国家自然科学基金(30900968) 作品数:6 被引量:60 H指数:4 相关作者: 张彩霞 丛佩华 陈莹 康国栋 李壮 更多>> 相关机构: 中国农业科学院果树研究所 中华人民共和国农业部 河北省农林科学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 现代苹果产业技术体系建设专项 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 轻工技术与工程 更多>>
苹果叶片总蛋白提取及其双向电泳分析 被引量:12 2012年 蛋白质提取方法和电泳条件的建立是蛋白质组学研究中双向电泳分析的关键。通过比较不同提取方法,包括酚/SDS抽提、TCA-丙酮沉淀法、甲醇/醋酸铵沉淀法以及改良HB-酚抽提方法。此外,还优化了样品上样量、等电聚焦程序设置等条件。从所得2-D图谱分离效果来看,改良HB-酚抽提方法所得蛋白点数最多,2-D图谱背景清晰、分离效果好,明显优于其他3种方法。300μg上样量可作为苹果叶片总蛋白2-DE分析的理想的上样量,同时优化了等电聚焦程序,最终得到的2-D图谱分离效果较为理想。该研究的开展也为苹果叶片蛋白质组学后续研究奠定了基础。 张彩霞 李壮 张利义 田义 康国栋 陈莹 丛佩华关键词:苹果叶片 总蛋白 双向电泳 ‘变叶海棠’幼叶cDNA文库构建及CHS基因克隆 被引量:4 2011年 为了理解苹果类黄酮代谢的分子机制,以富含类黄酮‘变叶海棠’苹果幼叶为材料,利用SMART法构建一个苹果叶片全长cDNA文库。初级文库滴度为2.28×104 cfu/mL,库容为3.30×106个独立克隆,重组率100%,插入片段平均长度大于1.5kb。并对随机取16个重组子进行测序,经分析完整全长cDNA为7条。并从测序中获得一个查尔酮合酶(Chalcone sythase,CHS)基因,该基因cDNA全长1548bp,有一个1 170bp的开放阅读框,编码含389个氨基酸残基的蛋白,蛋白的理论分子质量为42.44KDa,等电点5.65,该基因与已知苹果CHS基因高度同源。并构建该基因植物表达载体,用冻融法将其导入根癌农杆菌EHA105。 张利义 张彩霞 康国栋 田义 王强 王强关键词:CDNA文库 CHS基因 苹果链格孢菌与寄主叶片互作的超微结构研究 被引量:7 2012年 以苹果杂交组合(‘华脆’ב金冠’)F1代杂种实生苗群体易感病株系为材料,通过扫描电镜、透射电镜等观察方法,对苹果链格孢菌与寄主叶片互作过程进行了细胞学观察,分析苹果链格孢菌侵染寄主的动态过程和变化规律,以揭示苹果病害发生机制。结果表明,苹果链格孢菌侵染寄主叶片时,多数在表皮分枝扩展,很少通过气孔器或其他方式入侵细胞内部。互作后期,寄主叶细胞内叶绿体和质膜变化显著,多数细胞器降解,表明病原菌已分泌AM毒素作用于寄主。 张彩霞 陈莹 李壮 张利义 康国栋 丛佩华关键词:超微结构 苹果叶片和果实中多胺的检测方法及基质效应研究 被引量:1 2010年 对苹果主要多胺组分(腐胺、精胺、亚精胺)的柱前衍生—高效液相色谱检测方法进行了研究和评价,并对其在苹果叶片和果实两种组织中的基质效应问题进行了初步的探索。严格标准样品和实际样品处理方法,优化提取方法,调节流速在0.3 mL/min时满足苹果叶片和果实不同基质中多胺的分离。多胺上样浓度在0.01~0.2nmol/10μL范围内具有良好的线性关系,线性相关系数在0.99以上,平均回收率在85%~110%之间,方法的RSD值小于9%。 陈莹 张彩霞 康国栋 韩继成 李春敏 丛佩华关键词:多胺 苹果 基质效应 苹果链格孢菌与寄主叶片互作的蛋白质组学解析 苹果链格孢菌可侵染苹果叶片而引起落叶病的发生,是苹果产区主要病害之一。近年来,以提高树体自身抗性为目标的抗性育种研究日益受到重视。随着分子生物学理论和技术的发展,利用基因工程手段加快苹果抗病遗传改良育种进程成为现实。因此... 张彩霞 肖龙 张利义 田义 康国栋 丛佩华 王强 杨玲关键词:苹果 链格孢菌 差异蛋白质组 胁迫 质谱 文献传递 植物与病原菌互作的蛋白质组学研究进展 被引量:20 2010年 深入认识植物与病原菌的识别方式、亲和性或非亲和性的互作模式,对于揭示植物-病原菌互作机制研究具有重要意义。利用蛋白质组学方法研究病原菌侵染植物过程,分析相关的基因和蛋白,有助于从分子水平上探究植物-病原菌相互作用机制。本文概述了植物-病原菌的互作机制,系统介绍了差异蛋白质组学分析方法在植物-病原真菌、植物-病原细菌两类互作系统中的应用,分析了植物与病原菌互作过程中可能涉及的差异表达功能蛋白,并对当前蛋白质组学技术在植物与病原菌互作研究中存在的诸多问题进行了探讨。 张彩霞 李壮 陈莹 田义 张利益 丛佩华关键词:相互作用 病原菌 蛋白质组学 苹果斑点落叶病致病菌的鉴定及生物学特性研究 被引量:16 2011年 目的:明确1株分离于感病苹果株系群体的供试菌株AML0801的种类,探讨其生物学特性,为苹果抗病分子育种研究奠定基础。方法:通过形态特征描述,显微形态、超微结构观察等方法,从形态学上明确AML0801的分类。室内模拟侵染试验,了解AML0801致病性。ITS序列测定分析辅助验证供试菌株AML0801。结果:菌株AML0801的分生孢子、产孢表型等形态特征,符合苹果链格孢(Alternaria mali Roberts,A.mali)种的描述,ITS序列分析表明,AML0801与A.mali标准菌株同源性达99%。通过比较病原菌侵染试验证实AML0801具备一定的致病性。结论:结合供试菌株AML0801形态特征、ITS序列分析结果,以及室内模拟的致病性研究,可将供试菌株AML0801鉴定为苹果链格孢(A.mali)。 张彩霞 陈莹 李壮 康国栋 张利义 周宗山 丛佩华关键词:苹果斑点落叶病 致病菌 生物学特性