国家自然科学基金(81102088)
- 作品数：8 被引量：27H指数：3
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- 相关机构：武警后勤学院附属医院中国人民武装警察部队后勤学院附属医院武警后勤学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 脂质体镶囊的研究进展被引量：2
- 2017年
- 脂质体镶囊(capsosome)是利用层层自组装技术将脂质体包埋在聚电解质微囊的囊壁中,从而形成"夹层式"结构的囊泡,其与生物膜有着极好的相容性,并兼备聚电解质微囊和脂质体的双重优点,作为药物载体具有很大的优势。本文主要介绍脂质体镶囊的特点、制备方法及影响因素和负载的药物种类,为将药物制成脂质体镶囊提供更广泛的思路和选择。
- 陈静怡张莉姬文捷曹梓珍
- 关键词：脂质体层层自组装
- 盐皮质激素受体在博来霉素诱导的实验性肺纤维化中的作用被引量：4
- 2013年
- 目的:研究盐皮质激素受体(MR)在博来霉素诱导的实验性肺纤维化进展过程中的作用及机制。方法:将126只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、博来霉素组和MR阻断剂螺内酯干预组,气管内一次性滴注博来霉素(2.5 mg/kg)溶液建立实验性小鼠肺纤维化模型,螺内酯干预组每天按螺内酯20 mg/kg经灌胃给药。于术后12 h、1 d、2 d、3 d、7 d、14 d和28 d处死小鼠,采用HE染色和Masson染色观察肺组织病理学变化及纤维化程度,采用real-time PCR检测各组肺组织中胶原1(Col1)、Col3、转化生长因子β(TGF-β)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)及MR mRNA的表达水平。结果:(1)与对照组小鼠相比,博来霉素组及螺内酯干预组小鼠在滴注博来霉素后经历了典型的急性炎症期(12 h^3 d)、纤维化进展期(14 d)和纤维化晚期(28 d)。阻断MR下调早期炎症反应并减轻了纤维化程度。(2)螺内酯干预可以有效降低MR mRNA表达水平;阻断MR在急性炎症期显著下调MCP-1 mRNA的表达,在14 d显著下调TGF-β、Col1和Col3 mRNA表达水平。结论:(1)阻断MR可以明显减轻博来霉素诱导的肺纤维化程度;(2)阻断MR可能通过在急性炎症期调节MCP-1和TGF-β的表达,减轻炎症反应,并在纤维化进展期,下调TGF-β的表达,从而抑制肺纤维化的进展。
- 胡道川姬文婕陈雪芬马永强周欣魏路清
- 关键词：肺纤维化受体盐皮质激素博来霉素螺内酯
- 建立HPLC法测定螺内酯脂质体包封率被引量：2
- 2013年
- 【目的】建立测定螺内酯脂质体含量及包封率的高效液相色谱方法。【方法】分别采用透析法和超速离心法分离螺内酯脂质体和游离药物,以HPLC法测定药物含量,计算包封率。【结果】在选定色谱条件下,辅料不干扰测定,螺内酯在0.5～8.0μg/ml范围内线性关系良好(r=0.9999,n=6),日内日间精密度(RSD)均<2%,平均加样回收率为99.85%。透析法可使螺内酯脂质体和游离药物得到良好的分离。【结论】透析法测定螺内酯脂质体的含量及包封率准确可靠、操作简便。
- 张梅平姬文婕周欣魏路清张莉
- 关键词：螺内酯脂质体超速离心包封率
- Krüppel样因子4基因干扰对RAW264.7细胞凋亡和吞噬的影响被引量：2
- 2013年
- 目的应用RNA干扰技术沉默小鼠RAW264.7巨噬细胞Krüppel样因子4(KLF4)基因,建立稳定干扰细胞株,观察其对细胞增殖、凋亡和吞噬活性的影响。方法针对小鼠KLF4基因设计合成重组KLF4 shRNA质粒,脂质体法将重组质粒转染至RAW264.7细胞,经G418筛选后获得稳定表达细胞株。Western blot法检测细胞中KLF4蛋白的表达;CCK-8法检测细胞增殖活性;AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞的凋亡情况;荧光素标记的大肠杆菌结合流式细胞仪检测细胞的吞噬活性。结果 KLF4 shRNA能明显抑制RAW264.7细胞的KLF4蛋白的表达,抑制率76%以上;从第3天开始,shKLF4组细胞的生长速度明显低于NC组(转染阴性质粒pGPU6/GFP/Neo-NC)(P<0.05);WT组(野生型RAW264.7)、NC组和shKLF4组的细胞凋亡率分别为:1.73%、6.85%和12.76%,shKLF4组明显高于NC组(P<0.05);各组细胞的平均荧光强度分别为:WT组(122.0±2.80)、NC组(48.97±5.69)和shKLF4组(80.10±4.61),与NC组相比,shKLF4组的细胞吞噬活性明显增高(P<0.05)。结论成功构建了稳定干扰KLF4基因表达的RAW264.7巨噬细胞株,KLF4下调能够明显抑制RAW264.7细胞增殖,促进细胞凋亡,增强细胞的吞噬活性。
- 姬文婕陈雪芬马永强胡道川卢芮伊周欣魏路清
- 关键词：RNA干扰增殖
- 实验性肺纤维化小鼠循环单核细胞亚群的动态变化及意义被引量：12
- 2014年
- 目的：外周血单核细胞表型偏移失衡与肺纤维化病理进展关系密切。文中通过阐述循环单核细胞亚群在实验性肺纤维化小鼠不同病理时期的动态变化，探讨其表型偏移与肺组织炎症和纤维化的关系。方法100只雄性C57 BL/6 J小鼠随机数字表法分为等渗盐水组和博莱霉素组，经口咽吸入法分别给予等渗盐水及博莱霉素A5，术后第1、3、7、14及21天处死小鼠，病理学方法计算各组小鼠肺组织炎症评分（inflammation score， IS）及胶原容积分数（collagen volume fraction， CVF），常规方法进行支气管肺泡灌洗液（ bronchoalveolar lavage fluid ， BALF）细胞计数及分类计数，荧光定量PCR法检测各组小鼠肺组织胶原Ⅰ、胶原Ⅲ的mRNA表达量，氯胺T法检测肺组织羟脯氨酸（ hydroxyproline ， HYP）含量，流式细胞术检测循环单核细胞亚群的变化。结果博莱霉素组小鼠第3天炎性细胞浸润、肺泡壁水肿等炎症程度（ IS评价）较等渗盐水组显著增加（P＜0．01），第7天达到峰值后呈下降趋势。博莱霉素组小鼠第14、21天肺组织CVF较等渗盐水组明显增高（P＜0．01）；与等渗盐水组相应时间点比较，博莱霉素组第1天细胞总数无明显变化，第3天明显增多（25．18±2．06 vs 8．82±1．59， P＜0．01），第7天升至高峰（56．56±5．03 vs 3．68±0．79， P＜0．01），后呈下降趋势，但第14～21天细胞总数仍高于等渗盐水组（P＜0．01），肺泡巨噬细胞比例的变化趋势与细胞总数相一致；而中性粒细胞数量第1、3、7天显著高于等渗盐水组（9．086±1．268 vs 1．108±0．229、5．551±0．511 vs 0．315±0．100、8．093±0．922 vs 0．249±0．074），差异均有统计学意义（P＜0．01）；博莱霉素组胶原Ⅰ、ⅢmRNA表达水平在第14、21天显著高于等渗盐水组（ P＜0．05）；HYP检测结果显示博莱霉素组第7、14、21天高于等渗盐水组（
- 马永强姬文婕郑春秀张译丹彭守春胡道川陈雪芬周欣魏路清
- 关键词：肺纤维化单核细胞博莱霉素
- Krüppel样因子4在实验性肺纤维化小鼠肺组织中的表达及意义被引量：7
- 2013年
- 目的探讨博莱霉素诱导小鼠肺纤维化模型中,Krüppel样因子4(KLF4)的表达及其意义。方法 C57BL/6小鼠随机分为生理盐水对照组(Control)和博莱霉素组(BLM),经气管内注入博莱霉素(2.5 mg/kg)建立实验性小鼠肺纤维化模型,注入等量生理盐水作为对照组,分别于术后第12 h、1 d、2 d、3 d、7 d、14 d及28 d取材,采用HE染色和Masson染色观察肺组织病理变化及胶原的沉积部位和数量,实时定量PCR法和免疫组织化学法分别检测各组肺组织中KLF4 mRNA和蛋白表达水平。结果博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化过程中,第1、2及3 d表现为急性炎症;第7 d炎症加重,并出现胶原沉积;第14 d肺泡结构塌陷,胶原沉积明显;第28 d肺泡结构基本正常,炎症程度和胶原沉积较轻。与对照组相比,博莱霉素组小鼠肺组织中KLF4 mRNA的表达水平第1 d开始升高,而后降低,第3 d达最低后逐渐升高直至第28 d。博莱霉素组小鼠肺组织中KLF4蛋白的表达趋势与mRNA水平基本一致,第1 d开始升高,而后降低,第3 d达最低后逐渐增加至第14 d后再次降低。结论 KLF4在博莱霉素致肺纤维化过程中呈现明显的动态变化,并可能参与了肺纤维化的发生与发展。
- 陈雪芬姬文婕胡道川马永强周欣魏路清
- 关键词：肺纤维化博莱霉素小鼠
- 血红素加氧酶-1基因敲除小鼠的饲养和鉴定
- 2015年
- 目的繁殖并鉴定HO-1基因敲除(HO-1-/-)小鼠。方法将引进的HO-1基因敲除杂合子小鼠,进行SPF级饲养,与C57BL/6野生型小鼠配种繁殖,提取子代小鼠的基因组DNA,PCR法特异性扩增HO-1基因片段,使用双脱氧测序法测得基因序列。子代小鼠出现3种基因型:野生型、杂合子型及纯合子型。杂合子小鼠进一步配种繁殖,以获得更多的基因敲除纯合子小鼠,纯合子小鼠用以课题研究。结果 HO-1基因敲除杂合子小鼠的饲养和繁殖均获得成功,获得了HO-1基因敲除纯合子和杂合子小鼠。结论正确的饲养繁殖及鉴定方法是从HO-1基因敲除杂合子小鼠中获得纯合子小鼠的有效途径。
- 张芯苏程程姬文婕周欣马永强李玉明
- 关键词：基因敲除小鼠HO-1纯合子杂合子
- 干扰盐皮质激素受体基因对RAW264.7细胞增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:应用RNA干扰技术沉默小鼠RAW 264.7巨噬细胞盐皮质激素受体(MR)基因,建立稳定干扰细胞株,并观察其对细胞增殖和凋亡的影响。方法:针对MR基因设计合成重组MR shRNA质粒,脂质体法转染质粒至RAW 264.7细胞,经G418筛选后获得稳定表达细胞株。细胞分为3组:野生型(WT)组、阴性对照(NC)组和干扰(shMR)组。荧光显微镜下观察确定细胞的转染效率;实时定量PCR法检测细胞中MR mRNA的表达;CCK-8方法检测细胞增殖活性;流式细胞术分析细胞周期分布和凋亡情况。结果:(1)MR shRNA能明显抑制RAW264.7细胞的MR基因表达,抑制率70%以上。(2)从第3 d开始,shMR组细胞的生长速度明显低于NC和WT组(P<0.05),说明MR shRNA能明显抑制细胞增殖。(3)WT、NC和shMR组的增殖指数分别为(37.2±0.5)%、(37.5±1.6)%和(31.0±1.3)%,shMR组的细胞周期出现改变,S期和G2/M期比例明显下降,增殖指数下降(P<0.05)。(4)WT、NC和shMR组的细胞凋亡率分别为(2.18±0.36)%、(6.65±0.81)%和(7.70±1.34)%,shMR组略高于NC组,但二者的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本研究成功构建了稳定干扰MR基因表达的RAW 264.7细胞株,MR shRNA能够明显抑制RAW 264.7细胞增殖,但对其凋亡无明显影响。
- 姬文婕胡道川陈雪芬马永强卢芮伊周欣魏路清
- 关键词：受体盐皮质激素RNA干扰RAW细胞增殖
