江苏省农业科学院科研基金(6110738)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 鸡γ干扰素在酵母中的分泌表达
- 2009年
- 根据GenBank已发表的鸡γ干扰素(ChIFN-γ)cDNA基因序列设计一对引物,以ConA刺激8 h后的鸡全血淋巴细胞提取的总RNA为模板,通过RT-PCR方法克隆出ChIFN-γ基因,将其连接到pMD18-T载体上获得阳性重组质粒。测序结果表明,该ChIFN-γ与GenBank上发表的ChIFN-γ序列的同源性可达99.6%,其含有1个495 bp的开放性阅读框架,编码164个氨基酸。通过Kpn I和Not I两个酶切位点将该基因插入酵母表达载体(pPICZa-A),并将该重组酵母ChIFN-γ载体线性化,通过电转化使ChIFN-γ基因整合到酵母(X-33)基因组上,经甲醇诱导后,成功表达出ChIFN-γ。利用Western-blotting分析测定表达的ChIFN-γ蛋白的活性。结果表明,本试验得到的重组酵母ChIFN-γ是具有反应原性的蛋白。
- 魏雪涛李银刘宇卓张敬峰
- 关键词：克隆分泌表达
- 鸡干扰素基因的分子克隆与序列测定被引量：3
- 2008年
- 根据GenBank已发表的鸡γ干扰素(ChIFN-γ)cDNA基因序列设计一对引物,以伴刀豆球蛋白A(ConA)刺激培养的鸡脾淋巴细胞中提取总RNA,应用反转录、聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增得到ChIFN-γ,将其连接到pMD18-T载体上并转化到DH5α感受态细胞中,获得阳性重组质粒。测序结果表明,ChIFN-γ与Genbank上发表的ChIFN-γ序列的同源性可达99.6%,其含有1个495 bp的开放性阅读框架,编码164个氨基酸。
- 魏雪涛李银刘宇卓张敬峰
- 关键词：克隆
