国际科技合作与交流专项项目(2008DFA30710) 作品数:12 被引量:69 H指数:5 相关作者: 王青艳 黄日波 陆雁 杨键 申乃坤 更多>> 相关机构: 广西科学院 广西大学 南京工业大学 更多>> 发文基金: 国际科技合作与交流专项项目 国家科技支撑计划 广西壮族自治区自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 轻工技术与工程 化学工程 医药卫生 更多>>
一种不依赖钙离子的酸性α淀粉酶基因的克隆表达 被引量:1 2010年 以产酸性淀粉酶菌株Bacillus sp.CN7的基因组DNA为模板,PCR扩增到α淀粉酶成熟肽基因,将该基因插入表达质粒pSE380中,构建重组质粒pSE380-cn7a。将重组质粒导入到Escherichia coli JM109中,IPTG诱导表达。重组酶经Sephacryl S300、Ni-NTA纯化后测定其酶学性质。重组酶CN7A的最适温度为65°C,最适pH为5.5?6.0,对可溶性淀粉的Km值为3.784g/L,最大反应速度为101.2mg/(L·min),该酶的热稳定性不依赖钙离子。 杨键 王青艳 金辉 秦艳 王成华 黄日波关键词:克隆表达 PKA 富集宏基因组DNA中α淀粉酶全长基因的克隆及重组表达 被引量:3 2010年 利用反向-巢式PCR(IN-PCR)从富集土壤宏基因组DNA中克隆到一种α-淀粉酶基因的全序列,其基因登录号为GU045523,测序分析显示与来自Bacillussp.KR-8104耐酸淀粉酶不完整基因同源性为99%。将获得的α-淀粉酶成熟肽基因与表达载体pSE380连接,导入Escherichia coliJM109中,IPTG诱导表达。粗酶液经Ni-NTA、SephacrylS-200纯化后测定酶学性质:重组酶GXAA的最适作用pH为7.0,最适作用温度为75℃,对可溶性淀粉的Km值为11.6g/L。构建突变子E27G、A450T、E27G-A450T,其酶学性质与原始酶没有显著差别。 杨键 曾丽娟 廖思明 王青艳 杜丽琴 韦宇拓 黄日波关键词:宏基因组 侧翼序列 Α-淀粉酶 酿酒酵母中的嗜热细菌木糖异构酶活性表达及木糖代谢研究 被引量:5 2009年 将来自嗜热放线细菌Thermobif ida f usca的木糖异构酶(xylose isomerase,XI)基因xylA,连接于酵母表达载体pYES2的半乳糖诱导启动子(PGAL)下,得到重组质粒pYES2-xylA,用其转化酵母菌INVSc1,测定重组酵母菌株INVSc1-xylA的木糖异构酶活性,并对重组酵母菌株进行木糖葡萄糖共发酵试验,探讨在酿酒酵母中建立新的生产乙醇木糖代射途径。结果木糖异构酶在75℃,pH值6.8的酶活力最高,在酿酒酵母中成功地获得活性表达,并且SDS-PAGE电泳有明显的特异性表达产物带,单体分子量为43kD。INVSc1-xylA在木糖葡萄糖共发酵实验中消耗木糖和产生乙醇分别比对照菌提高53.8%和36%,提高了其生产乙醇的能力。 王青艳 杨登峰 孙靓 陆雁 黄日波关键词:木糖异构酶 酿酒酵母 生淀粉酶生产菌株Paenibacillus sp.的筛选和酶的纯化及酶学性质 被引量:6 2010年 分离得到1株产生淀粉酶的菌株,通过扩增和测定16S rDNA序列并进行比对,发现是Paenibacillus属的细菌。液体摇瓶发酵结束后,其产生的生淀粉酶比酶活达108.5U/mL。通过饱和(NH4)2SO4沉淀、Sephacryl S-300层析的方法对其所产的生淀粉酶进行分离纯化,得到纯化的酶蛋白比酶活为5112.04U/mg,纯化倍数为14.1,相对分子质量约为1.0×105。该酶以木薯生淀粉为底物时,最适pH5.6,最适温度50℃。金属离子Ca2+、Mg2+对该酶具有激活作用,Zn2+、Cu2+、Fe2+、Ni2+、Mn2+、Co2+和EDTA2-对该酶均具有抑制作用。 曾丽娟 杨键 陈英 王青艳 黄日波关键词:PAENIBACILLUS 生淀粉酶 定量联结人抗凝血酶的变异及其临床表现(英文) 被引量:1 2009年 将蛋白质序列转换成数值数据后,建立一种描述性的概率方法分析单基因疾病的基因型与表型之间的关系。先用氨基酸分布概率定量变异的抗凝血酶,然后用交叉影响分析法联结人抗凝血酶的变异及其临床表现,再用贝叶斯公式计算变异条件下抗凝血酶缺乏的发病概率。结果显示当某个人被检测到抗凝血酶变异时将有大于90%的机会患遗传性抗凝血酶缺乏。 严少敏 吴光关键词:氨基酸 单基因疾病 贝叶斯法 淀粉结合域与α-淀粉酶的融合表达及其酶学性质 被引量:1 2010年 利用RT-PCR从Rhizopus oryzaeGX-08总RNA中克隆到糖化酶的淀粉结合域(SBD)基因(sbd),将该基因片段插入α-淀粉酶(CN7A)基因cn7a的5′端构建融合表达质粒pSE-sbdcn7a。嵌合酶SBD-CN7A在Escherichia coliJM109表达,并经Ni-NTA、Sephacryl S300纯化。酶学性质研究表明:嵌合酶在最适作用条件方面与原始酶并无明显差别;在以生玉米粉为底物时,其比酶活提高了8.7倍,而以可溶性淀粉为底物时其比酶活是原始酶的1.8倍,Km也从3.784 g/L降低为2.234 g/L;嵌合酶在65℃下的半衰期从10 min缩短为4 min。结果表明,淀粉结合域SBD的融合赋予了α-淀粉酶CN7A水解生淀粉的能力。 杨键 金辉 王青艳 黄日波关键词:热稳定性 酸性α-淀粉酶生产菌株的筛选及酶学性质研究 被引量:3 2009年 从土壤中筛选到一株产酸性α-淀粉酶的野生菌株N7,此菌株具有较高的产酶活性。通过菌落形态、菌体特征观察和16SrDNA序列比对,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌。其酶学性质研究表明,菌株代谢产酶的反应最适温度为53℃,最适作用pH值为4.6,在pH3.0~10.0之间,具有较好的酸稳定性。 秦艳 王青艳 陆雁 杨建 黄日波关键词:微生物 枯草芽孢杆菌 酸性Α-淀粉酶 酶学性质 计算变异学创立背景及其用途(英文) 被引量:5 2010年 为了克服生物信息学和计算生物学中字母或数字不受序列长度、氨基酸组成和位置、相邻氨基酸影响的缺陷,根据自然界普遍存在的随机性原理,创立计算变异学。计算变异学用氨基酸对可预测性、氨基酸分布概率和变异概率3种方法量化整个蛋白质及每个氨基酸,用活的、动态的测量指标量化分析蛋白质。计算变异学方法可以应用于研究蛋白质进化、遗传病定量诊断,分析蛋白质结构与功能、药物设计和病毒变异预测等领域。 严少敏 吴光关键词:蛋白质 响应面法优化耐高温酵母生产高浓度乙醇 被引量:29 2010年 利用耐高温酵母GXASY-10菌株对木薯粉同步糖化(SSF)法生产高浓度乙醇的发酵条件进行了优化。在单因素实验的基础上,首先应用Plackett-Burman试验设计筛选影响酒精高温高浓度发酵的重要参数,采用最陡爬坡实验逼近最大酒精生产区域后,利用Box-Behnken设计确定重要参数的最佳水平。筛选结果表明,影响酒精产量的重要参数是液化时间、糖化酶用量和初始木薯粉(底物)浓度。最佳工艺条件为:液化时间为35min,糖化酶添加量为1.21AGU/g底物,底物浓度为37.62%。20L发酵罐在此条件下(发酵温度37℃,转速100r/min)经过48h发酵,酒精浓度可达16.07%(V/W)。优化条件与初始条件相比较,酒精浓度提高了33%。 申乃坤 王青艳 陆雁 秦燕 黄日波关键词:燃料乙醇 木薯 同步糖化发酵 PLACKETT-BURMAN设计 BOX-BEHNKEN设计 木薯淀粉高温高浓度生产酒精的工艺研究 被引量:7 2009年 对木薯淀粉高温高浓度生产酒精的三角瓶发酵条件进行了优化。在单因素实验的基础上,首先应用Plackett-Burman试验设计筛选影响酒精高温高浓度发酵的重要参数,利用最陡爬坡实验逼近最大酒精生产区域后,利用Box-Behnken设计确定重要参数的最佳水平。筛选结果表明,影响酒精产量的重要参数是糖化酶用量、肌醇浓度和初始淀粉浓度(料水比)。最佳工艺条件为糖化酶用量为0.27AGU/g淀粉、肌醇的添加量为0.065%、淀粉浓度为33.64%,在此条件下发酵48h,酒精浓度可达15.02%。优化条件与初始条件相比较,酒精浓度提高了25%。 申乃坤 王青艳 陆雁 秦燕 黄日波关键词:燃料酒精 木薯 高浓度发酵 PLACKETT-BURMAN设计 BOX-BEHNKEN设计