国家自然科学基金(81071490)
- 作品数：9 被引量：17H指数：3
- 相关作者：张健李平周园东万睿王信更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院重庆医科大学重庆市第九人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- 基于无线传感器网络的咳嗽音检测系统研究被引量：3
- 2011年
- 咳嗽音是众多疾病常见的重要症状之一,包含极其重要的临床信息。针对目前多参数无线家庭监护系统忽视此重要生理参数的现状,设计了一种基于无线传感器网络的咳嗽音检测系统,选用SPCE061A单片机和CC2430无线收发模块共同构建了关键节点的硬件平台和软件平台,并运用短时能量和过零率的双门限算法检测信号。测试结果表明:该系统可以实现咳嗽音信号的实时采集和有效传输,并成功定位咳嗽音,准确率达到90%以上。
- 汤丽平张健任羽
- 关键词：无线传感器网络过零率
- 抗菌肽PR-39重组腺病毒表达质粒的构建及鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的构建抗菌肽PR-39(Proline-arginine rich 39-amino acid peptide,PR-39)重组腺病毒表达质粒。方法从含抗菌肽PR-39核心编码区的质粒中扩增PR-39基因,亚克隆至穿梭质粒pAdTrace-TO4中,构建重组穿梭质粒,经PmeⅠ酶切线性化后,转化感受态AdEasier细胞,构建重组腺病毒质粒,转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒,扩增后进行病毒滴度检测。将重组腺病毒感染鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2,通过荧光显微镜观察红色荧光蛋白(Red fluorescent protein,RFP)的表达,RT-PCR法检测PR-39基因的转录水平。结果重组腺病毒穿梭质粒pAd-Trace-TO4-PR-39经KpnⅠ和HindⅢ双酶切及测序鉴定证明构建正确;重组腺病毒质粒pAdPR-39经PacⅠ酶切鉴定,证明目的基因已整合到腺病毒基因组中;第4代重组腺病毒AdPR-39的病毒滴度为1010IU/ml;感染重组腺病毒AdPR-39的C3H10T1/2细胞可表达RFP;PR-39基因在C3H10T1/2细胞内成功转录。结论已成功构建携带RFP的PR-39重组腺病毒表达质粒,在鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2中可高效表达。
- 刘涛姚海刘铭李平左国伟王信张健
- 关键词：抗菌肽腺病毒基因表达红色荧光蛋白
- 瘦素通过抑制PPARγ的表达抑制RAW264.7巨噬细胞向破骨细胞分化被引量：1
- 2015年
- 目的探讨瘦素对可溶性核因子κB配体的受体活化因子(sRANKL)诱导RAW264.7巨噬细胞向破骨细胞分化的影响及其机制。方法抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测瘦素对sRANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化的形态学影响;实时荧光定量PCR检测TRAP及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的mRNA表达;Western blot法检测TRAP及PPARγ的蛋白表达。结果瘦素和sRANKL联合处理组与单独sRANKL组相比,TRAP染色破骨细胞数目明显减少;TRAP的mRNA和蛋白表达量明显降低;PPARγ的mRNA和蛋白表达量明显降低,且与瘦素浓度呈梯度相关。结论瘦素可能通过抑制PPARγ的表达来抑制RAW264.7细胞向破骨细胞分化。
- 王正宇朱云杨小中杨刚朱卫文马涛张健
- 关键词：瘦素抗酒石酸酸性磷酸酶过氧化物酶体增殖物激活受体-ΓRAW264.7细胞破骨细胞分化
- 基于超高效液相色谱-串联质谱的组织代谢组学分析在股骨头坏死中的应用被引量：3
- 2016年
- 目的应用代谢组学分析方法探索股骨头坏死的组织代谢特征并寻找其潜在的生物标志物。方法分别收集23例（25髋）股骨头坏死和18例股骨颈骨折患者的股骨头组织标本，行病理学检查明确诊断。萃取骨组织标本代谢物，采用超高效液相色谱一质谱／质谱串联仪检测，对检测结果进行预处理，建立主成分分析（principalcomponentanalysis，PCA）、偏最小二乘法判别分析（partialleast．squaresdiscriminantanalysis，PLS．DA）及正交偏最小二乘法判别分析（orthogo．halpartialleastsquaresdiscriminantanalysis，OPLS．DA）模型。根据PLS．DA模型和多个独立样本的Kruskal．Wallis日检验筛选差异变量，依据一级和二级质谱推定其对应的代谢物。筛选两组峰强度变化最明显的代谢物作为潜在的生物标志物，通过二元Logistic回归进行受试者工作曲线receiveroperatingcharacteristicCHIVe，ROC）分析，评价其诊断意义。结果股骨头坏死和股骨颈骨折患者的股骨头骨组织代谢物表达模式在PCA、PLS—DA、OPLS．DA模型中均能明显区分。股骨头坏死组表达高于股骨颈骨折组的代谢物有D．精氨酸、L-脯氨酸、L一谷氨酰胺、肌苷、尿嘧啶、尿苷、LysoPC（20：4（5Z，8Z，11Z，14Z））、LysoPC（16：0）、PC（20：1（11z）／18：3（6z，9Z，12Z））、PE（P．16：0e／0：0）；低于股骨颈骨折组的有柑橘叶黄素、B--隐黄质。根据峰强度改变倍数、变量权重型投影值筛选出改变最为明显的三种物质是D-精氨酸、L-脯氨酸、L．谷氨酰胺，ROC曲线下面积分别是0．873、0．712、0．862，三种代谢物联合ROC曲线下面积为0．946。结论通过股骨头坏死和股骨颈骨折的骨组织代谢物PCA、PLS—DA、OPLS．DA模型可筛选出12种代谢物，其中D-精氨酸、L-脯氨酸、L．谷氨酰胺为潜在的股骨头坏死生物标志，其联合诊断的价值较高。
- 朱卫文杨刚徐开民徐忠玮张健
- 关键词：股骨头坏死质谱分析法代谢组学生物学标记
- 过表达小鼠干扰素调节因子8抑制RAW264.7细胞向破骨样细胞的分化
- 2014年
- 目的构建及鉴定小鼠干扰素调节因子8(IRF8)重组腺病毒Ad-IRF8,并观察过表达的IRF8对小鼠可溶性核因子κB受体活化因子配体(sRANKL)诱导的RAW264.7细胞分化的影响。方法 PCR扩增IRF8,亚克隆到穿梭载体pAdTrack-CMV中,PmeⅠ线性化后与骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组获得重组腺病毒载体pAd-IRF8。pAd-IRF8经PacⅠ线性化后转染AD293细胞,包装出重组腺病毒(Ad-IRF8)。Ad-IRF8感染小鼠RAW264.7细胞,经半定量反转录PCR(RT-PCR)和Western blot法检测IRF8的过表达,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测IRF8对sRANKL诱导的RAW264.7细胞分化的影响。结果成功构建携带IRF8基因的穿梭载体pAdTrack-IRF8-CMV和重组载体pAd-IRF8,并且在AD293细胞中成功包装出重组腺病毒Ad-IRF8。半定量RT-PCR和Western blot法证实IRF8在RAW264.7细胞中有过表达,TRAP染色结果显示过表达的IRF8有效抑制RAW264.7细胞向破骨样细胞分化。结论成功构建重组腺病毒Ad-IRF8,在RAW264.7细胞中检测到了IRF8过表达,并能有效抑制RAW264.7细胞向破骨样细胞分化。
- 杨小中朱云王正宇闫文龙姚海刘涛陈婷梅张健
- 关键词：腺病毒破骨样细胞
- 小鼠MafB基因重组腺病毒载体的构建及其对破骨细胞分化的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:构建小鼠肌腱膜纤维肉瘤癌基因B型(MafB)基因重组腺病毒表达载体,阐明MafB对小鼠破骨细胞分化的影响。方法:提取小鼠RAW264.7细胞总RNA,逆转录为cDNA,以cDNA为模板PCR获得目的基因MafB,连接入穿梭质粒pAdTrack-CMV,经酶切鉴定正确的穿梭质粒用PmeⅠ线性化后转化到含pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183菌株中,经PacⅠ线性化后,在HEK 293细胞中包装腺病毒Ad-MafB,感染小鼠RAW264.7细胞,实验分为空白对照组、空载体组(Ad-GFP组)和过表达组(Ad-MafB组),经RT-PCR和Western blotting法检测MafB的表达水平,经抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、RT-PCR和Western blotting法观察MafB对小鼠可溶性核因子κB受体活化因子配体诱导的破骨细胞分化的影响。结果:与空白对照组和Ad-GFP组比较,Ad-MafB组RAW264.7细胞MafB mRNA表达水平明显升高且蛋白相对表达水平明显增加(P<0.05);TRAP染色,Ad-MafB组TRAP阳性细胞明显少于空白对照组和Ad-GFP组;与空白对照组和Ad-GFP组比较,Ad-MafB组TRAP和组织蛋白酶K(CTSK)mRNA表达降低且蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05)。结论:成功构建可在小鼠RAW264.7细胞中过表达MafB的重组腺病毒Ad-MafB,证实MafB可抑制破骨细胞的分化。
- 朱云王正宇杨小中马涛陈婷梅张健
- 关键词：破骨细胞重组腺病毒细胞分化
- FTY720对聚乙烯颗粒诱导的破骨细胞前体细胞RAW264.7分化的影响
- 2013年
- 目的观察FTY720对聚乙烯颗粒诱导的破骨细胞前体细胞RAW264.7分化的影响,探讨其防治人工关节无菌性松动的可能性。方法构建破骨细胞-成骨细胞(RAW264.7-MC3T3)小室共培养体系及破骨细胞-骨片体系,用FTY720干预受聚乙烯磨损颗粒刺激的RAW264.7细胞的分化,倒置显微镜观察分化细胞的形态;抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acid phosphatas,TRAP)染色法对破骨细胞进行计数;扫描电镜观察破骨细胞的一般形态及骨吸收效应;ELISA法检测共培养体系中肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(Lnterleuk-in-6,IL-6)的分泌水平;RT-PCR检测破骨细胞表面核因子κB受体活化子(Receptor activator of NFκB,RANK)和TRAP基因mRNA的转录水平。结果聚乙烯颗粒组RAW264.7细胞体积增大,胞质丰富,胞体边缘不齐呈云雾状,细胞核较多;FTY720组TRAP(+)细胞数明显低于聚乙烯颗粒组(P<0.01);破骨细胞呈圆形,细胞间可通过纤维样足突连接,骨片上有破骨细胞附着生长,FTY720组骨吸收陷窝和骨吸收面积均明显低于聚乙烯颗粒组(P<0.01);聚乙烯颗粒组TNF-α和IL-6的分泌水平均明显增加(P<0.01),FTY720组TNF-α和IL-6的分泌受到抑制;FTY720组破骨细胞表面TRAP和RANK基因mRNA的转录水平均明显低于颗粒组(P<0.01)。结论 FTY720能有效抑制破骨细胞前体细胞RAW264.7分化成熟,减少破骨细胞的形成及对骨片的溶解吸收,减少TNF-α、IL-6等炎性因子的分泌,下调RANK、TRAP等破骨细胞特异细胞表型和功能基因mRNA的转录水平,有望成为防治人工关节无菌性松动的药物。
- 周园东王信李平万睿陈婷梅张健
- 关键词：FTY720破骨细胞共培养
- 大直径球头-骨水泥型人工髋关节置换治疗帕金森患者股骨颈骨折12例被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨采用大直径球头-骨水泥型人工髋关节置换的方法,治疗老年帕金森患者股骨颈骨折的临床疗效。方法:回顾性病例分析2007年1月至2010年10月收治的帕金森患者合并股骨颈骨折12例,男3例,女9例,年龄65岁至87岁,平均年龄76.17岁。假体类型:人工全髋关节假体2例,人工双极股骨头10例。置换后3个月随访,进行围置换期并发症、影像学、髋关节功能评分(Harris评分)等方法评价手术效果。结果:所有患者均安全度过围置换期,置换术后3周出现脱位1例,无深部感染及深静脉血栓形成,无围手术期死亡病例;骨盆平片上出现髋臼侧透亮线1例,无骨溶解、松动及股骨柄下沉;Harris评分:90分至100分3例,80分至89分5例,70分至79分3例,<70分1例。结论:大直径球头-骨水泥型人工髋关节置换治疗老年帕金森患者股骨颈骨折可有效改善关节功能,减少并发症,降低脱位率,提高患者生活质量。
- 周园东朱勇军王信李平万睿张健
- 关键词：帕金森股骨颈骨折骨水泥髋关节置换
- 纱布纤维可否在小鼠气囊植骨模型中诱发炎性骨溶解的研究被引量：4
- 2013年
- 目的建立小鼠气囊植骨模型,观察纱布纤维是否会诱发炎性骨溶解,为优化手术操作奠定实验基础。方法选择2011年3—4月4例在我院行膝关节置换术患者丢弃的胫骨上端松质骨作为胫骨标本,均分为2块,1块采用干纱布擦拭(干纱布组),另1块采用0.9%氯化钠溶液浸湿的湿纱布擦拭(湿纱布组),通过电镜扫描并计算两组纱布纤维覆盖率。近交系SPF级BALB/c小鼠30只随机分为对照组、聚乙烯组和纱布组,每组10只,建立气囊植骨模型。肉眼观察小鼠处死前活动情况、死亡情况及处死后切口炎症反应情况;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠囊壁组织单核细胞计数和淋巴细胞计数;抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法观察骨片破骨细胞阳性染色情况;免疫组织化学染色法观察囊壁组织白介素(IL)-1β、IL-6及肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平,以平均光密度值表示;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测囊壁组织TNF-α水平;实时定量聚合酶链反应(PCR)检测囊壁组织TNF-αmRNA表达水平,以TNF-αmRNA表达倍数表示。结果 (1)干纱布组纤维覆盖率为(18.11±6.94)%,湿纱布组为(4.86±3.64)%,差异有统计学意义(t=3.38,P<0.05)。(2)各组小鼠处死前活动情况良好,无死亡小鼠;处死后发现,聚乙烯组和纱布组小鼠切口存在不同程度的炎症反应,对照组小鼠无明显炎症反应。(3)各组小鼠囊壁组织炎症反应程度比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)各组小鼠颅骨骨片TRAP染色阳性面积比较,差异有统计学意义(F=17.93,P<0.05)。(5)各组小鼠囊壁组织IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平比较,差异均有统计学意义(F值分别为23.39、28.40和122.22,P<0.01)。(6)各组小鼠囊壁组织TNF-α水平及TNF-αmRNA表达倍数比较,差异均有统计学意义(F值分别为653.97和375.31,P<0.01)。结论纱布纤维与聚乙烯颗粒一样,可导致局部炎性细胞因子的释放增多而诱发炎性骨溶解。术中使用纱布�
- 万睿李平周园东张健
- 关键词：外科纱布人工关节多发性
