国家自然科学基金(39970335)
- 作品数：11 被引量：47H指数：4
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- 受体T淋巴细胞克隆的建立及其抗原特异性的检测被引量：2
- 2003年
- 目的 建立受体T淋巴细胞克隆后 ,进一步分析检测该克隆针对供体的抗原特异性。方法 供体鼠脾细胞免疫受体鼠 ,再分离、纯化受体鼠T细胞 ,克隆受体T细胞。将动物分组免疫 ,对各组受体作电镜观察淋巴细胞超微结构、MTT法测定淋巴细胞增生试验以及流式细胞分析T细胞亚群的变化 ,分析检测该克隆针对供体的抗原特异性。结果 ①受体针对供体抗原特异性T淋巴细胞克隆稳定建立 ;②经免疫组的受体T细胞超微结构改变显著 ,淋巴细胞增生试验及流式细胞分析结果与对照组的差异有显著性意义 (t>t0 0 5)。结论 成熟T淋巴细胞 ,在一定条件下仍可发生分裂和增生 ,形成克隆。通过供体脾细胞抗原特异性刺激 。
- 周军汪建平
- 关键词：抗原特异性有限稀释法
- 腺病毒-tk基因同源重组系统构建的研究
- 2007年
- 目的研制能快速高效地构建携带外源目的基因tk的重组腺病毒细菌内同源重组系统。方法将pBluescriptⅡKDR-tk、ptrack与ptrackCMV质粒转化感受态细菌后扩增,通过PmeI酶线性化穿梭载体ptrackCMV-tk,然后将线性化的穿梭载体ptrackCMV-tk与pAdeasy-1进行重组构建成重组腺病毒质粒;利用整合入重组病毒质粒中的绿色荧光蛋白分别筛选重组后的腺病毒质粒。结果PCR和RT-PCR分析外源基因的表达证实tk基因在DNA和mRNA水平上均能有效表达;荧光显微镜下观察计数GFP阳性细胞数,计算病毒滴度为1.1×1011pfu/L。结论细菌内同源重组系统能快速高效地构建携带外源目的基因tk的重组腺病毒;绿色荧光蛋白方便早期证实腺病毒的产生。
- 周军宋新明徐鋆耀王磊兰平汪建平
- 关键词：TK基因腺病毒基因治疗
- 结肠抗原特异性T细胞克隆回输治疗大鼠溃疡性结肠炎的研究被引量：14
- 2004年
- 目的 探讨结肠抗原特异性T细胞克隆回输治疗溃疡性结肠炎大鼠的作用。方法将结肠抗原特异性T细胞克隆回输至 2 0只溃疡性结肠炎大鼠 ,观察刺激指数 (SI)、CD+4、CD+8以及CD4+CD2 5+T细胞和白细胞介素 13和白细胞介素 4水平的变化 ,并对照治疗前后结肠病变情况。结果 克隆回输后结肠炎症吸收 ,症状基本消失。回输前SI平均值为 8.15± 2 .2 4,回输后为2 .0 2± 0 .87;CD+4、CD+8水平、CD+4/CD+8比值、IL 13和IL 4水平呈明显下降 ,CD4+CD2 5+调节性T细胞水平 (% )明显升高 (16.5± 3 .8Vs 45 .4± 4.9) ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 结肠抗原特异性T细胞克隆回输 ,成功诱导溃疡性结肠炎大鼠进入特异性免疫耐受状态 ,CD4+CD2
- 周军汪建平兰平吴小剑黄美近宋新明
- 关键词：特异性T细胞溃疡性结肠炎免疫耐受
- CEA启动子启动双自杀基因与单自杀基因对Lovo细胞杀伤作用的比较被引量：6
- 2005年
- 【目的】探讨CEA启动子(CEApromoter,Cp)启动的双自杀基因胞嘧啶脱氨酶(cytosinedeaminase,CD)与胸苷激酶(thymidinekinase,TK)组织特异性对Lovo结肠癌细胞杀伤作用是否优于单一自杀基因。【方法】以带有Cp、CD与TK的重组腺病毒转染的Lovo细胞作为实验组,未转染者为对照组,5鄄氟胞嘧啶(5鄄fluorocytosine,5鄄Fc)组系列质量浓度:10、8、6、4、2、0滋g/mL;更昔洛韦(ganciclovir,GCV)组系列质量浓度:5、4、3、2、1、0滋g/mL;两药联合应用的系列质量浓度:(10+5)、(8+4)、(6+3)、(4+2)、(2+1)、0滋g/mL。光镜观察细胞形态,噻唑蓝法测定细胞生长抑制率(growthinhibitionrate,GIR)及半数抑制浓度(IC50)。病毒转染的Lovo细胞与未转染的Lovo细胞按不同比例混合培养,给予5鄄Fc5滋g/mL或/和GCV10滋g/mL,噻唑蓝法测定细胞GIR。【结果】对照组5鄄Fc与GCV对细胞的生长抑制作用极低,5鄄Fc组IC50为2400滋g/mL,GCV组为3500滋g/mL。实验组随5鄄Fc与GCV剂量增加,对细胞的杀伤作用明显增加,5鄄Fc组IC50为5.75滋g/mL,GCV组为3.50滋g/mL,两者同时应用相当于5鄄Fc1.90滋g/mL+GCV0.95滋g/mL,细胞对5鄄Fc的敏感性提高417.4倍,对GCV的敏感性提高1000倍。病毒杀伤Lovo细胞具有明显的“旁观者”效应,联合应药组的“旁观者”效应明显高于单独应用组。【结论】双自杀基因细胞毒效应以及“旁观者”效应均高于单一自杀基因。
- 王天宝汪建平董文广钟女奇周军
- 关键词：胞嘧啶脱氨酶胸苷激酶
- 克隆病合并膀胱内瘘的诊治分析(附12例报告)
- 2009年
- 目的总结分析克隆病合并膀胱内瘘的临床特点和诊治策略。方法多单位联合回顾性统计12例克隆病(Crohn's disease,CD)合并膀胱内瘘的病例数据,包括年龄、性别、症状、治疗措施、手术情况、并发症、术后Α院时间及临床随访等情况,κ料来源于克隆病临床数据库。结果克隆病合并膀胱内瘘的症状以气尿为主(66.67%),12例患者均有脓尿;全组病例中行I期受累肠段切除+膀胱修补8例(66.67%);10例术后平均随访24.28个月,无疾病复发。结论克隆病患者出现气尿为合并膀胱内瘘的主要临床证据;源器官切除+靶器官修补的外科治疗方法预后良好。
- 周军陈双章立杨斌兰平汪建平
- 关键词：克隆病膀胱瘘
- 克罗恩病合并瘘手术治疗24例
- 2006年
- 目的总结分析外科手术治疗克罗恩病(CD)合并痿的疗效和临床意义。方法对1980年1月至2005年4月期间收治的CD合并急性穿孔和瘘的手术病例进行回顾性分析。结果25年间确诊CD的181例中,合并瘘或穿孔病例24例(13．3%)。8例患者(33．3%)穿孔前明确使用过类固醇药物。9例无激素治疗史．其余7例情况不明。单一穿孔18例,2处游离穿孔4例,3处以上腹壁外瘘2例。急诊手术8例,择期手术16例；有20例在病变肠段切除的基础上,分别采取阴道或膀胱瘘口修补术4例,瘘管一期扩创切除12例,腹壁瘘管搔刮术4例；还有4例采取乙状结肠单腔造瘘加肛瘘切开术。术后5例患者(20．8%)出现并发症,其中切口感染2例,腹腔脓肿2例,吻合口瘘1例；均经外科引流、抗感染等保守措施治愈。死亡3例(12．5%),2例死于出血和持续高热；1例为感染合并多器官功能衰竭并造瘘口出血死亡。其余病例均痊愈出院。18例获6个月至18年的随访,5年瘘的复发率为16．7%。10年再手术率为33．3%。结论激素的应用并非构成CD合并瘘的主要因素,CD合并瘘应成为手术的明确指征。
- 汪建平周军宋新明王磊黄美近吴小剑杨祖立兰平
- 关键词：克罗恩病穿孔外科治疗
- 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因导入T细胞克隆治疗溃疡性结肠炎大鼠
- 2008年
- 目的探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）基因导人T细胞克隆治疗溃疡性结肠炎（UC）大鼠的作用。方法将HSV-TK基因导人T细胞克隆回输至27只UC大鼠，观察刺激指数（SI）、CD4^＋、CD8^＋及白细胞介素（IL）-13和IL-4水平的变化，并比较治疗前后结肠病变的情况。结果UC大鼠结肠壁病变于tk^＋细胞克隆回输治疗2-3d出现炎性反应吸收改变，7-10d后结肠炎性反应基本消失；回输前SI值为7．39±1．24，回输后为2．67±0．87（P〈0．05），CD4^＋、CD8^＋水平、IL-13和IL-4水平明显下降，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论T细胞克隆疫苗诱导和tk基因导入后杀伤效应的双重作用导致结肠自身抗原特异性免疫耐受的最终形成，HSV-TK自杀基因导入T细胞克隆回输方案是UC基因治疗研究和靶点设计的有效手段。
- 周军徐鋆耀兰平王磊黄美近汪建平
- 关键词：T细胞克隆单纯疱疹病毒胸苷激酶基因溃疡性结肠炎免疫耐受
- CEA启动子启动双自杀基因CD/TK重组AdEasy XL腺病毒构建被引量：5
- 2005年
- 目的构建含有CEA启动子(CEApromoter,Cp)启动的双自杀基因CD与TK的复制缺陷型腺病毒。方法设计带有限制性内切酶酶切序列的PCR引物。在2μlT4DNAligase作用下,Cp插入pAdTrack(pAT)的MCS,形成pAT.Cp;CD插入pAT.Cp的MCS,形成pAT.Cp.C;TK插入pAT.Cp.C的MCS,形成pAT.Cp.C.T。5μgpAT.Cp.C.T经4μlPmeI线化后,转化BJ5183AD1,1μlPacI酶切鉴定。重组AdEasy质粒转化XL10Gold细胞,大量扩增提取纯化,转染5×105AD293细胞,荧光显微镜观察,制备带有Cp.C.T重组腺病毒(recombinantadenoviruswithCp.C.T,RACp.C.T),测定病毒滴度。结果pAT.Cp,pAT.Cp.C,pAT.Cp.C.T双酶切以及PCR均见长约500bp的Cp,1300bp的CD,1100bp的TK。对照质粒DNA转化BJ5183AD1效率为7.36×106cfu/μg。线化pAT.Cp.C.T转化BJ5183AD1,形成重组AdEasy质粒DNA,PacI酶切见典型长约3.0或4.5kb与30.0kbDNA片断。重组质粒转染AD293出现绿色荧光。RACp.C.T滴度为5.67×107pfu/ml。结论RACp.C.T构建正确;AdEasyXL腺病毒载体系统转导Cp.C.T具有高效性,易于观察转染效果。
- 王天宝汪建平董文广钟女奇周军
- 关键词：结肠肿瘤胸苷激酶腺病毒载体复制缺陷型腺病毒重组腺病毒自杀
- 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因体外杀伤T淋巴细胞及克隆的效应实验被引量：2
- 2006年
- 目的探讨tk基因系统在体外培养条件下对T细胞克隆的转导情况以及转导后的tk杀伤效应。方法将tk基因在体外培养条件下导入结肠抗原特异性T细胞克隆,观察基因转染、克隆凋亡情况,比较tk^+和tk^-T细胞克隆之白细胞介素(IL)-2分泌水平、细胞存活率、“旁观者效应”间差异。结果荧光显微镜下观察可见转染成功,tk基因导入淋巴细胞发生凋亡；当复合感染度(MOI)为0、1．0、5．0、20．0、50．0、100．0、200．0、500．0时,细胞存活率分别为(94．43±5．02)%、(85．33±4．12)%、(81．07±2．46)%、(73．51±3．89)%、(68．68±5．26)%、(54．16±3．72)%、(45．51±2．29)%、(22．16±1．77)%。随着MOI和丙氧鸟苷(GCV)浓度增加,细胞存活率呈现明显下降趋势；tk^+T细胞克隆实验组IL-2分泌水平明显下降,与对照组差异有统计学意义(P＜0．01)；各种tk^+T细胞比例条件下的存活率变化曲线与ADV/Empty组接近,未能产生类似肿瘤细胞的旁观者效应。结论tk基因对T细胞克隆具备杀伤效应,但tk^+T细胞克隆杀伤实验中未能见到与肿瘤细胞类似的“旁观者效应”。
- 周军宋新明王磊兰平黄美近汪建平
- 关键词：T细胞克隆旁观者效应
- 克罗恩病的围手术期处理被引量：3
- 2004年
- 汪建平兰平周军
- 关键词：克罗恩病围手术期处理术前准备手术适应证药物治疗营养支持
