国家自然科学基金(81071563)
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 相关作者：王珍祥陈亮李世荣李薇王文平更多>>
- 相关机构：第三军医大学西南医院蚌埠医学院第二附属医院广安市人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 增生性瘢痕成纤维细胞中分泌型凋亡相关蛋白1相互作用蛋白的研究被引量：2
- 2014年
- 目的 寻找与分泌型凋亡相关蛋白1 （secreted apoptosis-related protein1,SARP1）存在相互作用的蛋白质分子,分析其分子机制.方法 成功构建的重组SARP1腺病毒载体Ad-SARP1,转染进入原代培养的增生性瘢痕成纤维细胞（HSFb）.免疫共沉淀法沉淀出蛋白,经聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离后,用考马斯亮蓝染色,对SDS-PAGE胶上切取的电泳蛋白条带进行酶解与质谱分析,根据质谱分析获得的肽序列谱图自动进行数据库搜索.结果 在阳细胞对照组和导入Ad-SARP1感染的细胞当中,均共沉淀出7条蛋白带,相对分子质量分别约为93×103、43×103、40×103、37×103、31×103、26×103和12×103;在未加SARP1抗体组则没有沉淀出蛋白条带.分析蛋白条带得到6个可能与SARP1有相互作用的蛋白,分别为骨膜蛋白前体（periostin precursor或OSF-2）、牙周韧带相关蛋白1（asporin precursor或PLAP1）、磷酸甘油激酶1（phosphoglycerate kinase 1）、未知蛋白rCG50690、载脂蛋白（apolipoprotein A-I,Apo-AI）、硫氧还蛋白1（thioredoxin 1,TRX1）.结论 通过免疫共沉淀法结合液相色谱/质谱联用离子阱检测技术,可以获得SARP1的相互作用蛋白,为研究SARP1调控HSFb凋亡信号通路的作用机制提供了新的线索.
- 王儆王雪梅王珍祥陈亮李世荣
- 关键词：增生性瘢痕成纤维细胞免疫共沉淀相互作用蛋白SECRETED
- 骨桥蛋白基因质粒的构建及慢病毒包装的实验研究
- 2015年
- 目的:构建骨桥蛋白(OPN)基因的重组质粒,并包装慢病毒。方法:从C57BL/6野生型小鼠肾脏组织提取总RNA,逆转录为c DNA经特定引物扩增出OPN基因片段,并大量扩增,利用基因重组技术该基因片段与慢病毒载体p CDH-CMV-MCSEF1-GFP-T2A-Puro连接形成重组质粒,该重组质粒转染293T细胞进行慢病毒包装后测定滴度。结果:DNA测序证实提取的基因为OPN片段,慢病毒滴度达2.5×108TU/ml。结论:成功包装了含有OPN基因片段的慢病毒,为进一步研究OPN对各种细胞的生物学功能的影响奠定了基础。
- 李薇王文平陈亮王珍祥
- 关键词：骨桥蛋白重组质粒慢病毒小鼠
- Osteopontin调控骨髓间充质干细胞(MSCs)对促进糖尿病足创面愈合的作用被引量：1
- 2013年
- 目的:拟以C57糖尿病小鼠为研究对象,建立糖尿病小鼠OPN-/-MSCs组、糖尿病小鼠MSCs组及溶剂组对照组,采用小鼠创面愈合率检测、HE染色、免疫组化等试验方法,观察骨髓间充质干细胞(MSCs)及OPN基因敲除的MSCs对糖尿病小鼠创面愈合的影响。方法:原代提取MSCs及OPN-/-MSCs细胞;利用流式细胞仪检测细胞表面抗原;利用STZ溶液腹腔注射的方法建立糖尿病小鼠模型;将MSCs及OPN-/-MSCs分别注射至小鼠尾静脉,并观察创面愈合情况。结果:成功提取和培养了两组细胞,并成功建立了糖尿病小鼠模型;溶剂组小鼠完全愈合用了19.90±0.55天,OPN-/-MSCs注射组完全愈合用了18.52±0.75天,MSCs尾静脉注射糖尿病组小鼠用了13.70±0.35天。尾静脉注射MSCs组创面愈合时间明显短于普通糖尿病小鼠组。结论:通过观察三组糖尿病小鼠创面愈合情况,证实MSCs尾静脉注射糖尿病组小鼠比OPN-/-MSCs注射组小鼠和溶剂组小鼠的创面愈合速度快,说明OPN具有调控骨髓间充质干细胞促进创面愈合的作用,为临床治疗糖尿病足提供新的理论依据。
- 孟昊李薇王珍祥梁自文
- 关键词：OPN骨髓间充质干细胞糖尿病小鼠创面愈合
- OPN影响小鼠MSCs迁移及其相关分子机制研究被引量：3
- 2014年
- 目的探讨外源骨桥蛋白(OPN)对小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)迁移能力的影响。方法采用OPN-/-小鼠和野生型C57小鼠,进行MSCs的原代分离培养,流式细胞术鉴定分拣MSCs细胞传代培养;Transwell迁移实验检测OPN是否能够诱导MSCs定向迁移;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测OPN、CD44和Integrinβ1相关蛋白的表达变化。结果传代后的细胞形态符合MSCs特征,细胞表达CD44和CD105,但不表达CD34,符合MSCs表面标记抗原的一般规律。0.5μg/mL的OPN能增加体外MSCs的细胞迁移,而野生型C57小鼠MSCs细胞迁移为最多。同时,这一趋势与OPN作用时间正相关,与OPN-/-小鼠相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。0.5μg/mL重组OPN蛋白量明显增加,但仍低于野生型C57小鼠,差异有统计学意义(P<0.01)。若以OPN-/-小鼠为基数100,0.5μg/mL重组OPN组CD44、Integrinβ1蛋白表达增多,差异有统计学意义(P<0.01);而野生型C57小鼠细胞CD44、Integrinβ1蛋白表达最多,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 OPN可以通过上调CD44、Integrinβ1的表达,促进MSCs定向迁移。
- 李薇王文平陈亮王珍祥李世荣
- 关键词：骨桥蛋白质骨髓间充质干细胞细胞运动
- 分泌型凋亡相关蛋白1调控成纤维细胞凋亡的研究
- 2013年
- 目的探讨分泌型凋亡相关蛋白1（secretedapoptosis-relatedprotein1，SARP1）调控增生性瘢痕患者的成纤维细胞（fibroblast，FB）凋亡的作用。方法构建SARP1腺病毒载体（Ad-sARPl）．感染瘢痕患者的皮肤FB，促进其表达SARP1蛋白，观察其蛋白表达后人FB增殖与凋亡的变化，明确SARP1蛋白对FB的调控作用，并通过转移酶介导的三磷酸脱氧鸟苷-生物素刻痕末端标记（TuNEL）方法、流式细胞仪（FACs）分析细胞增殖与凋亡动态变化。结果成功构建Ad-SARP1，并能够感染人FB，通过逆转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）检测到SARP1的mRNA值明显增加，Western印迹方法检测SARP1蛋白表达明显增多（P〈0．05）；其蛋白表达后四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法检测，与带荧光的腺病毒空载体（Ad-EGFP）及对照组相比，Ad-SARP1感染的FB增殖活力均显著增高；TUNEL检测Ad-SARP1感染FB前后细胞凋亡结果显示，细胞凋亡明显受到抑制，凋亡阳性细胞变少，接近瘢痕成纤维细胞（HSFB）凋亡；FACS分析表明，感染组FB的细胞凋亡指数与对照组相比明显下降（P〈0．01）。结论sARP1参与调控增生性瘢痕患者的FB功能，抑制细胞凋亡，促进细胞增殖加快。
- 任章霞陈亮陶熹于攀王珍祥李世荣
- 关键词：成纤维细胞细胞凋亡增生性瘢痕
