片,细胞发生凋亡.Western blot法检测发现,不同浓度H2O2处理HLECs-B3 24 h后,细胞中FAK的表达量明显不同,总体差异有统计学意义（F=28.08,P=0.00）,其中�
- 黄煜孟倩丽郭海科
- 关键词：氧化应激过氧化氢晶状体上皮细胞黏着斑激酶
