国家自然科学基金(30800288)
- 作品数：7 被引量：22H指数：3
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- C-G-Ha-HS支架改性协同原儿茶酸对NS/PCs粘附及定向分化的影响被引量：1
- 2014年
- 通过层粘连蛋白（LN）对壳聚糖-明胶-透明质酸-硫酸肝素（C-G-Ha-HS）复合支架进行修饰,提高支架粘附率,优化神经干/祖细胞（NS/PCs）三维培养体系,同时考察了原儿茶酸（PCA）对三维条件下NS/PCs分化为多巴胺（DA）能神经元的影响。扫描电镜观察及CCK-8分析表明,C-G-Ha-HS复合支架孔径为90~130μm,孔隙内的NS/PCs伸出类似神经样的突触使支架与细胞相互连接形成网状结构;培养4 h后,LN修饰的C-G-Ha-HS（5：5）支架细胞粘附率增加至未修饰组的（113.53±4.32）%;培养96 h后,细胞活率增加至未修饰组的（120.30±6.65）%;免疫细胞化学鉴定表明,1%胎牛血清（FBS）和0.06 mmol·L-1 PCA协同作用,明显提高了NS/PCs向DA能神经元分化率,TH阳性细胞分化率达到（16.53±0.65）%,增加至空支架组的（172.72±6.79）%;Nurr1阳性细胞分化率达到（15.93±0.91）%,增加至空支架组的（181.23±1.04）%;研究结果为PCA应用于NS/PCs移植治疗PD提供了实验依据。
- 张晓庆关水葛丹王树萍刘天庆马学虎
- 关键词：层粘连蛋白原儿茶酸分化
- 原儿茶酸调节神经干/祖细胞分化的作用研究被引量：4
- 2012年
- 目的观察原儿茶酸调节体外培养的神经干/祖细胞分化及对细胞分化显型的保护作用。方法神经干/祖细胞取自胚胎14 d小鼠海马组织,以单层贴壁方式培养。免疫荧光染色标记分化的细胞,CCK-8试剂盒检测细胞的生存力,流式细胞仪分析凋亡细胞。结果原儿茶酸单独使用不能诱导神经干/祖细胞的分化,但与1%胎牛血清的联合应用时,原儿茶酸(0.06 mmol.L-1)有效地提高神经元的分化比例,介导神经元的成熟并促进突触的伸长;另一方面,原儿茶酸明显提高了分化显型的生存力并抑制了细胞凋亡,同时激活了细胞内源性的抗氧化酶系统。结论原儿茶酸能够有效地促进神经干/祖细胞分化为神经元的比例并提高细胞分化显型的生存力。
- 关水李海华葛丹刘天庆马学虎
- 关键词：分化神经元原儿茶酸神经保护抗氧化
- 可降解导电PEDOT/PLLA复合材料的制备及其性能的研究被引量：2
- 2014年
- 采用化学聚合方法制备透明质酸(HA)掺杂的聚3,4-乙撑二氧噻吩(PEDOT)导电材料,通过正交实验优化反应条件(掺杂剂、氧化剂、反应时间)提高其电导率,将其与聚左乳酸(PLLA)结合,制得一种导电性良好且可生物降解的PEDOT/PLLA复合材料,考察了PC12细胞在PEDOT/PLLA膜上的粘附生长等生物相容性指标。四探针电导率仪检测表明,当HA为0.05 g,过硫酸铵(APS)为0.015 mol,反应时间为24 h,制备的PEDOT电导率可达0.36 S?cm-1;通过傅里叶变换红外光谱(FT-IR)、能谱(EDS)分析掺杂所得PEDOT纳米材料成分,以及扫描电镜(SEM)观察PEDOT颗粒和PEDOT/PLLA复合薄膜的表面形态,表明HA已成功掺杂到PEDOT,且制得的PEDOT/PLLA复合薄膜中PEDOT分散性较好;荧光显微镜、金相显微镜观察及CCK-8分析表明,PEDOT颗粒有利于PC12细胞的粘附及突触伸长,且在包被层粘连蛋白(LN)的PEDOT/PLLA膜(质量浓度为30%(wt))培养72 h后,细胞存活率增加至对照的(116.6±3.2)%。以上结果初步表明,PEDOT/PLLA膜具有较好的生物相容性,且利于PC12细胞突触的伸长,这为进一步神经组织工程导电生物支架的研究制备提供了实验支持。
- 王树萍关水徐超张晓庆刘天庆马学虎
- 关键词：可降解性PC12细胞生物相容性
- 壳聚糖-明胶-透明质酸-硫酸肝素复合支架的制备及性能评价被引量：5
- 2012年
- 采用冷冻干燥法制备一种新型三维壳聚精-明胶一透明质酸-硫酸肝素（chitosan·gelatin-hyaluronate—heparansulfate，C．G．Ha．HS）复合支架，分别测定支架的孔径、孔隙率、吸水率和降解率等物理性质，同时以壳聚糖一明胶（chitosan．gelatin，C．G）支架作为对照组，考察了神经干／祖细胞（neuralstem／progenitorcells，NS／PCs）在该支架上的粘附率、生长状态以及细胞生存力等生物相容性指标。扫描电镜观察及CCK-8分析表明，C-G-Ha—HS支架孔径主要分布于90．130um，孔隙率明显增大，吸水率大于95％且能够体外降解；c．G．Ha．HS支架明显改善了NS／PCs的粘附性及生存力，细胞在支架内相互交织成网状，C．G．Ha．HS支架（5：5）上的细胞粘附率提高至对照的（2008±8．0）％，培养6天以后，细胞的存活率增加至对照的（357．7±8．9）％。这些结果初步显示。C-G—Ha—HS支架可以用于构建体外NS／PCs的三维培养，为进一步应用于神经组织工程和药物筛选提供了实验依据。
- 林小敏关水葛丹刘天庆马学虎崔占峰
- 关键词：增殖
- 原儿茶酸对体外培养的神经干／祖细胞增殖及凋亡的影响被引量：11
- 2009年
- 目的观察原儿茶酸对体外培养的神经干/祖细胞的增殖和自发性凋亡的影响。方法神经干/祖细胞取自胚胎14 d小鼠海马组织,以悬浮方式在培养器皿中培养成"神经球"。CCK-8试剂盒检测细胞的生存力,B rdU染色标记分析细胞的增殖。结果培养4 d后,神经干/祖细胞发生了自发性凋亡,原儿茶酸(0.06 mmo.lL-1)有效地减少了该种凋亡,将细胞的存活率提高至对照组的140.3%±9.2%;细胞培养4 d和7 d,原儿茶酸(0.06 mmo.lL-1)使细胞内ROS水平分别下降至对照组的43.8%±4.7%和54.5%±6.1%,caspase-3活性下降至对照组的70.6%±4.4%和62.3%±5.5%。结论原儿茶酸剂量和时间依赖地提高了神经干/祖细胞的生存力并且刺激了细胞的增殖。
- 关水刘天庆葛丹马学虎崔占峰
- 关键词：原儿茶酸增殖凋亡
- 神经干细胞体外三维培养模型的构建被引量：1
- 2011年
- 研究了小鼠海马NSCs在胶原凝胶内的生长情况,构建适合于干细胞药物筛选及作用机理研究的三维培养模型。实验采用体外培养第三代NSCs,均匀混合于胶原溶液中,形成"细胞-胶原"的三维凝胶培养。通过扫描电镜观察胶原的微观结构,倒置显微镜及激光共聚焦显微镜观察胶原凝胶中NSCs的生长、伸展情况;应用免疫荧光技术鉴定NSCs,同时采用CCK-8法检测不同胶原浓度及不同培养模式下NSCs的生存和增殖能力。结果表明:质量浓度为0.5 mg/mL的胶原具有良好的三维多孔结构,凝胶中的NSCs生长状态良好,且大部分呈Nestin、BrdU阳性;与传统二维培养方式相比,三维胶原凝胶更利于NSCs的生存及增殖。
- 关水葛丹陆瑞欣刘天庆马学虎崔占峰
- 关键词：神经干细胞胶原凝胶
- 胶原-壳聚糖复合支架体外三维培养神经干细胞
- 2011年
- 采用冷冻干燥法制备了胶原-壳聚糖复合支架并通过层粘连蛋白（LN）进行结构修饰，测定其物理性能特征，建立了胎鼠海马神经干细胞（NSCs）的三维培养体系，同时考察了NSCs与胶原-壳聚糖复合支架的生物相容性．孔径、孔隙率、吸水率、降解率等参数的比较表明，体积比为7：3的复合支架更适合于体外细胞培养的要求，并且NSCs在经LN修饰后支架材料上的接种率得到明显提高；激光共聚焦显微镜及扫描电镜观察表明，NSCs能够在胶原-壳聚糖复合支架内良好地生长、增殖及分化．这些结果为NSCs的进一步临床移植应用，以及治疗神经系统疾病的新药筛选和机理研究等奠定了坚实的实验基础．
- 关水刘天庆葛丹陆瑞欣马学虎崔占峰
- 关键词：神经干细胞胶原-壳聚糖
