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国家高技术研究发展计划(2006AA02A308): 作品数：41 被引量：124H指数：6; 相关作者：钱小红刘银坤张养军康晓楠郭坤更多>>; 相关机构：复旦大学军事医学科学院北京工业大学更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学理学农业科学更多>>

军事医学科学院蛋白质组学研究进展被引量：4: 2011年; 蛋白质组学是后基因组时代生命科学研究的热点和前沿领域.军事医学科学院是国内最早开展蛋白质组研究的单位之一,其蛋白质组学研究的发展不仅对中国蛋白质组研究起到重要的引领作用,也对国际蛋白质组学的发展做出了重要贡献.本文将重点介绍军事医学科学院的科学家在国际人类肝脏蛋白质组计划以及疾病蛋白质组、病原微生物蛋白质组等领域的研究成果.; 钱小红姜颖王建朱云平李栋魏开华王恒梁; 关键词：蛋白质组学表达谱肝病蛋白质相互作用病原微生物

Expression of Plasminogen Activator Inhibitor-2 is Negatively Associated with Invasive Potential in Hepatocellular Carcinoma Cells: 2013年; Objective To investigate the association between plasminogen activator inhibitor(PAI)-2 expression and invasive potential in hepatocellular carcinoma(HCC) cells.Methods The HCC cell lines with high,low,and non-metastatic potentials,namely MHCC97-H,MHCC97-L,and SMMC-7721 respectively,were cultured in vitro.Matrigel invasion assay and Western blot of PAI-2 protein expression were conducted.Results The number of invaded cells in MHCC97-L was significantly higher than that in SMMC-7721(P=0.005),whereas that in MHCC97-H was higher than in MHCC97-L(P=0.017) and SMMC-7721(P=0.001).Contrarily,PAI-2 protein expression was gradually reducing from SMMC-7721,MHCC97-L,to MHCC97-H(MHCC97-H vs.MHCC97-L,P<0.001;MHCC97-H vs.SMMC-7721,P=0.001;MHCC97-L vs.SMMC-7721,P=0.001).The Pearson's correlation analysis revealed a significant negative association between invaded cell number and PAI-2 expression(r= 0.892,P=0.001).Conclusion PAI-2 expression may be negatively associated with the invasive potential of HCC.; Ye JinLi ZhouKe-min JinBao-cai Xing; 关键词：纤溶酶原激活物抑制物肝癌细胞负相关 PAI-2 肝细胞癌

双向电泳分离技术的比较和优化被引量：2: 2009年; 目的:比较优化人血清蛋白双向电泳(2-DE)分离技术,提高2-DE对血清蛋白的分辨能力。方法:收集健康人群标本,分别进行多次双向电泳,比较高丰度蛋白的去除前后及传统的考马斯亮蓝染色和SYPRO-ruby荧光染色两种不同的染色方法等因素对双向电泳图谱质量的影响。结果:考马斯亮蓝染色和SYPRO-ruby荧光染色相比,血清2-DE图谱检测到平均蛋白质点数分别是(324±25)(n=3)和(785±30)(n=3);去除高丰度蛋白前后比较,未做处理的血清、去除蛋白和IgG血清的2-DE图谱检测到平均蛋白点数分别是(501±25)(n=3)和(813±22)(n=3)。结论:去除高丰度蛋白并结合SYPRO-ruby荧光染色可以大大提高血清低丰度蛋白的解析能力。此方法优化了血清蛋白质2-DE技术,为进一步开展疾病血清蛋白质组研究奠定了基础。; 舒宏康晓楠李山刘银坤秦雪; 关键词：双向电泳血清蛋白质组染色

肝癌发生不同病理阶段血清蛋白质组的比较被引量：2: 2009年; 目的比较肝癌发生不同病理阶段血清蛋白质组的表达变化情况，从中寻找特异性标志物。方法用双向凝胶电泳分离正常人、慢性肝炎、肝硬化和肝癌患者的血清蛋白质，结合质谱技术对差异点进行鉴定；Western blot检测结合珠蛋白D链以验证蛋白质水平的表达。计量资料数据以均数±标准差（x±s）表示，采用方差分析和LSD检验进行两两比较。结果4组血清的双向电泳图谱经软件匹配分析，并与基质辅助激光解析电离飞行时间质谱相结合，成功鉴定出结合珠蛋白、SAA1、SP40等30个差异蛋白质点，Kcluster聚类分析不同的变化模式。在差异蛋白质点中，7个蛋白质点均为结合珠蛋白，呈现由正常→肝炎→肝硬化持续下调、到肝癌又上调的模式。Western blot证实结合珠蛋白D链的表达与双向电泳表达相一致。结论在肝癌发生的动态过程中各疾病阶段的血清蛋白质差异表达有4种明显变化模式，可能为肝癌的早期诊断和预后提供依据；与肝癌发生发展相关的结合珠蛋白很可能是肝硬化发展到肝癌的一个潜在早期诊断标志物。; 舒宏康晓楠李梅郭坤孙璐李山谢丽邓敬桓秦雪刘银坤; 关键词：肝细胞蛋白质组双向电泳结合珠蛋白

利用组织芯片研究stahmin在肝癌相关肝病组织中的表达被引量：1: 2011年; 目的研究stathmin在肝癌相关肝病组织芯片的表达和作用。方法应用组织芯片技术,采用免疫组织化学SP法检测正常肝组织、HBV肝炎、肝硬化和肝癌组织中stathmin的表达。结果 stathmin在正常肝组织、肝炎、肝硬化组织中表达低(积分光密度分别为38.04±6.46、73.69±15.22、84.35±21.95);在肝癌组织中表达高,其中转移的肝癌组织较未转移的肝癌组织表达更高(积分光密度达605.23±99.03vs.387.66±77.41,P<0.01)。结论 stathmin的表达水平与肝癌的发生发展进程相关,为肝癌早期诊断治疗提供理论依据。; 甘淋刘晓燕陶忠桦何涛刘银坤; 关键词：肝肿瘤免疫组织化学 STATHMIN 组织芯片

乙肝纤维化分级相关血浆蛋白标志物的定量蛋白质组筛选被引量：5: 2011年; 非创伤性肝纤维化检测对于评价肝炎进程、临床治疗以及药效评价等方面,都具有非常重要的作用.通过N末端标签的蛋白质组定量手段,从血浆中筛选肝纤维化分级相关的蛋白候选标志物.首先利用目前纤维化诊断黄金标准——肝穿病理检测,获得纤维化不同分级的合格样本血浆,并对肝纤维化各级间的血浆混合样本进行了蛋白质组定量比较分析,发现了72个与乙肝纤维化分级呈明显相关性的血浆蛋白,构成了一个有重要参考价值的、纤维化分级诊断的候选蛋白标志物库.用WB法进一步验证了定量结果的准确性.利用IPA在线分析后获得了4个生理代谢网络图,提示这些差异蛋白在肝纤维化进程中代表的不同功能影响.总之,利用N末端标签定量蛋白质组技术,全面定量挖掘了血浆中与乙肝纤维化分级相关的差异蛋白及变化规律,对于加深肝纤维化发病机制的认识和理解具有很大帮助,同时也为肝脏纤维化临床诊断和治疗提供有益信息和参照.; 李树龙刘新魏来王慧芬张继阳魏汉东钱小红姜颖贺福初; 关键词：定量蛋白质组学肝脏纤维化标志物血浆乙型肝炎

螯合稀土金属标记蛋白质技术的建立与优化被引量：1: 2010年; 建立了一种基于螯合稀土金属标记蛋白质的技术,优化了影响标记效率的各种条件。在50mmol/LTEAB缓冲体系(pH7.5),DTPA与肽段摩尔比为100∶1,常温反应30min的条件下,DTPA标记完全;在100mmol/L乙酸铵缓冲液(pH6.0),稀土金属与DTPA摩尔比为4∶1,37℃反应1h的条件下,稀土金属螯合反应完全。考察了不同稀土金属的螯合效率,发现离子半径最小的Lu螯合效率最高。本方法被成功应用于肽混合物标记。; 米薇王晶应万涛蔡耘钱小红; 关键词：质谱

肝癌转移相关的骨桥蛋白表达及其糖基化的改变被引量：5: 2011年; 目的检测骨桥蛋白（OPN）在不同转移潜能肝癌细胞株及肝癌组织中的蛋白表达水平及其糖基化水平，探讨OPN糖基化改变与肝癌转移的相关陛及其意义。方法用免疫组织化学和Westemblot法检测人肝癌组织（非转移组6例、转移组7例）及不同转移潜能人肝癌细胞株（L02、Hep3B、MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3、HCCLM6）中OPN蛋白水平l采用免疫沉淀技术纯化肝癌组织中的OPN蛋白，并采用多重凝集素印迹技术检测转移与非转移肝癌组织中OPN糖基化水平差异。数据统计采用t检验和方差分析。结果OPN在不同转移潜能肝癌细胞株的表达差异具有统计学意义（F=5．04，P〈0．01）。在肝癌组织中，转移组OPN蛋白表达水平明显高于非转移组（t=2．447，P〈0．05），相对吸光度值分别为0．69±0．21和0．45±0．14。免疫沉淀技术成功纯化肝癌组织中的OPN蛋白，后续的凝集素印迹结果显示：与非转移组相比，转移组OPN蛋白对凝集素朝鲜槐、红腰果E型、蔓陀罗、刀豆素A的亲和力较低（P值均〈0．05）。结论OPN蛋白表达水平与肝癌转移潜能增强呈正相关；OPN蛋白的α2，3-唾液酸、平分型GlcNAc、多天线、偏二天线的糖链、高甘露糖型N一糖等糖基化水平改变可能与肝癌转移潜能增高有关。; 孙海艳李岩郭坤康晓楠孙淳王存刘银坤; 关键词：肿瘤转移糖基化凝集素类骨桥蛋白

肝内转移和多中心发生的多结节肝癌蛋白质表达谱的差异分析被引量：1: 2009年; 目的比较分析多结节肝癌的肝内转移癌灶和多中心发生癌灶的蛋白质表达谱，为更加准确的分子分型方法提供实验依据。方法对5例肝内转移（IM）和6例多中心发生（MO）的多结节肝癌按照结节大小分为IM1、IM2、MO1、MO2四组，联合双向凝胶电泳与质谱技术分析多结节肝癌的蛋白质表达谱；并用Western blot验证质谱结果。结果双向凝胶电泳联合质谱技术鉴定IM1、IM2、MO1、MO2四组共30个差异蛋白质点，确认为25种差异表达的蛋白质；GeneOntology分类显示其与细胞运动、信号转导、氧化还原、脂类代谢、氨基酸代谢等有关。结论多结节肝癌肝内转移和多中心发生的蛋白质表达不同；双向凝胶电泳联合质谱技术可作为二者分子分型的方法，有利于临床医师对肝癌患者实施治疗和判断预后。; 李梅郭坤康晓楠孙璐舒宏李若林徐明辉刘银坤秦雪李山; 关键词：肿瘤转移蛋白质组

基于母离子排除的串联质谱数据采集方法的研究被引量：1: 2010年; 生物样本中的蛋白质复杂程度很高,尚无一种分析方法能够全面分析复杂生物样本中的所有蛋白质。实验证明:重复的质谱分析能增加蛋白质的鉴定数量,但鉴定到的蛋白质冗余度很高,高丰度肽段被反复检出。为了降低鉴定冗余度,提高鉴定效率,对线性离子阱-傅立叶变换离子回旋共振质谱仪的串联质谱采集方法进行了研究,建立了基于母离子排除的串联质谱采集方法。此方法能极大降低二级质谱采集的冗余度,提高蛋白质的鉴定效率。; 米薇王晶应万涛贾伟蔡耘钱小红; 关键词：液相色谱-串联质谱

国家高技术研究发展计划(2006AA02A308)

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